三種小鼠實(shí)驗(yàn)性高脂血癥模型效果的比較分析

哈建利 張明軍 夏濤

摘 要 目的：篩選出一種理想的小鼠高脂血癥動(dòng)物模型造模方法。方法：參考相關(guān)文獻(xiàn)選取三種小鼠高脂血癥動(dòng)物模型配方并略作調(diào)整，制成乳劑給小鼠灌胃，分別在2w、4w、6w時(shí)取尾靜脈血，測(cè)定血清中TG、TC、LDL和HDL含量。結(jié)果：三種高脂配方均可不同程度地導(dǎo)致小鼠血清中脂代謝紊亂，形成高血脂動(dòng)物模型。結(jié)論：在20%三磷酸甘油酯和10%膽固醇的基礎(chǔ)上加入3%膽酸鈉，灌胃4w就可形成理想的小鼠高脂血癥動(dòng)物模型。

關(guān)鍵詞 高脂血癥 小鼠 模型 分析

中圖分類(lèi)號(hào)：R589 ? 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A?? DOI：10.16400/j.cnki.kjdkz.2015.09.078

Comparative Analysis of Three Experimental Rats Hyperlipidemia Models

HA Jianli[1]， ZHANG Mingjun[1]， XIA Tao[2]

（[1]Nursing School， Hubei Polytechnic Institute， Xiaogan， Hubei 432000;

[2]Teaching & Research Section of Environmental Hygiene，

Tongji Medical School， Huazhong University of Science & Technology， Wuhan， Hubei 430030）

Abstract Objective： To choose an ideally modeling method of rats hyperlipidemia model. Methods： By referring to relevant documents， choose three experimental rats hyperlipidemia models， make into emulsions to perfuse rats' stomachs， and sample tail vein blood after 2 weeks， 4 weeks and 6 weeks separately， to measure TG， TC， LDL and HDL contents in blood serum. Results： The three models result in rat lipid metabolic disorder in different degrees， to form hyperlipidemia models. Conclusions： By adding 3% sodium cholate liquor into 20% triglycerol phosphate and 10% cholesterol， perfuse rats' stomachs for 4 weeks to form an ideal rats hyperlipidemia model.

Key words Hyperlipidemia; rat; model; analysis

隨著我國(guó)經(jīng)濟(jì)的不斷發(fā)展，人們生活水平不斷提高，高脂血癥（hyperlipidemia）的發(fā)病率在我國(guó)已呈逐年上升趨勢(shì)。高脂血癥是機(jī)體脂代謝紊亂的重要標(biāo)志，也是動(dòng)脈粥樣硬化、心臟病、腦血管意外和脂肪肝的主要危害因素之一，①主要表現(xiàn)為血清中甘油三酯（triglyceride，TG）、總膽固醇（total cholesterol，TC）、低密度脂蛋白（low density lipoprotein，LDL）含量增高和高密度脂蛋白（high density lipoprotein，HDL）含量降低。目前尋找安全高效的降血脂藥物已成為廣大醫(yī)藥衛(wèi)生工作者研究的熱點(diǎn)之一，而實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型是進(jìn)行上述研究的必備材料。為篩選出效果理想的高脂血癥動(dòng)物模型造模方法，在前人研究②③④⑤的基礎(chǔ)上，本研究擬用三種不同方法對(duì)小鼠進(jìn)行高脂血癥造模，觀察不同時(shí)間小鼠血脂的變化情況，以期篩選出一種既經(jīng)濟(jì)穩(wěn)定又省時(shí)省力的高脂血癥小鼠動(dòng)物模型的造模方法，為后續(xù)研究奠定基礎(chǔ)。

1 材料與方法

1.1 主要試劑與儀器

三磷酸甘油酯、膽固醇、膽酸鈉均為國(guó)產(chǎn)試劑（分析純）;甘油三酯、膽固醇和高密度脂蛋白試劑盒由中生北控生物試劑公司提供;AUl000 全自動(dòng)生化分析儀為OLYMPUS 公司產(chǎn)品。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物

昆明種小鼠40只（湖北省實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供），雌雄各半，體重20～25g。

1.3 高脂飼料配方與制備

配方1： 20%三磷酸甘油酯+ 10%膽固醇;配方2：20%三磷酸甘油酯+10%膽固醇+1%膽酸鈉;配方3：20%三磷酸甘油酯+ 10%膽固醇+3%膽酸鈉。分別按上述配方、比例稱取相應(yīng)的高脂試劑，用約50ml的熱生理鹽水?dāng)嚢璩蓱覞嵋海⒍ㄈ葜?00ml備用。

1.4 動(dòng)物模型制備

隨機(jī)將動(dòng)物分為4組，分別為對(duì)照組、模型1組、模型2組和模型3組。對(duì)照組用生理鹽水灌胃，模型1、2、3組分別對(duì)應(yīng)用配方1、配方2和配方3高脂飼料灌胃。各組小鼠均以0.4ml溶液灌胃，每天1次。所有小鼠均自由攝食與飲水，分別于灌胃2周、4周和6周后取尾靜脈血，測(cè)定其血清中TG、TC、LDL和HDL含量。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理

數(shù)據(jù)均以 眘 形式表示，用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行單因素方差分析（one-way-ANOVA），組間比較用LSD法。

2 結(jié)果

2.1 2周后小鼠血清中各指標(biāo)變化

與對(duì)照組相比，模型1組中LDL含量明顯升高（P<0.05），模型2組TC和LDL含量明顯升高（P<0.01）;模型3組中TG、TC和LDL含量明顯升高（P<0.05或P<0.01）;各模型組中HDL含量與對(duì)照組差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）;模型2、3組中TC含量明顯高于模型1組（P<0.05），結(jié)果見(jiàn)表1。

2.2 4周后小鼠血清中各指標(biāo)變化

從表2可以看出，與對(duì)照組相比，模型1組中LDL含量明顯升高（P<0.05），模型2組中TG、TC和LDL含量明顯升高（P<0.05或P<0.01），而模型3組不僅TG、TC和LDL含量明顯升高（P<0.05或P<0.01），而且HDL水平則明顯下降（P<0.05）;同時(shí)模型2、3組中TC含量明顯高于模型1組（P<0.01）。

2.3 6周后小鼠血清中各指標(biāo)變化

與對(duì)照組相比，模型1組中TG、TC和LDL含量明顯升高（P<0.05或P<0.01）;模型2組中TG、TC和LDL含量也明顯高于對(duì)照組（P<0.01）;而模型3組不僅TG、TC和LDL含量明顯高于對(duì)照組（P<0.01），而且其HDL水平則明顯低于其他三組（P<0.05或P<0.01），具體結(jié)果見(jiàn)表3。

3 討論

高血脂癥動(dòng)物模型主要來(lái)源于先天性、轉(zhuǎn)基因和化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)三個(gè)方面。前兩種獲取方式因其來(lái)源極為有限或價(jià)格過(guò)于昂貴，故其應(yīng)用大為受限，而通過(guò)化學(xué)物質(zhì)誘導(dǎo)獲得的實(shí)驗(yàn)動(dòng)物模型目前在國(guó)內(nèi)被廣泛采用。⑥

本研究結(jié)果顯示，模型1組小鼠灌胃2w后僅LDL水平升高，模型2組TC和LDL水平明顯升高;而模型3組則是TG、TC和LDL三項(xiàng)指標(biāo)的水平明顯升高;4w后模型1組依然是僅LDL水平升高，而模型2、3組則是TG、TC和LDL三項(xiàng)指標(biāo)的水平進(jìn)一步升高，同時(shí)模型3組的HDL水平明顯下降;隨著灌胃時(shí)間繼續(xù)延長(zhǎng)至6w，各模型組的TG、TC和LDL的水平逐漸升高，但除模型3組的HDL水平明顯降低外，其余2個(gè)模型組的HDL水平未見(jiàn)明顯降低（P>0.05）。本實(shí)驗(yàn)還發(fā)現(xiàn)，在實(shí)驗(yàn)小鼠灌胃2、4W后，模型2、3組的TC含量上升較快，不僅高于對(duì)照組，而且還明顯高于模型1組;而灌胃6w后，模型3組的HDL水平下降明顯，已達(dá)到明顯低于模型1、2組的水平。綜合來(lái)看，模型1、2、3組均出現(xiàn)脂代謝紊亂，能形成高脂血癥，但從4項(xiàng)評(píng)價(jià)指標(biāo)是否出現(xiàn)明顯變化及其變化幅度來(lái)看，模型3組優(yōu)于另外2個(gè)模型組，這可能與適量的膽酸鈉能有效促進(jìn)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物吸收甘油三脂和膽固醇，并迅速形成穩(wěn)定的高脂血癥模型有關(guān)。⑦

此外，通過(guò)對(duì)模型3組灌胃2、4、6w后各指標(biāo)的變化幅度進(jìn)行比較，發(fā)現(xiàn)2w即能形成高脂血癥模型，但HDL這項(xiàng)指標(biāo)未見(jiàn)明顯下降;而4w后各項(xiàng)指標(biāo)均繼續(xù)升高或降低，其中HDL含量已明顯低于對(duì)照組（P<0.05）;隨著灌胃時(shí)間繼續(xù)延長(zhǎng)至6w，4項(xiàng)指標(biāo)的變化幅度與第4w相比已無(wú)顯現(xiàn)變化，提示按配方3給小鼠灌胃4w即可獲得比較穩(wěn)定的高脂血癥動(dòng)物模型。

基金項(xiàng)目：湖北職業(yè)技術(shù)學(xué)院重點(diǎn)項(xiàng)目“魔芋發(fā)酵液對(duì)實(shí)驗(yàn)性高脂血癥小鼠血脂的影響”（項(xiàng)目編號(hào)：2008 A13）的階段性研究成果之一

注釋

① 徐叔云，卞如濂，陳修.藥理實(shí)驗(yàn)方法學(xué)（第3版）[M].北京：人民衛(wèi)生出版社，2001：1201-1206.

② 趙水平，吳潔.非諾貝特對(duì)高脂血癥兔血清及脂肪細(xì)胞分泌腫瘤壞死因子a的影響[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2005.21（2）：157-161.

③ 倪鴻昌，李俊，金涌，等.小鼠實(shí)驗(yàn)性高脂血癥和高脂血癥性脂肪肝模型研究[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2004.20（6）：703-706.

④ 張秋華，孫文靜.益氣活血方對(duì)小鼠的調(diào)脂作用與NO水平的影響[J].中國(guó)實(shí)驗(yàn)方劑學(xué)雜志，2003.9（1）：19-21.

⑤ 王志勇，王玲，潘振偉，等.胺碘酮對(duì)大鼠心肌梗死后重構(gòu)心肌細(xì)胞鉀電流的作用[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2005.21（12）：1451-1454.

⑥ 張東，武海軍，陳士萍，等.大鼠實(shí)驗(yàn)性高脂血癥五種造模方法的比較[J].中國(guó)藥理學(xué)通報(bào)，2007.23（9）：1254-1256.

⑦ 張智，閃增郁，向麗華，等.大鼠實(shí)驗(yàn)性高脂血癥兩種造模方法的比較[J].中國(guó)中醫(yī)基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)雜志，2004.10（2）：33-34，24.