子宮內(nèi)膜異位癥中子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞血管生成能力的研究

蘇曉華，宋殿榮，張英，張崴，郭潔，王雅楠，趙琳

子宮內(nèi)膜異位癥中子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞血管生成能力的研究

蘇曉華，宋殿榮，張英，張崴，郭潔，王雅楠，趙琳

目的：研究子宮內(nèi)膜異位癥（EMs）患者子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞環(huán)氧化酶2（COX-2）、前列腺素E2（PGE2）、血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）的蛋白分泌及mRNA表達。方法：收集EMs患者的在位及異位病灶子宮內(nèi)膜組織和子宮肌瘤患者在位內(nèi)膜組織，原代消化培養(yǎng)子宮內(nèi)膜細胞，取純化的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞進行研究，酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）檢測細胞COX-2、PGE2、VEGF蛋白的分泌，逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）法檢測COX-2、PGE2和VEGF的mRNA的表達。結(jié)果：EMs和子宮肌瘤患者分泌期在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞COX-2、PGE2、VEGF蛋白分泌及mRNA表達與增殖期比較差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；EMs患者在位及異位的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞COX-2、PGE2、VEGF蛋白分泌及mRNA表達比子宮肌瘤患者在位細胞均升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05或P＜0.01）；EMs患者異位的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞COX-2、PGE2、VEGF蛋白分泌及mRNA表達比其在位細胞均升高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05或P＜0.01）。結(jié)論：EMs患者在位及異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞COX-2、PGE2、VEGF的蛋白分泌及mRNA表達均升高，且異位病灶間質(zhì)細胞升高更明顯，提示在EMs發(fā)病中異位病灶子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞血管生成能力更強。

子宮內(nèi)膜異位癥；間質(zhì)細胞；環(huán)氧化酶2；前列腺素E2；血管內(nèi)皮生長因子

（J Int Obstet Gynecol，2015，42：49-53）

子宮內(nèi)膜異位癥（EMs）是婦科常見疾病，可影響5％～10％的育齡期婦女，在不孕癥患者中患病率高達20％～50％［1］，其雖為良性疾病，卻具有無限生長、生成新生血管、浸潤并破壞周圍組織、局部或遠處轉(zhuǎn)移等惡性腫瘤的一些特性。月經(jīng)期剝脫內(nèi)膜的異位種植是目前公認的腹腔EMs形成的主要原因，這些內(nèi)膜組織存活和生長的核心是形成新生血管，建立有效的血液供應(yīng)，從而使其能夠黏附和種植到間皮表面，可見血管生成是EMs形成的關(guān)鍵因素［2］。子宮內(nèi)膜細胞具有產(chǎn)生激素、持續(xù)增殖、抗凋亡、促進血管生成、侵襲、轉(zhuǎn)移和調(diào)節(jié)局部免疫系統(tǒng)的特點。血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）是血管生成中重要的因子，可以通過影響內(nèi)皮細胞的增殖、遷移、組成管腔和增加毛細血管滲透性而參與血管生成［3］。在癌組織中高表達的環(huán)氧化酶2（COX-2）誘導產(chǎn)生的前列腺素E2（PGE2）能刺激腫瘤血管的生成［4］，COX-2、PGE2和VEGF與EMs血管形成的關(guān)系已受到國內(nèi)外學者的關(guān)注。本研究利用子宮內(nèi)膜細胞體外培養(yǎng)技術(shù)，采用酶聯(lián)免疫吸附測定法（ELISA）和逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)（RT-PCR）法研究體外培養(yǎng)EMs患者在位及異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞COX-2、PGE2、VEGF的分泌及其mRNA的表達，探討EMs中不同部位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞血管生成的能力。

1　材料與方法

1.1標本采集標本取自2012年10月—2013年12月在天津中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院婦科因子宮肌瘤、卵巢巧克力囊腫行手術(shù)治療的已婚婦女，患者年齡23～49歲，平均年齡（32.56±7.42）歲，既往均月經(jīng)規(guī)律，未放置宮內(nèi)節(jié)育器，術(shù)前6個月內(nèi)未服用抗炎、激素類等藥物治療。在位子宮內(nèi)膜組織取自術(shù)前行診斷性刮宮術(shù)的內(nèi)膜，病理證實子宮內(nèi)膜無病理性改變，異位內(nèi)膜組織取自手術(shù)切除的卵巢異位病灶，術(shù)后病理證實符合EMs。本研究共收集子宮肌瘤患者在位子宮內(nèi)膜組織30例，其中分泌期內(nèi)膜12例，增殖期18例；EMs患者在位內(nèi)膜組織35例，其中分泌期內(nèi)膜10例，增殖期25例；卵巢異位病灶35例。所有標本的采集均得到患者本人或家屬知情授權(quán)，并經(jīng)醫(yī)院倫理委員會批準。

取材后將標本迅速放入裝有冰的細胞全培養(yǎng)基的離心管中，30 min內(nèi)移入實驗室于紫外線消毒后的超凈臺中進行操作。

1.2實驗方法

1.2.1子宮內(nèi)膜細胞原代培養(yǎng)參考文獻［5］的方法消化培養(yǎng)子宮內(nèi)膜細胞，以1×105/mL密度接種于25 cm2培養(yǎng)瓶中，置37℃、5％CO2的培養(yǎng)箱內(nèi)培養(yǎng)，24 h后觀察細胞貼壁情況并換液，隔48 h換液1次。

1.2.2子宮內(nèi)膜細胞傳代培養(yǎng)原代細胞長滿瓶壁約80％時進行傳代，以1∶2或1∶3比例傳代。

1.2.3子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞分離純化參考文獻［6］用差速沉降法結(jié)合篩網(wǎng)過濾法將子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞與腺上皮細胞分離、純化，收集、培養(yǎng)間質(zhì)細胞。

1.2.4子宮內(nèi)膜細胞免疫熒光鑒定將純化后的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞接種到6孔板內(nèi)，待細胞長滿40％時進行免疫熒光鑒定，一抗（鼠抗人波形蛋白和鼠抗人角蛋白，Abcam）稀釋濃度為1∶200，二抗（驢抗鼠蛋白，Abcam）稀釋濃度為1∶300。

1.2.5子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞COX-2、PGE2、VEGF濃度檢測

將子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞以1×105/mL的密度接種于96孔板，每孔100 μL，每組設(shè)6個復孔，待細胞長滿后取上清液，ELISA法測定COX-2、PGE2、VEGF水平，嚴格按照試劑盒操作規(guī)程測定。

1.2.6子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞COX-2、PGE2、VEGF的mRNA表達檢測將子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞接種到75 cm2培養(yǎng)瓶，待細胞長滿后消化，采用RT-PCR法檢測COX-2、PGE2、VEGF的mRNA表達。

1.2.6.1子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞總RNA提取嚴格按試劑盒說明操作，測定波長260 nm的光密度（OD）及波長280 nm的OD以估算總RNA的濃度及純度，并用1％瓊脂糖凝膠電泳鑒定總RNA完整性，提取的總RNA于-80℃保存。

1.2.6.2引物序列見表1。

表1　COX-2、PGE2、VEGF、β-actin RT-PCR引物序列

1.2.6.3RT-PCR擴增反應(yīng)取1 μg總 RNA，分別擴增COX-2、PGE2、VEGF及β-actin基因，PCR反應(yīng)體系為25 μL，反應(yīng)條件：逆轉(zhuǎn)錄反應(yīng)50℃30 min，94℃預(yù)變性2 min；94℃變性45 s，53～56℃退火45 s（根據(jù)不同目的基因選擇相應(yīng)的退火溫度），65℃延伸1 min，共35次循環(huán)；65℃終延伸10 min，4℃保存。取各組PCR產(chǎn)物7 μL行1.5％瓊脂糖凝膠電泳，在200 mA電流下電泳30 min，紫外燈下觀察電泳條帶。

1.2.6.4PCR產(chǎn)物半定量分析PCR產(chǎn)物電泳后經(jīng)Gel-PRO ANALYZER凝膠定量分析軟件對電泳條帶進行灰度分析，目的基因相對表達強度=目的基因電泳條帶灰度值/β-actin內(nèi)參照條帶灰度值。

1.3統(tǒng)計學方法采用SPSS11.5統(tǒng)計軟件進行分析，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標準差（±s）表示，2組間經(jīng)方差齊性檢驗方差齊后，用兩獨立樣本t檢驗；3組間比較經(jīng)方差齊性檢驗方差齊后，用單因素方差分析，若組間差異有統(tǒng)計學意義，多重比較采用LSD-t檢驗。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2　結(jié)果

2.1細胞培養(yǎng)情況及鑒定30例子宮肌瘤患者在位子宮內(nèi)膜中29例成功培養(yǎng)出子宮內(nèi)膜細胞，1例染菌；35例EMs患者在位內(nèi)膜中33例成功培養(yǎng)出子宮內(nèi)膜細胞，2例染菌；35例異位病灶中25例成功培養(yǎng)出子宮內(nèi)膜細胞，10例因病灶過小未培養(yǎng)出細胞，無染菌標本。經(jīng)差速沉降法結(jié)合篩網(wǎng)過濾法獲得的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞純度可達95％，第4代間質(zhì)細胞經(jīng)免疫熒光鑒定，鼠抗人角蛋白（Cytokeratin）染色陰性，而鼠抗人波形蛋白（Vimentin）染色陽性，見圖1（見后插一），證實研究的子宮內(nèi)膜細胞中以間質(zhì)細胞為主。

2.2子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞COX-2、PGE2、VEGF濃度比較

2.2.1增殖期、分泌期在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞子宮肌瘤患者分泌期子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞COX-2、PGE2、VEGF濃度與增殖期比較差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；EMs患者分泌期子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞COX-2、PGE2、VEGF濃度與增殖期間質(zhì)細胞比較差異也均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05），見表2。

表2　增殖期、分泌期在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞COX-2、PGE2、VEGF濃度比較（±s）

表2　增殖期、分泌期在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞COX-2、PGE2、VEGF濃度比較（±s）

組別　nCOX-2（nmol/L）　PGE2（pmol/L）　VEGF（pmol/L）肌瘤在位　增殖期 17 164.668±35.582 2 258.501±181.626 1 235.674±84.408分泌期 12 156.833±24.971 2 174.573±351.648 1 199.924±83.515 t（P）　0.442（0.668）　0.519（0.615）　0.737（0.478）EMs在位　增殖期 23 201.704±29.249 3 212.131±397.4072 013.308±311.529分泌期 10 190.293±19.819 3 189.049±381.1682 018.975±285.455 t（P）　0.791（0.447）　0.103（0.920）　0.033（0.974）

2.2.2在位及異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞EMs患者在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞COX-2、PGE2、VEGF濃度比肌瘤患者在位間質(zhì)細胞高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）；EMs患者異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞COX-2、PGE2、VEGF濃度高于肌瘤患者在位間質(zhì)細胞，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；EMs患者異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞COX-2、PGE2、VEGF濃度比EMs在位間質(zhì)細胞高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05）。見表3。

表3　在位及異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞COX-2、PGE2、VEGF濃度比較（±s）

表3　在位及異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞COX-2、PGE2、VEGF濃度比較（±s）

組別　n　COX-2（nmol/L）　PGE2（pmol/L）　VEGF（pmol/L）肌瘤在位① 29174.653±36.671 2 730.368±593.291 1 405.347±89.813 EMs在位② 33　216.410±40.133 3 543.100±607.6262 043.611±451.178 EMs異位③ 25　260.036±23.862 4 327.504±497.2073 011.208±1 021.979 F（P）　11.905（0.001）　11.854（0.001）　11.333（0.001）組間比t（P）1∶2　2.363（0.040）　2.344（0.041）　4.692（0.001）1∶3　5.453（0.000）　5.054（0.000）　4.241（0.002）2∶3　2.289（0.045）　2.447（0.034）　2.403（0.037）

2.3子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞COX-2、PGE2、VEGF的mRNA表達水平

2.3.1子宮內(nèi)膜細胞總RNA提取結(jié)果所提取的細胞總RNA經(jīng)紫外分光光度計測定：OD260/OD280介于1.8～2.0之間，1％瓊脂糖凝膠電泳可見清晰的18 S和28 S兩個條帶，且2個條帶的OD比值為28S/ 18S＞2，所提取的總RNA純度較高且較完整，無DNA、酚、蛋白的污染。見圖2。

圖2　RNA完整性瓊脂糖凝膠電泳結(jié)果圖

2.3.2半定量RT-PCR結(jié)果

2.3.2.1增殖期、分泌期在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞半定量RT-PCR電泳灰度值比較肌瘤患者的分泌期子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞COX-2、PGE2、VEGF的mRNA表達與其增殖期間質(zhì)細胞比較差異均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）；EMs患者分泌期在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞COX-2、PGE2、VEGF mRNA表達與其增殖期間質(zhì)細胞比較差異也均無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見圖3、圖4和表4。

圖3　子宮肌瘤在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞目的基因擴增產(chǎn)物電泳圖

圖4　EMs在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞目的基因擴增產(chǎn)物電泳圖

表4　增殖期、分泌期在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞COX-2、PEG2、VEGF mRNA表達量比較（±s）

表4　增殖期、分泌期在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞COX-2、PEG2、VEGF mRNA表達量比較（±s）

組別　n　COX-2　PGE2　VEGF肌瘤在位　增殖期　17　0.597±0.096　0.510±0.081　0.566±0.079分泌期　12　0.609±0.101　0.544±0.078　0.624±0.106 t（P）　0.227（0.825） 0.732（0.481） 1.064（0.312）EMs在位　增殖期　23　0.815±0.062　0.934±0.068　0.708±0.081分泌期　10　0.818±0.059　0.950±0.046　0.724±0.061 t（P）　0.078（0.939） 0.474（0.645） 0.402（0.696）

2.3.2.2在位及異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞半定量RTPCR電泳灰度值比較EMs患者在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞COX-2、PGE2、VEGF mRNA表達比肌瘤患者在位間質(zhì)細胞高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05或P＜0.01）；EMs患者異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞COX-2、PGE2、VEGF mRNA表達比肌瘤患者在位間質(zhì)細胞高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；EMs患者異位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞COX-2、PGE2、VEGF mRNA表達比在位間質(zhì)細胞高，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.05或P＜0.01）。見圖5和表5。

圖5　各組子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞目的基因擴增產(chǎn)物電泳圖

表5　各組子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞COX-2、PGE2、VEGF mRNA表達量比較（±s）

表5　各組子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞COX-2、PGE2、VEGF mRNA表達量比較（±s）

組別　n　COX-2　PGE2　VEGF肌瘤在位①　29　0.704±0.015　0.694±0.024　0.595±0.055 EMs在位②　33　0.804±0.037　0.951±0.024　0.735±0.031 EMs異位③　25　0.966±0.030　1.003±0.020　0.810±0.012 F（P）　24.106（0.001）　17.364（0.003）　25.918（0.001）組間比t（P）1∶2　3.834（0.019）　6.053（0.004）　2.837（0.049）1∶3　10.882（0.001）　5.862（0.004）　8.777（0.001）2∶3　4.059（0.015）　3.624（0.022）　4.793（0.009）

3　討論

子宮內(nèi)膜細胞主要包括子宮內(nèi)膜腺上皮細胞和間質(zhì)細胞，在EMs形成過程中腺上皮細胞參與異位病灶的生長，間質(zhì)細胞參與異位病灶的黏附過程［7-8］。子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞的黏附作用是EMs形成的第一步［8］，黏附后間質(zhì)細胞負責誘導早期血管形成，提供血液供應(yīng)，通過重組腺上皮細胞和間質(zhì)細胞形成子宮內(nèi)膜腺體而進一步促進異位病灶的生長［7］。因此，本研究以原代培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞為對象，研究EMs中與血管生成相關(guān)的蛋白分泌及基因的表達。

COX-2是催化花生四烯酸轉(zhuǎn)化為PGE2的誘導酶，在多數(shù)組織中不表達或表達很低，在細胞因子、內(nèi)毒素、促炎因子、腫瘤刺激因子和某些激素刺激下迅速表達，與腸癌［9］、卵巢上皮性癌［10］、胃癌［11］、肺癌［12］等惡性腫瘤的發(fā)生、發(fā)展有關(guān)。COX-2在正常人子宮內(nèi)膜腺體和血管內(nèi)皮均有表達［13］，可催化花生四烯酸合成PGH2，在PGE2合酶的作用下合成PGE2。在EMs發(fā)病中，PGE2參與調(diào)控細胞增殖、抗凋亡、免疫抑制和血管生成等病理生理過程［14］。研究表明伴有盆腔痛癥狀的EMs患者異位病灶COX-2、PGE2表達水平明顯升高［15］，EMs患者子宮內(nèi)膜和盆腔微環(huán)境血管生成的潛能可影響異位病灶的形成。Brenner等［16］研究認為EMs患者盆腹腔內(nèi)PGE2可能誘導VEGF的表達和細胞侵襲性的增加，從而有利于子宮內(nèi)膜細胞發(fā)生黏附、血管形成和種植。EMs患者腹腔沖洗液PGE2、VEGF濃度明顯升高［17-18］，而腹腔沖洗液中包含炎性細胞因子、生長因子、類固醇激素、促血管生成因子、巨噬細胞、子宮內(nèi)膜細胞和紅細胞，因白細胞循環(huán)可產(chǎn)生和釋放大量PGE2、VEGF［19］，從而影響PGE2、VEGF測定的結(jié)果。因此，本研究以原代培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞為研究對象，可代表患者體內(nèi)細胞的特征，排除組織研究中間皮細胞、腺上皮細胞相關(guān)蛋白分泌和基因表達的影響。

本研究結(jié)果顯示，子宮肌瘤和EMs患者增殖期在位子宮內(nèi)膜分離培養(yǎng)的間質(zhì)細胞COX-2、PGE2、VEGF蛋白分泌和mRNA表達與分泌期培養(yǎng)的間質(zhì)細胞比較差異均無統(tǒng)計學意義，提示體外培養(yǎng)的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞血管生成能力不受子宮內(nèi)膜周期性變化的影響。郎景和教授關(guān)于EMs的發(fā)病提出了“在位內(nèi)膜決定論”［20］，即患者的在位內(nèi)膜本身在黏附、種植、侵襲能力上要強于非EMs婦女的內(nèi)膜，更易形成異位病灶。本研究結(jié)果顯示，EMs患者在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞COX-2、PGE2、VEGF蛋白分泌和mRNA表達比子宮肌瘤患者均升高，提示EMs患者在位子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞生成血管能力強于子宮肌瘤患者，符合“在位內(nèi)膜決定論”。有學者指出EMs患者在位的子宮內(nèi)膜細胞要在盆腔內(nèi)種植形成異位病灶，還要通過腹水、腹腔內(nèi)細胞、腹膜外細胞基質(zhì)這三道防線的篩選作用，最后留下最強的克隆細胞系在腹腔內(nèi)種植形成異位病灶，因此提出子宮內(nèi)膜異位病灶是“單克隆起源學說”［21］。本研究結(jié)果顯示EMs患者異位病灶子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞COX-2、PGE2、VEGF蛋白分泌和mRNA表達比其在位內(nèi)膜細胞均升高，提示異位子宮內(nèi)膜細胞的功能有所改變，生成血管的能力強于在位內(nèi)膜。“單克隆起源學說”可解釋本研究所得到的EMs患者異位的子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞生成血管能力強于在位和子宮肌瘤患者子宮內(nèi)膜間質(zhì)細胞的結(jié)論。

［1］Taylor RN，Yu J，Torres PB，et al.Mechanistic and therapeutic implications of angiogenesis in endometriosis［J］.Reprod Sci，2009，16（2）：140-146.

［2］Healy DL，Rogers PA，Hii L，et al.Angiogenesis：a new theory for endometriosis［J］.Hum Reprod Update，1998，4（5）：736-740.

［3］Mueller MD，Vigne JL，Minchenko A，et al.Regulation of vascular endothelial growth factor（VEGF）gene transcription by estrogen receptors alpha and beta［J］.Proc Natl Acad Sci USA，2000，97 （20）：10972-10977.

［4］Uefuji K，Ichikura T，Moehizuki H.Cyelooxygenase-2 expression is related to prostaglandin biosynthesis and angiogenesis in human gastric cancer［J］.Clin Cancer Res，2000，6（1）：135-138.

［5］Tsuno A，Nasu K，Kawano Y，et al.Fasudil inhibits the proliferation and contractility and induces cell cycle arrest and apoptosis of human endometriotic stromal cells：a promising agent for the treatment of endometriosis［J］.J Clin Endocrinol Metab，2011，96 （12）：E1944-E1952.

［6］Beliard A，No?l A，Goffin F，et al.Role of endocrine status and cell type in adhesion of human endometrial cells to the peritoneum in nude mice［J］.Fertil Steril，2002，78（5）：973-978.

［7］Nisolle M，Casanas-Roux F，Donnez J.Early-stage endometriosis：adhesion and growth of human menstrual endometrium in nude mice［J］.Fertil Steril，2000，74（2）：306-312.

［8］Witz CA，Monotoya-Rodriguez IA，Schenken RS.Whole explants of peritoneumandendometrium：anovelmodeloftheearly endometriosis lesion［J］.Fertil Steril，1999，71（1）：56-60.

［9］Peng Q，Yang S，Lao X，et al.Meta-analysis of the association between COX-2 polymorphisms and risk of colorectal cancer based on casecontrol studies［J］.PLoS One，2014，9（4）：e94790.

［10］Agachan Cakmakoglu B，Attar R，Kahraman OT，et al.Cyclooxygenase-2 gene and epithelial ovarian carcinoma risk［J］.Mol Biol Rep，2011，38（5）：3481-3486.

［11］Yan WF，Sun PC，Nie CF，et al.Cyclooxygenase-2 polymorphisms were associated with the risk of gastric cancer：evidence from a meta-analysis based on case-control studies［J］.Tumour Biol，2013，34（6）：3323-3330.

［12］Coskunpinar E，Eraltan IY，Turna A，et al.Cyclooxygenase-2 gene and lung carcinoma risk［J］.Med Oncol，2011，28（4）：1436-1440.

［13］Jones RL，Kelly RW，Critchley HO.Chemokine and cyclooxygenase-2 expression in human endometrium coincides with leukocyte accumulation［J］.Hum Reprod，1997，12（6）：1300-1306.

［14］Wu MH，Lu CW，Chuang PC，et al.Prostaglandin E2：the master of endometriosis？［J］.Exp Biol Med（Maywood），2010，235（6）：668-677.

［15］Khan KN，Kitajima M，F(xiàn)ujishita A，et al.Pelvic pain in women with ovarian endometrioma is mostly associated with coexisting peritoneal lesions［J］.Hum Reprod，2013，28（1）：109-118.

［16］Brenner RM，Nayak NR，Slayden OD，et al.Premenstrual and menstrual changes in the maeaque and human endometrium：relevance to endometriosis［J］.Ann N Y Acad Sci，2002，955：60-74.

［17］Khan KN，Kitajima M，Yamaguchi N，et al.Role of prostaglandin E2 in bacterial growth in women with endometriosis［J］.Hum Reprod，2012，27（12）：3417-3424.

［18］Bourlev V，Iljasova N，Adamyan L，et al.Signs of reduced angiogenic activity after surgical removal of deeply infiltrating endometriosis［J］.Fertil Steril，2010，94（1）：52-57.

［19］McLaren J，Prentice A，Charnock-Jones DS，et al.Vascular endothelial growth factor is produced by peritoneal fluid macrophages in endometriosis and is regulated by ovarian steroids［J］.J Clin Invest，1996，98（2）：482-489.

［20］郎景和.子宮內(nèi)膜異位癥的研究與設(shè)想［J］.中華婦產(chǎn)科雜志，2003，38（8）：478-480.

［21］Varma R，Rollason T，Gupta JK，et al.Endometriosis and the neoplastic process［J］.Reproduction，2004，127（3）：293-304.

Study of Angiogenesis Ability of Endometrial Stromal Cells in Endometriosis

SU Xiao-hua，SONG Dian-rong，ZHANG Ying，ZHANG Wei，GUO Jie，WANG Ya-nan，ZHAO Lin.
Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300193，China（SU Xiao-hua）；The Second Affiliated Hospital of Tianjin University of Traditional Chinese Medicine，Tianjin 300150，China（SONG Dian-rong，ZHANG Wei，GUO Jie，WANG Ya-nan，ZHAO Lin）；Tianjin Medical University，Tianjin 300070，China（ZHANG Ying）

SONG Dian-rong，E-mail：songdr58@126.com

Objective:To study of the secretion and expression of COX-2，PGE2and VEGF in endometrial stromal cells of patients with EMs.Methods：Ectopic endometrial tissues of EMs and eutopic endometrial tissues of patients with EMs or uterine fibroids were collected，then cultured endometrial cells by the methods of original digestion，the purified endometrial stromal cells were used for research，the secretion of COX-2，PGE2and VEGF proteins were tested by ELISA，and the expression of COX-2，PGE2and VEGF mRNA were detected by RT-PCR.Results：There were no statistically significant differences of the expression of COX-2，PGE2and VEGF proteins and mRNA between the stage of secretion and proliferation in eutopic endometrial stromal cells in patients with EMs or uterine fibroid（P＞0.05）.The expression of COX-2，PGE2and VEGF proteins and mRNA were significantly increased in eutopic and ectopic endometrial stromal cells of EMs compared with patients with uterine fibroid，the difference was statistically significant（P＜0.05 or P＜0.01）.The expression of COX-2，PGE2and VEGF proteins and mRNA in ectopic endometrial stromal cells were obviously higher than that in eutopic endometrial stromal cells of EMs，the difference was statistically significant（P＜0.05 or P＜0.01）.Conclusions：The protein secretion and mRNA expression of COX-2，PGE2and VEGF in eutopic and ectopic endometrial stromal cells were all increased and it showed that the ectopic cells increased more obviously.It indicated that the angiogenesis ability of ectopic endometrial stromal cells was stronger in the pathogenesis of EMs.

Endometriosis；Stromal cells；Cyclooxygenase 2；Prostaglandin E2；Vascular endothelial browth factors

2014-08-03）

［本文編輯秦娟］

國家自然科學基金（81102613）

300193天津中醫(yī)藥大學（蘇曉華）；天津中醫(yī)藥大學第二附屬醫(yī)院（宋殿榮，張崴，郭潔，王雅楠，趙琳）；天津醫(yī)科大學（張英）

宋殿榮，E-mail：songdr58@126.com