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    生雞內(nèi)金對(duì)乳腺增生病大鼠的作用研究

    2015-10-15 08:06:04胡建平李珊珊劉元新
    關(guān)鍵詞:血清模型

    胡建平 李珊珊 劉元新

    (1江西省中醫(yī)藥研究院南昌330046;2江西中醫(yī)藥大學(xué)2013級(jí)研究生南昌330004;3江西省九江縣中醫(yī)院九江332100)

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    生雞內(nèi)金對(duì)乳腺增生病大鼠的作用研究

    胡建平1李珊珊2劉元新3

    (1江西省中醫(yī)藥研究院南昌330046;2江西中醫(yī)藥大學(xué)2013級(jí)研究生南昌330004;3江西省九江縣中醫(yī)院九江332100)

    目的:研究生雞內(nèi)金對(duì)乳腺增生大鼠的影響,并探討其作用機(jī)制。方法:通過(guò)注射苯甲酸雌二醇及黃體酮建立大鼠乳腺增生模型。分空白組、模型組、逍遙組、逍金組、內(nèi)金組給予相應(yīng)治療藥物后,觀察各組大鼠乳房形態(tài)變化,檢測(cè)其血液流變學(xué)、血清激素水平,并取大鼠乳腺組織進(jìn)行病理學(xué)檢測(cè),對(duì)各組結(jié)果進(jìn)行比較分析。結(jié)果:生雞內(nèi)金對(duì)肝郁脾虛證乳腺增生病大鼠的乳房外形及病理變化具有較好的改善作用,乳房外形縮小,小葉和腺泡的數(shù)量減少,上皮細(xì)胞增生亦減輕,且能較好地改善大鼠血液流變學(xué)情況,而對(duì)血清激素水平的影響不明確。結(jié)論:生雞內(nèi)金可以有效干預(yù)肝郁脾虛證大鼠的乳腺增生改變,并可改善血液流變學(xué),但與激素水平的調(diào)節(jié)關(guān)聯(lián)不明確。

    乳腺增生;生雞內(nèi)金;作用機(jī)制

    雞內(nèi)金,健脾消食、軟堅(jiān)散結(jié),為中醫(yī)臨床常用藥物之一,然而目前臨床多用于食積之證以消食化積,且為炒制入藥[1]。近十余年我們亦常應(yīng)用生雞內(nèi)金于癥瘕積聚之證,尤其是婦科疾患,突出表現(xiàn)在乳腺增生病,療效顯著。本研究通過(guò)對(duì)乳腺增生癥動(dòng)物模型進(jìn)行實(shí)驗(yàn)性藥物治療,著重觀察了生雞內(nèi)金對(duì)動(dòng)物乳腺增生病理形態(tài)學(xué)變化、血液流變學(xué)及血清激素水平的影響。

    1 材料與方法

    1.1實(shí)驗(yàn)動(dòng)物健康未育成年雌性SD大鼠[許可證號(hào):SCXK(湘)2013-0004],60只,體重(160±10)g,SPF級(jí)。

    1.2藥物和主要試劑逍遙散:按原方比例,柴胡、當(dāng)歸、白芍、白術(shù)、茯苓各2份,甘草1份,共研細(xì)末,水煎,去滓取汁。生雞內(nèi)金:自備,研極細(xì)粉,過(guò)篩,調(diào)入蒸餾水或逍遙散湯藥中成懸濁液。苯甲酸雌二醇注射液[獸藥字(2011)110252511]2 ml:4 mg。黃體酮注射液(國(guó)藥準(zhǔn)字H12020533),1 ml:20 mg。橄欖油(商品條形碼:8437012663671)1 L。

    1.3實(shí)驗(yàn)方法健康未育成年雌性SD大鼠,根據(jù)體重隨機(jī)分為空白組、模型組、逍遙組、逍金組、內(nèi)金組。除空白組外,采用大鼠腹腔注射苯甲酸雌二醇0.25 mg/kg,1次/d,連續(xù)25 d,然后注射黃體酮2 mg/kg,1次/d,連續(xù)5 d,復(fù)制成乳腺增生病動(dòng)物模型。在此基礎(chǔ)上,用夾尾方式激怒大鼠,制成肝郁脾虛證乳腺增生病大鼠病理模型。空白組以生理鹽水代之。于造模后第14天,根據(jù)分組給予相應(yīng)藥物,其中逍遙組:逍遙散湯藥13.75 g(生藥)/(kg·d);內(nèi)金組:生雞內(nèi)金0.75g(生藥)/(kg·d);逍金組:逍遙散湯藥和生雞內(nèi)金劑量同逍遙組合內(nèi)金組;空白組和模型組給予等體積生理鹽水。連續(xù)給藥3周后,處理動(dòng)物,采集標(biāo)本,進(jìn)行相應(yīng)檢測(cè)。

    1.4觀察指標(biāo)(1)于末次給藥后24 h,乙醚麻醉動(dòng)物,眼靜脈叢取血。將取得血液分為兩份,一份分離血清,放射免疫法測(cè)定血清中雌二醇、孕酮的含量。另一份肝素抗凝,以血液流變儀測(cè)定全血黏度。(2)以游標(biāo)卡尺測(cè)量每只大鼠胸部第1對(duì)乳房直徑、乳頭高度。(3)動(dòng)物處死后,用8 mm打孔器,取胸部第2對(duì)乳房,固定于10%中性福爾馬林溶液內(nèi),制作病理切片,HE染色。于光學(xué)顯微鏡下觀察其病理形態(tài)學(xué)變化,利用圖像采集軟件分別放大100倍和200倍采集圖像并進(jìn)行分析。

    2 結(jié)果

    2.1形態(tài)觀察通過(guò)對(duì)各組大鼠的乳房外形測(cè)量數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較,結(jié)果顯示模型組大鼠的乳房直徑和乳頭高度均明顯大于高于空白組(P<0.01),表明本實(shí)驗(yàn)此次造模成功。各治療組通過(guò)藥物干預(yù),雖然與空白組比較,乳房直徑和乳頭高度亦明顯增大(P<0.01),但與模型組比較則顯著縮?。≒<0.01),其中又以含雞內(nèi)金的內(nèi)金組和逍金組為明顯,表明生雞內(nèi)金對(duì)乳腺增生具有抑制作用。各組乳房直徑和乳頭高度見(jiàn)表1。

    表1 生雞內(nèi)金對(duì)乳腺增生大鼠乳房形態(tài)的影響(±s)

    表1 生雞內(nèi)金對(duì)乳腺增生大鼠乳房形態(tài)的影響(±s)

    注:與空白組比較,*P<0.01;與模型組比較,△P<0.01;與逍遙組比較,▲P<0.01。

    組別n劑量[g(生藥)/(kg·d)]乳房直徑(mm)乳狀高度(mm)空白組模型組逍遙組內(nèi)金組逍金組15 15 15 15 15 --13.75 0.75 14.50 0.54±0.07 1.53±0.09*1.25±0.11*△1.09±0.13*△▲0.93±0.10*△▲0.87±0.07 1.61±0.11*1.32±0.12*△1.19±0.09*△▲1.16±0.12*△▲

    2.2光鏡觀察通過(guò)各組大鼠的乳腺病理組織光鏡觀察可見(jiàn),正常大鼠乳腺的小葉數(shù)量較大,導(dǎo)管無(wú)明顯擴(kuò)張,腔內(nèi)無(wú)分泌物,復(fù)層上皮,乳腺小導(dǎo)管和腺泡少見(jiàn);而模型組大鼠乳腺組織鏡下可見(jiàn)乳腺導(dǎo)管與腺泡均明顯增生、擴(kuò)張,部分導(dǎo)管上皮增生,向腔內(nèi)突出,腔內(nèi)分泌物少,腺泡上皮增生,間質(zhì)纖維增生明顯。各給藥組中,逍遙組大鼠乳腺組織增生與模型組相比較顯著性不大,而含雞內(nèi)金的內(nèi)金組與逍金組相較之模型組則增生顯著減輕,導(dǎo)管輕度擴(kuò)張,上皮向腔內(nèi)有突出,呈乳頭狀增生,腔內(nèi)有少量分泌物和脫落的上皮,腺泡上皮輕度增生。各組大鼠乳腺病理組織改變見(jiàn)圖1~圖5。

    圖1 空白組大鼠乳腺組織(HE×100)

    圖2 模型組大鼠乳腺組織(HE×100)

    2.3血液流變學(xué)檢測(cè)結(jié)果通過(guò)對(duì)各組大鼠血液流變學(xué)指標(biāo)檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較,結(jié)果顯示模型組RT200、RT30、RT1、HIIXS等指標(biāo)較之空白組明顯增高,有顯著性差異(P<0.01);各給藥組較之空白組,部分指標(biāo)有顯著性差異(P<0.01或P< 0.05);各給藥組較之模型組則明顯降低,具有顯著性差異(P<0.01或P<0.05);而各給藥組之間相比較無(wú)顯著性差異,且彼此間并無(wú)明確規(guī)律性。各組血液流變學(xué)檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表2。

    圖3 逍遙組大鼠乳腺組織(HE×100)

    圖4 內(nèi)金組大鼠乳腺組織(HE×100)

    圖5 逍金組大鼠乳腺組織(HE×100)

    表2 生雞內(nèi)金對(duì)乳腺增生大鼠血液流變學(xué)的影響(±s)

    表2 生雞內(nèi)金對(duì)乳腺增生大鼠血液流變學(xué)的影響(±s)

    注:與空白組比較,*P<0.05,**P<0.01;與模型組比較,△P<0.05,△△P<0.01;與逍遙組比較,▲P<0.05。

    組別n劑量[g(生藥)/(k g · d)]R T 2 0 0(m P a · s)R T 3 0(m P a · s)R T 1(m P a · s)H I I X S(m P a · s)空白組模型組逍遙組內(nèi)金組逍金組1 5 1 5 1 5 1 5 1 5 --1 3 . 7 5 0 . 7 5 1 4 . 5 0 4 . 8 9 ± 0 . 5 0 5 . 9 9 ± 1 . 4 0**4 . 8 0 ± 0 . 4 1△△5 . 1 4 ± 0 . 6 4△△5 . 2 6 ± 0 . 9 0△6 . 7 9 ± 0 . 7 2 9 . 5 6 ± 1 . 3 6**6 . 8 6 ± 0 . 5 3△△7 . 5 9 ± 0 . 8 7*△△▲7 . 1 6 ± 0 . 9 1△△3 0 . 0 8 ± 3 . 9 0 5 6 . 5 3 ± 9 . 3 7**3 3 . 8 2 ± 6 . 6 3△△3 9 . 2 2 ± 4 . 8 6**△△▲3 6 . 7 3 ± 5 . 5 2**△△6 . 1 9 ± 0 . 4 71 2 . 6 8 ± 1 . 5 8**7 . 1 1 ± 1 . 7 4*△△7 . 6 6 ± 1 . 0 8**△△6 . 7 3 ± 0 . 9 4△△

    2.4血清激素水平檢測(cè)結(jié)果通過(guò)對(duì)各組大鼠血清激素水平檢測(cè)數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)比較,結(jié)果顯示黃體酮各組間無(wú)顯著性差異;雌二醇檢測(cè)結(jié)果則顯示逍遙組和內(nèi)金組較之空白組有顯著性差異(P<0.01或P<0.05),但結(jié)合模型組與空白組及給藥組與模型組的比較結(jié)果進(jìn)行分析,各組藥物對(duì)大鼠雌二醇并無(wú)明確的糾正作用,且由于各單個(gè)樣本檢查結(jié)果的差異較大,導(dǎo)致該檢測(cè)指標(biāo)的評(píng)價(jià)意義不大。各組血清激素水平檢測(cè)結(jié)果見(jiàn)表3。

    表3 生雞內(nèi)金對(duì)乳腺增生大鼠血清激素水平的影響(±s)

    表3 生雞內(nèi)金對(duì)乳腺增生大鼠血清激素水平的影響(±s)

    注:與空白組比較,*P<0.05,**P<0.01。

    組別n劑量[g(生藥)/(kg·d)]黃體酮(mIU/ml)雌二醇(pg/ml)空白組模型組逍遙組內(nèi)金組逍金組15 15 15 15 15 --13.75 0.75 14.50 0.21±0.08 0.15±0.09 0.17±0.10 0.14±0.07 0.20±0.06 12.59±4.24 9.23±5.39 7.93±3.98*5.59±2.21**8.10±2.74

    3 討論

    雞內(nèi)金是一味臨床常用的傳統(tǒng)中藥,性甘味平,具有健脾消食、固精止遺、化堅(jiān)消石之功。目前臨床主要作為治療飲食積滯病癥的常用藥物之一,且為炒制入藥,其藥理研究亦多局限于對(duì)消化系統(tǒng)機(jī)能的影響[2]。對(duì)于該藥的另一重要功效(即化堅(jiān)消石),臨證運(yùn)用的較少。明末清初中醫(yī)大家張錫純卻對(duì)此獨(dú)有情鐘,認(rèn)為該藥生用有較好的軟堅(jiān)散結(jié)之功。在其所著《醫(yī)學(xué)衷中參西錄》中認(rèn)為雞內(nèi)金更“善化瘀血”,將其廣泛應(yīng)用于多種瘀血阻滯的病癥,收效甚捷,從而開(kāi)創(chuàng)了運(yùn)用雞內(nèi)金治療血瘀病之先河。尤其是在婦科瘀血徵瘕等有形之疾的運(yùn)用見(jiàn)長(zhǎng),“不但能消脾胃之積,無(wú)論臟腑何處有積,雞內(nèi)金皆能消之,是以男子痃癖、女子徵瘕,久久服之皆能治愈”。且張氏提出運(yùn)用雞內(nèi)金消徵通瘀強(qiáng)調(diào):“必須生用,方有效驗(yàn),若炒熟用之則無(wú)效矣”。對(duì)此,后世有的醫(yī)家亦有報(bào)道[3~4],證之于臨床,確屬良言,多獲佳效。

    本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明,逍遙丸對(duì)肝郁脾虛證乳腺增生病大鼠的乳房外形及病理變化具有一定的改善作用,乳房外形縮小,小葉和腺泡的數(shù)量減少,上皮細(xì)胞增生亦減輕;而方中加入雞內(nèi)金后,其療效得到很大的提高,含雞內(nèi)金的治療組較之模型組及逍遙組均有顯著性差異(P<0.01或P<0.05)。對(duì)血液流變學(xué)的影響結(jié)果可以看出,各藥物治療組較之模型組均有一定程度的改善(P<0.01或P<0.05),但含雞內(nèi)金的內(nèi)金組與逍金組較之逍遙組并無(wú)明顯優(yōu)勢(shì)。而從血清激素水平檢測(cè)結(jié)果中可以看出,各給藥組及模型組均無(wú)明確的糾正效果。綜合以上實(shí)驗(yàn)結(jié)果,生雞內(nèi)金對(duì)肝郁脾虛證乳腺增生病大鼠乳腺本身的病變具有較好治療作用,且能較好地改善大鼠血液流變學(xué)情況,而對(duì)血清激素水平的影響不明確,所以其治療作用可能與激素水平的調(diào)整關(guān)系不大。通過(guò)本實(shí)驗(yàn)研究,進(jìn)一步證實(shí)了該藥在婦科有形病證中的應(yīng)用價(jià)值,為該藥的推廣應(yīng)用提供理論和實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ),并對(duì)其作用機(jī)制進(jìn)行了初步探討,更深層次的作用機(jī)制有待于進(jìn)一步的研究。

    [1]羅江波,胡建平.生雞內(nèi)金在實(shí)驗(yàn)性乳腺增生病癥中的作用研究[J].江西中醫(yī)藥,2008,39(12):72-73

    [2]李衛(wèi)先,李飛燕,李達(dá),等.雞內(nèi)金不同炮制方法水提液對(duì)小鼠胃腸運(yùn)動(dòng)比較的研究[J].湖南中醫(yī)雜志,2008,24(2):100-101

    [3]張文鳳.張錫純巧用雞內(nèi)金經(jīng)驗(yàn)[J].江蘇中醫(yī)藥,2009,41(7):64-65

    [4]李公文.張錫純先生運(yùn)用雞內(nèi)金的學(xué)術(shù)經(jīng)驗(yàn)[J].中醫(yī)臨床研究,2011,3(2):71

    R655.7

    B

    10.13638/j.issn.1671-4040.2015.12.046

    2015-10-29)

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