雅安藏茶對(duì)脂肪酶的抑制作用

邊金霖，郭金龍，李品武，杜 曉，2，*

（1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 國(guó)家茶檢中心（四川）研發(fā)中心，四川 雅安 625014；2.國(guó)家茶葉質(zhì)量檢驗(yàn)中心（四川籌），四川 雅安 625000）

雅安藏茶對(duì)脂肪酶的抑制作用

邊金霖1，郭金龍1，李品武1，杜 曉1，2，*

（1.四川農(nóng)業(yè)大學(xué) 國(guó)家茶檢中心（四川）研發(fā)中心，四川 雅安 625014；2.國(guó)家茶葉質(zhì)量檢驗(yàn)中心（四川籌），四川 雅安 625000）

從雅安藏茶中系統(tǒng)萃取分離出7 個(gè)級(jí)分，使用酶標(biāo)儀與96 孔板酶反應(yīng)體系，對(duì)雅安藏茶水浸出物及各個(gè)級(jí)分抑制脂肪酶的活性成分進(jìn)行系統(tǒng)篩選及評(píng)價(jià)。結(jié)果表明：雅安藏茶水浸出物（0.018～0.360 mg/mL）及其7 個(gè)級(jí)分的添加質(zhì)量濃度（0.011～0.216 mg/mL）與其對(duì)脂肪酶活性的抑制作用之間均具有顯著的量效關(guān)系；對(duì)脂肪酶活性的最大抑制率進(jìn)行比較，雅安藏茶水浸出物為37.14%、兒茶素（catechin，C）級(jí)分為44.67%、茶黃素（theafl avin，TF）級(jí)分為39.46% 、茶褐素（theabromine，TB）級(jí)分為30.31%、茶紅素Ⅱ（thearubiginsⅡ，TRsⅡ）級(jí)分為29.53%；結(jié)合主要成分含量和回歸分析，各級(jí)分所含活性成分抑制脂肪酶活性能力大小順序?yàn)椋簝翰杷兀静椟S素＞茶紅素。

雅安藏茶；活性級(jí)分；高通量篩選；脂肪酶活性；抑制作用

雅安藏茶為我國(guó)黑茶類的典型品種，是源于四川南路邊茶的傳統(tǒng)高端產(chǎn)品。雅安藏茶一直作為藏區(qū)的生活必需品，日常飲用藏茶具有消食、解膩、降脂等功效［1］。近年來(lái)，隨著內(nèi)地人群對(duì)藏茶功效的逐步認(rèn)識(shí)，“藏茶漢飲”興起，開始利用其保健功能。藏茶加工采取了獨(dú)特的“渥堆”（后發(fā)酵）工藝，使其所含的大量?jī)翰杷仡愇镔|(zhì)發(fā)生了（非）酶性深度氧化，形成了豐富的兒茶素類氧化產(chǎn)物（統(tǒng)稱茶色素類），這些復(fù)雜生成物極有可能賦予藏茶特殊的保健價(jià)值，由此引起研究者的關(guān)注。相關(guān)研究認(rèn)為，四川邊茶中的茶褐素提取物對(duì)高血脂模型小鼠的血脂具有明顯降低作用［2］；四川邊茶萃取物對(duì)脂肪酸合酶有明顯的抑制作用［3］；此外，還有青磚茶［4-6］、茯磚茶［6］抑制脂肪酶活性的報(bào)道；研究認(rèn)為，緊壓磚茶（黑茶類）對(duì)脂肪酶活性抑制能力強(qiáng)于綠茶［7-9］；上述研究表明，黑茶類（包括緊壓磚茶）的降脂效果普遍優(yōu)于其他茶類［10-13］。關(guān)于雅安藏茶的降脂、減肥效果與作用研究方面，本課題組較系統(tǒng)開展了雅安藏茶品質(zhì)成分［14］、活性級(jí)分的分離［15］及抑制α-淀粉酶的活性的評(píng)價(jià)［1］等研究工作。

脂肪酶（lipase）亦稱酰基甘油水解酶（acylglycerolhydrolases），廣泛存在于人體內(nèi)，是消化系統(tǒng)中吸收和利用脂肪的關(guān)鍵酶和限速酶。脂肪酶可以催化油脂水解，酯交換、合成等反應(yīng)，通過(guò)抑制脂肪酶活性可以降低脂肪分解產(chǎn)物的吸收，直接影響體內(nèi)脂肪的積累和合成，進(jìn)而起到減肥的效果［16-21］。通過(guò)對(duì)雅安藏茶抑制脂肪酶的活性實(shí)驗(yàn)研究，將對(duì)其消食、解膩、降脂等功效加以間接實(shí)驗(yàn)證實(shí)；篩選及評(píng)價(jià)藏茶的活性級(jí)分，旨在揭示其所含有的功能成分，并闡釋雅安藏茶的功效機(jī)制。

本研究采用有機(jī)溶劑系統(tǒng)分離法，從雅安藏茶中分離出7 種藏茶級(jí)分，使用酶標(biāo)儀、96 孔板酶活性檢測(cè)反應(yīng)體系，分別測(cè)定藏茶水浸出物及7 種級(jí)分抑制脂肪酶的活性，并采用通徑分析與數(shù)學(xué)模型對(duì)活性級(jí)分進(jìn)行篩選與評(píng)價(jià)。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

雅安藏茶 雅安市友誼茶業(yè)有限公司。

脂肪酶（豬胰中提取，酶活力≥30 000 U/g） 北京奧博星公司；Tris、橄欖油、無(wú)水乙醇、去氧膽酸鈉、石油醚、氯仿、乙酸乙酯、乙醚、正丁醇等均為國(guó)產(chǎn)分析純。

1.2儀器與設(shè)備

Bio-Tek ELX800酶標(biāo)儀 美國(guó)Bio-Tek公司；UV-2300紫外-可見分光光度計(jì) 日本日立公司；精密微量移液器 上海佳安分析儀器廠；96 孔培養(yǎng)板 北京鴻躍創(chuàng)新科技有限公司；RE-2000B旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器 上海人和科學(xué)儀器有限公司。

1.3方法

1.3.1雅安藏茶級(jí)分的分離制備

參照Bailey［22］和楊賢強(qiáng)［23］等建立的分離方法，常溫下將雅安藏茶磨碎茶樣2.0 kg，用體積分?jǐn)?shù)70%的乙醇溶液共6 000 mL浸提4 次，合并過(guò)濾浸提液，于（50±5） ℃減壓溶劑，得到濃縮水溶液約3 500 mL，先用石油醚脫除蠟質(zhì)及脂質(zhì)物質(zhì)，再以1：1（V/V）的系列溶劑依次萃取水溶液層：氯仿萃取2 次、乙酸乙酯萃取6 次、乙醚萃取6 次和正丁醇萃取6 次。將各萃取液分別回收萃取劑后，于（50±5） ℃減壓干燥，抽氣脫除殘余溶劑，即得到雅安藏茶的氯仿萃取級(jí)分、乙醚萃取級(jí)分、乙醚萃余層級(jí)分、弱堿性水級(jí)分、正丁醇萃取級(jí)分、正丁醇萃余層級(jí)分和石油醚萃取級(jí)分7 個(gè)雅安藏茶級(jí)分（圖1）［14-15］。對(duì)7 個(gè)級(jí)分進(jìn)行主要理化成分和抑制脂肪酶活性進(jìn)行測(cè)定。

圖1　雅安藏茶提取分離流程圖Fig.1 Flow chart for extraction and separation of different fractions from Ya’an Tibetan tea

1.3.2雅安藏茶及其各級(jí)分主要成分含量測(cè)定

各級(jí)分主要成分測(cè)定方法［24-25］：茶黃素、茶紅素和茶褐素含量采用系統(tǒng)比色法測(cè)定；咖啡堿含量采用紫外分光光度法測(cè)定；兒茶素總量采用香蘭素比色法測(cè)定。

1.3.3脂肪酶的活性比較

1.3.3.1茶樣和試劑的制備

供試茶樣水浸出物的制備：準(zhǔn)確稱取雅安藏茶磨碎茶樣1.00 g，加100 mL沸蒸餾水，在100 ℃恒溫水浴中浸提45 min，冷卻，過(guò)濾，靜置30 min，作為供試茶樣溶液備用。

雅安藏茶級(jí)分溶液的配制：準(zhǔn)確稱取1.3.1節(jié)制得的各級(jí)分樣品1.00 g，定容至100 mL，作為供試級(jí)分樣品溶液備用。

橄欖油-乙醇液配制：稱取純化橄欖油2 g，溶于無(wú)水乙醇中，定容至200 mL。

Tris緩沖液（pH 8.8）配制：稱取Tris 3 g，去氧膽酸鈉6 g，溶于蒸餾水中，稀釋到1 L，用濃鹽酸調(diào)pH值至8.8。

橄欖油乳劑配制：取500 mL Tris緩沖液放入燒杯內(nèi)，在磁力攪拌器攪拌下，緩緩加入7.5 mL橄欖油-乙醇液（吸管尖端應(yīng)插入液面以下），使之呈均勻乳濁液，冰箱保存。

1.3.3.2脂肪酶標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制［26］

取4 支反應(yīng)管，分別加入0.17 μmol/L橄欖油乳劑1.0、2.0、3.0、4.0 mL，然后用Tris緩沖液補(bǔ)充到5 mL，相當(dāng)于甘油三酯濃度分別為0.34、0.51、0.68、0.85 μmol/L，400 nm波長(zhǎng)處比色，以光密度（OD）值為縱坐標(biāo)，甘油三酯的濃度為橫坐標(biāo)，得到標(biāo)準(zhǔn)曲線為：Y =1.426 1X-0.106 6，R2=0.999 9。

1.3.3.3脂肪酶活力的測(cè)定

參考高通量篩選原理［26-27］，選用酶標(biāo)儀，在96 孔板中形成反應(yīng)體系，篩選雅安藏茶不同級(jí)分的不同質(zhì)量濃度梯度試劑對(duì)脂肪酶活性的抑制效果，從而達(dá)到篩選雅安藏茶中活性級(jí)分的目的。采用甘油三酯比濁法［28］測(cè)定：先加入橄欖油乳劑160 μL，30 ℃預(yù)熱5 min，以不加雅安藏茶級(jí)分供試液為對(duì)照，實(shí)驗(yàn)組依次加入不同質(zhì)量濃度雅安藏茶級(jí)分供試液（供試液質(zhì)量濃度為0.1 mg/mL，按1、2、4、6、8、10、12、14、16、18、20 μL分別加入）、酶液20 μL、蒸餾水，反應(yīng)體系總體積200 μL，立即振蕩5 s，以Tris緩沖液調(diào)零點(diǎn)，迅速用分光光度計(jì)在400 nm波長(zhǎng)處讀取第一次光密度值（OD1）。然后過(guò)10 min讀取第二次光密度（OD2），用軟件KC4分析結(jié)果。

脂肪酶活力單位定義為：根據(jù)式（2），1 g固體酶粉，在pH 7.5條件下，水解脂肪每分鐘產(chǎn)生1 μmoL的脂肪酸，即為1個(gè)脂肪酶活力單位（U）。半抑制濃度IC50為脂肪酶抑制率達(dá)到50%時(shí)雅安藏茶水浸出物及其級(jí)分的質(zhì)量濃度。脂肪酶活力按照以下公式計(jì)算：

式中：OD1、OD2為測(cè)定的光密度值；1.426 1、0.106 6為標(biāo)準(zhǔn)曲線測(cè)得；2 000為稀釋倍數(shù)。

1.3.4雅安藏茶級(jí)分抑制脂肪酶活性能力的數(shù)學(xué)模型建立

根據(jù)一次多項(xiàng)式回歸模型，利用逐個(gè)比較法的矩陣變換計(jì)算方法，構(gòu)建雅安藏茶級(jí)分對(duì)脂肪酶抑制作用的數(shù)學(xué)模型。

式中：Y為脂肪酶的最大抑制率/%；X1為咖啡堿含量/%；X2為茶黃素含量/%；X3為茶紅素含量/%；X4為茶褐素含量/%；X5為兒茶素總量/%。

2　結(jié)果與分析

2.1雅安藏茶不同級(jí)分中內(nèi)含物質(zhì)的組分和含量

從雅安藏茶中分離制備得到7 種級(jí)分。各個(gè)級(jí)分所含5 種主要內(nèi)含成分的測(cè)定結(jié)果如表1所示。雅安藏茶級(jí)分分離的結(jié)果表明，系統(tǒng)萃取分離具有明顯分級(jí)作用，不同級(jí)分所含主要內(nèi)含成分及其含量均差異顯著（P＜0.05）。氯仿萃取級(jí)分的主要成分是咖啡堿，其含量為74.81%；乙醚萃取級(jí)分主要是茶黃素，其含量高達(dá)63.97%；乙醚萃余層級(jí)分中兒茶素含量高達(dá)95.11%；正丁醇萃余層級(jí)分主要是茶褐素，含量為41.20%；茶紅素主要存在于弱堿性水級(jí)分和正丁醇萃取級(jí)分中。據(jù)Lee［29］和Muzolf［30］等的萃取分離研究證明茶紅素Ⅰ保留在弱堿性水層中，茶紅素Ⅱ保留在正丁醇萃取物中。可以推斷弱堿性水級(jí)分中，主要是茶紅素Ⅰ，含量為25.23%；正丁醇萃取級(jí)分主要是茶紅素Ⅱ，其含量高達(dá)44.26%；石油醚萃取級(jí)分幾乎不含有效成分，主要為蠟質(zhì)類物質(zhì)［31-32］。根據(jù)各級(jí)分內(nèi)含物質(zhì)的含量高低，氯仿萃取級(jí)分、乙醚萃取級(jí)分、乙醚萃余層級(jí)分、弱堿性水級(jí)分、正丁醇萃取級(jí)分和正丁醇萃余層級(jí)分可分別視為咖啡堿（caffeine）級(jí)分、茶黃素（theaflavin，TF）級(jí)分、兒茶素（catechin，C）級(jí)分、茶紅素Ⅰ（thearubiginsⅠ，

表1　雅安藏茶各級(jí)分的主要內(nèi)含成分含量Table1 Contents of the main components in different solvent fractions from Ya’an Tibetan tea　%

TRsⅠ）級(jí)分、茶紅素Ⅱ（thearubiginsⅡ，TRsⅡ）級(jí)分和茶褐素（theabromine，TB）級(jí)分。

2.2雅安藏茶水浸出物對(duì)脂肪酶活性的影響

圖2　雅安藏茶水浸出物對(duì)脂肪酶活性的影響Fig.2 Inhibitory effect of water extract from Ya’an Tibetan tea on lipase activity

水浸出物是指沸水沖泡茶葉可以溶出物質(zhì)的總和。雅安藏茶水浸出物對(duì)脂肪酶活性的抑制效果及其抑制率的變化情況如圖2所示。結(jié)果表明，隨著藏茶試液質(zhì)量濃度增加，脂肪酶活性受到的抑制作用顯著增強(qiáng)（F=4.51＞F0.05（12，23）=2.20），二者之間具有量效關(guān)系。當(dāng)供試液質(zhì)量濃度在0.018～0.180 mg/mL范圍內(nèi)，脂肪酶活力由251.88 U降低至184.91 U，下降明顯，量效曲線呈直線下降趨勢(shì)；當(dāng)供試液質(zhì)量濃度在0.200～0.360 mg/mL范圍內(nèi)，脂肪酶活性降低趨勢(shì)逐漸緩慢；但當(dāng)水浸出物添加質(zhì)量濃度達(dá)到0.360 mg/mL，脂肪酶活力達(dá)到最小值，僅為176.16 U，脂肪酶活性被顯著抑制。

由圖3可知，隨著水浸出物添加質(zhì)量濃度的增加，對(duì)脂肪酶活性的抑制率逐漸上升，也呈顯著的劑量依賴性。當(dāng)水浸出物添加質(zhì)量濃度達(dá)到0.360 mg/mL，雅安藏茶對(duì)脂肪酶的抑制率最強(qiáng)為37.14%，且這個(gè)劑量遠(yuǎn)低于日常藏茶飲用的5 mg/mL，這預(yù)示著日常飲用雅安藏茶具有減肥降脂的作用。

圖3　雅安藏茶水浸出物對(duì)脂肪酶活性抑制率的影響Fig.3 Lipase inhibitory activity of water extract from Ya’an Tibetan tea at various concentrations

2.3雅安藏茶不同級(jí)分對(duì)脂肪酶活性的影響

2.3.1雅安藏茶不同級(jí)分對(duì)脂肪酶的抑制效果

為了進(jìn)一步探明雅安藏茶中活性成分與脂肪酶抑制作用的關(guān)系，分別測(cè)定加入不同級(jí)分雅安藏茶對(duì)脂肪酶活性的影響。測(cè)定結(jié)果（表2）顯示，加入各級(jí)分雅安藏茶后脂肪酶活性均出現(xiàn)不同程度的抑制現(xiàn)象，但酶活性降低幅度不同。以最大抑制率為標(biāo)準(zhǔn)，雅安藏茶中不同級(jí)分的脂肪酶最大抑制率差異極顯著（F=8 666.00＞F0.01（6，14）=4.46）。各個(gè)級(jí)分對(duì)脂肪酶的抑制能力從高到低依次為：兒茶素（C）級(jí)分＞茶黃素（TF）級(jí)分＞茶褐素（TB）級(jí)分＞茶紅素Ⅱ（TRsⅡ）級(jí)分＞咖啡堿級(jí)分＞茶紅素Ⅰ（TRsⅠ）級(jí)分。其中兒茶素（C）級(jí)分對(duì)脂肪酶的抑制作用最強(qiáng)，最大抑制率為44.67%；茶黃素（TF）級(jí)分、茶褐素（TB）級(jí)分和茶紅素Ⅱ（TRsⅡ）級(jí)分對(duì)脂肪酶的抑制作用較強(qiáng)，其最大抑制率均高于29%以上，而其他級(jí)分對(duì)脂肪酶的抑制能力不強(qiáng)。此外，對(duì)于不同級(jí)分，與雅安藏茶水浸出物相比，兒茶素（C）級(jí)分和茶黃素（TF）級(jí)分的最大抑制率均不同程度地高于雅安藏茶水浸出物，且比雅安藏茶水浸出物分別高20.27%和6.24%。

表2　雅安藏茶不同級(jí)分對(duì)脂肪酶活性的抑制能力Table2 Inhibitory effects of Ya’an Tibetan tea fractions on lipase activity

2.3.2不同質(zhì)量濃度雅安藏茶級(jí)分對(duì)脂肪酶活性的抑制效果

進(jìn)一步分析明顯抑制脂肪酶活性的4 種級(jí)分，即兒茶素（C）級(jí)分、茶黃素（TF）級(jí)分、茶褐素（TB）、茶紅素Ⅱ（TRsⅡ）級(jí)分對(duì)脂肪酶活性的影響，如圖4、5所示。與雅安藏茶水浸出物變化一致，4 種雅安藏茶萃取級(jí)分均對(duì)脂肪酶具有抑制作用，表現(xiàn)為隨供試液質(zhì)量濃度由0.011 mg/L增加至0.216 mg/L，脂肪酶活性逐漸降低，抑制率逐漸增加，呈劑量依賴效應(yīng)。在0.011～0.216 mg/L質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，兒茶素（C）級(jí)分使脂肪酶的酶活力從271.86 U降低至150.43 U，其最大抑制率達(dá)到44.67%。從圖中可以看出，兒茶素（C）級(jí)分在較高質(zhì)量濃度范圍（0.130～0.216 mg/L）脂肪酶活力的降低更快，此時(shí)對(duì)脂肪酶的抑制作用明顯更大；同兒茶素（C）級(jí)分類似，茶黃素（TF）級(jí)分也表現(xiàn)為在高質(zhì)量濃度范圍內(nèi)，抑制作用最明顯的規(guī)律，0.130～0.216 mg/L質(zhì)量濃度的茶黃素（TF）級(jí)分使脂肪酶的活力大大下降，由242.41 U降低至164.58 U，酶活力的降低率為32.11%，其最大抑制率達(dá)到39.46%；隨質(zhì)量濃度增加，茶紅素Ⅱ（TRsⅡ）級(jí)分和茶褐素（TB）對(duì)脂肪酶抑制作用明顯增加，其最大抑制率分別為29.53%和30.31%，相對(duì)于兒茶素（C）級(jí)分、茶黃素（TF）級(jí)分，這2個(gè)級(jí)分抑制率雖然也呈現(xiàn)逐漸增加的趨勢(shì)，但變化較為緩慢。

圖4　雅安藏茶不同質(zhì)量濃度的4 種級(jí)分對(duì)脂肪酶活性的影響Fig.4 Inhibitory effects of four kinds of tea polyphenols from Ya’an Tibetan tea on lipase activity

圖5　雅安藏茶不同質(zhì)量濃度的4 種級(jí)分對(duì)脂肪酶活性抑制率的影響Fig.5 Lipase inhibitory activity of four kinds of tea polyphenols from Ya’an Tibetan tea at various concentrations

2.3.3構(gòu)建回歸數(shù)學(xué)模型評(píng)價(jià)抑制脂肪酶活性級(jí)分的成分

根據(jù)式（3）的一次多項(xiàng)式回歸模型，以雅安藏茶級(jí)分中所含的有效成分對(duì)脂肪酶抑制作用進(jìn)行分析。采用無(wú)代回的高斯-約當(dāng)消去法求解正規(guī)方程組，剔除非顯著相關(guān)項(xiàng)X1、X4，得到式（4）。

方程的相關(guān)系數(shù)R2=0.99，F(xiàn)=3 380.31。F檢驗(yàn)法表明，式中引入自變量（茶黃素X2、茶紅素X3、兒茶素X5）與因變量（最大抑制率Y）存在顯著性差異（P＜0.05）。雅安藏茶中活性物質(zhì)在參與抑制脂肪酶活性是一個(gè)非常復(fù)雜的過(guò)程，在此顯著水平下，通過(guò)構(gòu)建數(shù)學(xué)模型初步認(rèn)為參與脂肪酶抑制作用的活性成分主要為兒茶素、茶黃素和茶紅素。

為了考察進(jìn)一步相關(guān)因變量和自變量之間的因果關(guān)系，本實(shí)驗(yàn)采用SPSS 18.0數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)所測(cè)結(jié)果，進(jìn)行通徑分析，將通徑系數(shù)分解為直接作用系數(shù)和間接作用系數(shù)的代數(shù)和，從而進(jìn)行原因?qū)Y(jié)果的直接和間接作用分析。自變量X2、X3、X5對(duì)Y的直接作用分別為：P2Y=0.589，P3Y=-0.059，P5Y=0.854。各自變量之間的相關(guān)系數(shù)分別是r23=r32=-0.466，r25=r52=-0.115，r35=r53= -0.032，X2通過(guò)X3、X5對(duì)Y的間接通徑系數(shù)分別為r23P3Y+ r25P5Y，同理，可以得出X3、X5的間接通徑系數(shù)。由通徑分析理論得出：自變量X2對(duì)Y的之間的簡(jiǎn)單相關(guān)系數(shù)分別為r2= P2Y+r23P3Y+r25P5Y=0.518，同理，計(jì)算出r3和r5對(duì)Y的之間的簡(jiǎn)單相關(guān)系數(shù)分別為-0.360和0.788。

不同自變量X對(duì)最大抑制率Y的影響作用差異較大，簡(jiǎn)單相關(guān)系數(shù)、直接通徑系數(shù)和間接通徑系數(shù)的數(shù)據(jù)列于表3。3 個(gè)自變量X對(duì)最大抑制率Y的直接影響和相關(guān)系數(shù)規(guī)律一致，均表現(xiàn)其對(duì)脂肪酶的最大抑制率影響作用大小順序，分別為兒茶素＞茶黃素＞茶紅素，說(shuō)明兒茶素對(duì)脂肪酶活性的抑制具有重要的作用，其中兒茶素和茶黃素與抑制率呈一定的正相關(guān)，茶紅素與抑制率呈一定負(fù)相關(guān)性。

表3　簡(jiǎn)單相關(guān)系數(shù)的分解Table3 Resolution of simple correlation coefficients

3　討 論

雅安藏茶水浸出物對(duì)脂肪酶活性的抑制作用之間均有顯著的量效關(guān)系。已有研究顯示，脂肪酶［20-21］基本組成單位通常僅為一條多肽鏈，其催化活性僅取決于它的蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。據(jù)此可以推測(cè)，雅安藏茶水浸出物中的某些活性成分可能通過(guò)與脂肪酶的結(jié)合位點(diǎn)接觸的方式，改變其蛋白結(jié)構(gòu)，故表現(xiàn)為隨其濃度增加，脂肪酶活性逐漸減弱的變化規(guī)律。

研究結(jié)果顯示飲用雅安藏茶可以抑制脂肪酶活性，在某種程度上能減少來(lái)自飲食的脂肪吸收，預(yù)示其具有一定的減肥效果。本實(shí)驗(yàn)所萃取分離的7 種級(jí)分均對(duì)脂肪酶活性有不同程度的抑制效果，其中兒茶素（C）級(jí)分、茶黃素（TF）級(jí)分、茶褐素（TB）級(jí)分和茶紅素Ⅱ（TRsⅡ）級(jí)分對(duì)脂肪酶活性的抑制能力較強(qiáng)，而咖啡堿（caffeine）級(jí)分和茶紅素Ⅰ（TRsⅠ）級(jí)分對(duì)脂肪酶活性的抑制作用明顯較低。這與程倩［5］和趙婷婷［33］等的結(jié)果基本一致。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，隨著4 種雅安藏茶級(jí)分供試液質(zhì)量濃度增加，脂肪酶活性逐漸減弱，在0.216 mg/L時(shí)，脂肪酶的活性達(dá)到最低，抑制率達(dá)到最高。在此過(guò)程中脂肪酶活性呈現(xiàn)明顯的動(dòng)態(tài)變化，這種變化可能與雅安藏茶中生物活性物質(zhì)和脂肪酶蛋白相互作用有關(guān)［20-21］。

雅安藏茶對(duì)脂肪酶活性的抑制作用是由各種內(nèi)含物綜合作用的結(jié)果，造成了研究抑制脂肪酶活性物質(zhì)的復(fù)雜性。本實(shí)驗(yàn)選取雅安藏茶中咖啡堿、氨基酸、茶黃素、茶紅素、茶褐素和兒茶素5 種重要內(nèi)含物進(jìn)行分析，采用主要成分含量和回歸分析，均獲得較為一致的篩選結(jié)果，即兒茶素、茶黃素和茶紅素為抑制脂肪酶活性的主要活性成分。

大量研究表明，兒茶素類物質(zhì)可調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝，有很好的減肥降脂的功效［34-36］，本實(shí)驗(yàn)有力地支撐了上述觀點(diǎn)。此外有研究表明，黑茶在渥堆中的兒茶素組成發(fā)生了明顯的變化，表現(xiàn)為沒(méi)食子兒茶素（GC）所占的比例較高的特征［37-38］。Nakai等［39］發(fā)現(xiàn)沒(méi)食子?；拇嬖谀茉鰪?qiáng)兒茶素對(duì)脂肪酶活性的抑制作用。因此認(rèn)為雅安藏茶中抑制脂肪酶活性的兒茶素類物質(zhì)可能是沒(méi)食子兒茶素，其可能通過(guò)與脂肪酶發(fā)生共價(jià)鍵合［23］，或與脂肪酶胰脂酶表面暴露的許多官能團(tuán)如有游離的羥基、酚羥基、巰基、羧基、氨基等發(fā)生烷基化、?；?、醚化等反應(yīng)［40-41］，進(jìn)而抑制脂肪酶活性，降低食物中脂肪分解，從而減少人體對(duì)脂類物質(zhì)的吸收，增加外源脂類物質(zhì)的排出。不同茶類兒茶素在降低脂肪酶活性方面是否存在差異，以及其調(diào)節(jié)脂肪代謝的作用機(jī)理等均有待進(jìn)一步研究。

現(xiàn)今對(duì)黑茶調(diào)節(jié)脂肪代謝的認(rèn)識(shí)集中于兒茶素，茶褐素等內(nèi)含物質(zhì)上，關(guān)于茶黃素和茶紅素的研究較少，本實(shí)驗(yàn)揭示了雅安藏茶中茶黃素和茶紅素用量與脂肪酶活性抑制效果之間存在量效關(guān)系，其中茶黃素能明顯抑制脂肪酶活性，而茶紅素則有相反的作用。這也在一定程度上解釋了兒茶素（C）級(jí)分和茶黃素（TF）級(jí)分的最大抑制率為什么高于雅安藏茶水浸出物的現(xiàn)象。此外，已有研究證實(shí)：植物黃酮［42］、普諾爾成分［43］（黑茶發(fā)酵過(guò)程中產(chǎn)生的獨(dú)特物質(zhì)）、沒(méi)食子酸和皂苷［44-45］具有較強(qiáng)的脂肪酶抑制作用，這些成分能起到防止脂肪堆積的作用。目前研究表明緊壓磚茶等黑茶類的效果要優(yōu)于綠茶類［6-8］，大概與這些物質(zhì)的存在有關(guān)，這些還有待進(jìn)一步的實(shí)驗(yàn)研究。

由于本研究中沒(méi)有開展雅安藏茶對(duì)脂肪的消化率測(cè)定，有關(guān)雅安藏茶對(duì)人體脂類物質(zhì)的消化率情況還有待進(jìn)一步研究。此外，實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明兒茶素及其氧化物對(duì)脂肪酶的抑制發(fā)揮著重要作用，是否暗示其能有效防止脂肪堆積，是否可通過(guò)調(diào)整酶系體系中諸多影響因素提高雅安藏茶對(duì)脂肪酶的抑制作用等還有待更為深入的研究。

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Inhibition of Lipase Activity by Ya’an Tibetan Tea

BIAN Jinlin1， GUO Jinlong1， LI Pinwu1， DU Xiao1，2，*
（1. Research and Development Center， National Tea Inspection Center （Sichuan）， Sichuan Agricultural University，Ya’an 625014， China； 2. National Tea Quality Inspection Center （Sichuan）， Ya’an 625000， China）

Seven fractions from the crude ethanol extract of Ya’an Tibetan tea were separated by organic solvents. The seven fractions and the water extract of Ya’an Tibetan tea were analyzed by ELISA using a 96-well microplate reader for lipase-inhibitory activities. The results showed that all the ethanol extract fractions （0.011-0.216 mg/mL） and the water extract （0.018-0.360 mg/mL） possessed lipase-inhibitory activities with a significant concentration-effect relationship. The maximum inhibitory rate of the water extract against lipase was 37.14%， while those of catechin （C）， theafl avin （TF），theabromine （TB） and thearubiginsⅡ （TRsⅡ） fractions extracted from Ya’an Tibetan tea were 44.67%， 39.46%， 30.31% and 29.53%， respectively. Lipase was inhibited in decreasing order by catechin， theafl avin and thearubigins from Ya’an Tibetan tea， as indicated by analysis of the major components and regression analysis.

Ya’an Tibetan tea； active fraction； high-throughput screening； lipase activity； inhibition

S571.1；Q556.2

A

1002-6630（2015）03-0023-06

10.7506/spkx1002-6630-201503005

2014-05-12

“十二五”國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目（2013BAD20B07）

邊金霖（1987—），女，助教，碩士，研究方向?yàn)椴枞~審評(píng)與檢驗(yàn)。E-mail：347778412@qq.com

杜曉（1963—），男，教授，博士，研究方向?yàn)椴枞~天然產(chǎn)物工程。E-mail：duxiao@vip.163.com