單環(huán)刺螠內(nèi)臟多糖結(jié)構(gòu)的分析及其對脂質(zhì)過氧化物的清除作用

朱森君，陳米娜，牛慶鳳，李濤，曲有樂，陳蔭*

（浙江海洋學(xué)院食品與醫(yī)藥學(xué)院，浙江舟山316022）

單環(huán)刺螠內(nèi)臟多糖結(jié)構(gòu)的分析及其對脂質(zhì)過氧化物的清除作用

朱森君，陳米娜，牛慶鳳，李濤，曲有樂，陳蔭*

（浙江海洋學(xué)院食品與醫(yī)藥學(xué)院，浙江舟山316022）

為開發(fā)單環(huán)刺螠內(nèi)臟中活性多糖成分，利用兩步酶解法提取單環(huán)刺螠多糖，對其單糖組成、分子質(zhì)量和連接方式等理化性質(zhì)和結(jié)構(gòu)特征進(jìn)行研究，并通過體外清除脂質(zhì)過氧化物實(shí)驗(yàn)對其活性進(jìn)行初步評價。結(jié)果表明：采用木瓜蛋白酶和胰蛋白酶兩步酶解后，單環(huán)刺螠內(nèi)臟多糖得率為6.2%。單環(huán)刺螠內(nèi)臟多糖（viscera polysaccharide，VP）分子質(zhì)量約為4.1×103u，從單糖組成可以看出，VP為組成復(fù)雜的類糖胺聚糖，主要含有葡萄糖（Glc），其次還含有氨基葡萄糖（GlcN）、甘露糖（Man）、半乳糖（Gal）和巖藻糖（Fuc），還含有少量的木糖（Xyl）、鼠李糖（Rha）、葡萄糖醛酸（GlcUA）和氨基半乳糖（GalN）。其單糖組成物質(zhì)的量比為n（Man）∶n（GlcN）∶n（Rha）∶n（GlcUA）∶n（GalN）∶n（Glc）∶n（Gal）∶n（Xyl）∶n（Fuc）= 1∶1.38∶0.87∶0.53∶0.52∶5.37∶1.38∶1.05∶2.40。VP還含有少量的硫酸基，含量為8.9%。葡萄糖作為VP中最主要的單糖，其連接方式主要為Glcp(1→、→4)-Glcp(1→、→4，6)-Glcp(1→和→3，6)-Glcp(1→。甘露糖主要含有Manp(1→、→2)-Manp(1→和→6)-Manp(1→連接方式。半乳糖含有Galp(1→和→4)-Galp(1→連接方式。而巖藻糖主要含有→4）-Fucp(1→，另外還有Fucp(1→、→3)-Fucp(1→和→3，4)-Fucp(1→連接方式。類糖胺聚糖具有豐富的生物活性，對VP進(jìn)行初步體外抗氧化活性研究表明，其具有顯著的脂質(zhì)過氧化物清除活性，半數(shù)清除質(zhì)量濃度為2.47mg/mL。

單環(huán)刺螠；內(nèi)臟多糖；結(jié)構(gòu)；理化性質(zhì)；脂質(zhì)過氧化

單環(huán)刺螠（Urechis unicinctus）俗名海腸、海腸子，屬于螠蟲動物門（Echiurioidea）、螠綱（Echiurida）、無管螠目（Xenopneusta）、刺螠科（Urchidae），分布于俄羅斯、日本、朝鮮和我國黃渤海沿岸，是我國北方沿海泥沙岸潮間帶下區(qū)及潮下帶淺水區(qū)底棲生物的常見種。單環(huán)刺螠在山東境內(nèi)主要分布在煙臺、青島等地沿海的泥灘或巖石縫中。山東膠東地區(qū)是我國單環(huán)刺螠的最大產(chǎn)地。單環(huán)刺螠個體肥大，肉味鮮美，體壁肌富含蛋白質(zhì)和多種人體必需氨基酸。自古以來，在我國、日本和朝鮮沿海均作為名貴的海鮮食品，有較高的經(jīng)濟(jì)價值［1-2］。人們的傳統(tǒng)做法只食用單環(huán)刺螠的體壁，而占其身體質(zhì)量2/3的內(nèi)臟卻遭廢棄。但有研究發(fā)現(xiàn)，單環(huán)刺螠廢棄內(nèi)臟蛋白質(zhì)含量為18.25%，脂肪含量為0.12%，總糖含量為4.09%，且含有豐富的Ca、Mg、Fe、Zn等元素；同時也含有豐富的二十碳五烯酸（eicosapntemacnioc acid，EPA）、二十二碳六烯酸（docosahexaenoic acid，DHA）和二十二碳五烯酸（docosapentaenoic acid，DPA）。因此，單環(huán)刺螠廢棄內(nèi)臟也極具開發(fā)利用價值［3］。

隨著對海洋生物資源的開發(fā)和糖類藥物研究的日益重視，海洋動物活性多糖的研究也越來越受到人們廣泛的關(guān)注。如海參黏多糖具有提高免疫力、抗腫瘤、抗凝血等多種活性，是海參中主要的活性物質(zhì)［4-5］。海參內(nèi)臟中也含有豐富的多糖活性物質(zhì)，對海參廢棄內(nèi)臟多糖的研究不僅可以避免資源的浪費(fèi)，還能提高海參加工的附加產(chǎn)值［6］。本實(shí)驗(yàn)以對海參內(nèi)臟多糖的研究為指導(dǎo)，對單環(huán)刺螠內(nèi)臟多糖進(jìn)行深入研究，以期篩選出活性多糖成分，為單環(huán)刺螠內(nèi)臟的廢物再利用，提高單環(huán)刺螠的經(jīng)濟(jì)產(chǎn)值提供重要參考依據(jù)。

1　材料與方法

1.1材料與試劑

單環(huán)刺螠購于青島齊東路水產(chǎn)市場。

單糖標(biāo)準(zhǔn)品（色譜純）、標(biāo)準(zhǔn)牛血清白蛋白（色譜純）、95%乙醇、甲醇、丙酮、濃硫酸、咔唑、四硼酸鈉、對二甲氨基苯甲醛（p-dimethylaminobenzaldehyde，DMAB）、1-苯基-3-甲基-5-吡唑啉酮（1-phenyl-3-methyl-5-pyrazolone，PMP）美國Sigma公司；不同分子質(zhì)量葡聚糖標(biāo)準(zhǔn)品（色譜純）美國Fluka公司；Folin-酚乙液、重蒸苯酚（分析純）北京鼎國生物工程公司；木瓜蛋白酶（50萬U/g）亞太恒信生物技術(shù)有限公司；胰蛋白酶（250U/mg）科博賽爾科技發(fā)展有限公司；酒石酸鉀鈉、碳酸鈉、硫酸銅、硫酸鉀、硫酸鈉、三氟乙酸、溴化鉀、硫代巴比妥酸（thiobarbituric acid，TBA）、乙酰丙酮等均為分析純國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司。

1.2儀器與設(shè)備

TD5K低速大容量離心機(jī)長沙東旺實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；HH-1型恒溫水浴鍋國華電器有限公司；UV-1100型紫外-可見分光光度計上海美譜達(dá)儀器有限公司；AKTA FPLC快速蛋白質(zhì)液相色譜儀瑞典Pharmacia Biotech公司；Nicolet5700傅里葉紅外光譜儀美國Thermo Nicolet公司；FD-1000EYELA真空冷凍干燥機(jī)、EYELA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上海愛朗儀器有限公司；Agilent1260高效液相色譜儀、Agilent XDB-C18色譜柱美國Agilent公司；FD-1C-50冷凍干燥機(jī)北京博醫(yī)康實(shí)驗(yàn)儀器有限公司。

1.3方法

1.3.1單環(huán)刺螠內(nèi)臟多糖提取

新鮮單環(huán)刺螠，剪去一端，擠出內(nèi)臟，絞碎勻漿，加3倍體積丙酮脫脂，磁力攪拌過夜，抽濾后取沉淀，烘干，粉碎得內(nèi)臟干粉，按1∶20（m/V）加入蒸餾水，80℃水浴提取4h，調(diào)節(jié)pH7.0，加入1%木瓜蛋白酶在60℃水浴中消化4h，調(diào)節(jié)pH10.0，胰蛋白酶水解3h，提取溫度60℃，加酶量0.5%。提取完后調(diào)pH值至中性，100℃水浴加熱15min滅酶，離心取上清液，濃縮至原體積的1/15，80%乙醇沉淀，靜置過夜，離心取沉淀，溶解后透析（截留相對分子質(zhì)量3500透析袋），濃縮后冷凍干燥，得到內(nèi)臟多糖（viscera polysaccharide，VP）［7-8］。

1.3.2內(nèi)臟多糖的單糖組成測定

采用完全酸水解后PMP柱前衍生高效液相色譜法分析其單糖組成。采用PMP衍生化方法，對等物質(zhì)的量配制的單糖標(biāo)準(zhǔn)品和各多糖全水解后產(chǎn)物進(jìn)行PMP衍生，然后進(jìn)行液相色譜分析。色譜條件為：色譜柱：Agilent XDB-C18色譜柱（4.6mm×250mm，5μm）；柱溫：35℃；流動相：磷酸鹽緩沖液（pH6.7）-CH3CN（83∶17，V/V）；流速：1.0mL/min；檢測器：DAD檢測器（245nm）［9］。

1.3.3內(nèi)臟多糖的分子質(zhì)量測定

采用高效凝膠滲透色譜法分析單環(huán)刺螠多糖的純度及分子質(zhì)量范圍，色譜條件：色譜柱：Shodex Ohpak SB-806HQ凝膠色譜柱（300mm×8.0mm，13μm）；柱溫：35℃；流動相：0.1mol/L的Na2SO4；流速：0.5mL/min；檢測器：示差檢測器［10］。

標(biāo)準(zhǔn)曲線的繪制：已知分子質(zhì)量的系列標(biāo)準(zhǔn)葡聚糖（2.5×103、6.1×103、9.6×103、21×103、22.8×103、47.1×103u），加流動相溶解，制成5mg/mL的標(biāo)準(zhǔn)溶液。運(yùn)用GPC分析軟件以標(biāo)準(zhǔn)多糖分子質(zhì)量的對數(shù)（lgMw）對保留時間（tR）作圖，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。

1.3.4內(nèi)臟多糖的理化性質(zhì)測定

以葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品，采用硫酸-苯酚法測定總糖含量；以牛血清白蛋白為標(biāo)準(zhǔn)品，采用Folin-酚法測定蛋白質(zhì)含量；以葡萄糖醛酸作為標(biāo)準(zhǔn)品，采用咔唑-硫酸法測定糖醛酸含量；以硫酸鉀為標(biāo)準(zhǔn)品，采用氯化鋇-明膠比濁法測定硫酸根含量；采用Elson-Morgan法，以氨基葡萄糖為標(biāo)準(zhǔn)品測定氨基糖含量［11-15］。

1.3.5內(nèi)臟多糖的紅外光譜掃描

采用KBr壓片法，將約為0.1mg多糖樣品與適量干燥KBr粉末研磨混合均勻后，研制成透明薄片在Nicolet Nexus470型紅外光譜儀上進(jìn)行測定。紅外光譜儀測定參數(shù)如下：背景掃描次數(shù)：32次；掃描范圍為4000～400cm-1；分辨率：4.0cm-1；檢測器：DTGS檢測器。

1.3.6內(nèi)臟多糖的甲基化

采用改良的Hakomori法對單環(huán)刺螠內(nèi)臟多糖進(jìn)行甲基化分析［16］。用2mol/L三氟乙酸將甲基化的樣品完全酸水解，經(jīng)硼氫化鈉還原，用吡啶和乙酸酐反應(yīng)生成乙?；苌?，進(jìn)行氣相色譜-質(zhì)譜聯(lián)用（gas chromatographymass spectrometry，GC-MS）分析。分析條件：色譜柱：Agilent122-2932DB225（0.25mm×30m，0.25μm）；程序升溫：從100℃開始以5℃/min升溫至220℃；進(jìn)樣口溫度：250℃；質(zhì)譜真空度：14.5psi；載氣：氦氣；離子源：EI70eV；檢測器：MSD檢測器；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量為0.2μL。

1.3.7內(nèi)臟多糖抗脂質(zhì)過氧化活性測定

以TBA法檢測多糖樣品的脂質(zhì)過氧化清除能力，樣品配制成不同質(zhì)量濃度梯度（0、2、4、6、8、10mg/mL）的VP溶液，以2，6-二叔丁基-4-甲基苯酚（butylated hydroxytoluene，BHT）和VC作為陽性對照，樣品抗氧化活性用對卵黃脂蛋白脂質(zhì)過氧化的清除率表示。分別加入1.0mL不同質(zhì)量濃度的VP溶液，吸取0.4mL卵黃懸液（卵黃與磷酸緩沖溶液（phosphate buffered solution，PBS）體積比1∶25），再加入0.4mL25mmol/L的FeSO4·7H2O，用PBS補(bǔ)充至4mL，振蕩15min，取出后加入1.0mL20%的三氯乙酸（trichloroacetic acid，TCA）靜置，3500r/min離心10min，吸取4mL上清液加入2mL0.8%TBA，加塞放入沸水浴中反應(yīng)15min，在分光光度計532nm波長處比色測定吸光度，以空白管（6mL PBS）歸零，未加樣品管的吸光度為A0，樣品管的吸光度為A，樣品抗氧化活性用對卵黃脂蛋白脂質(zhì)過氧化的清除率表示，按照下式計算［17］。

2　結(jié)果與分析

2.1單環(huán)刺螠內(nèi)臟多糖的提取

表1　不同提取方法的多糖得率及糖含量比較Table1Polysaccharide yields and chemical composition of extracts by different extraction methodsthods

如表1所示，脫脂單環(huán)刺螠內(nèi)臟粉末經(jīng)熱水提取后再經(jīng)兩步酶解，多糖得率為6.2%，呈棕色絮狀。單環(huán)刺螠內(nèi)臟富含蛋白質(zhì)，熱水提取后粗多糖中混有大量蛋白質(zhì)，需要進(jìn)行蛋白質(zhì)的去除。對比Sevag法或TCA法等去除蛋白質(zhì)效果來看，通過熱水提取后兩步酶解，不僅可以使多糖充分溶解，而且能夠使蛋白質(zhì)變性酶解，釋放與之結(jié)合的多糖，同時也起到了去除蛋白質(zhì)的效果。所以與單純的熱水提取后Sevag法或TCA法去除蛋白質(zhì)相比，熱水提取后再酶解能夠提高多糖粗品的得率和純度，并且減少了多糖的降解或損失，更適合海洋動物多糖的提取。

2.2單環(huán)刺螠內(nèi)臟多糖的單糖組成

圖1　PMP柱前衍生高效液相色譜圖Fig.1HPLC chromatogram of the PMP pre-column derivative

如圖1A所示，和單糖標(biāo)準(zhǔn)品的色譜圖（圖1B）比對可知，VP單糖組成非常復(fù)雜，是既含有中性糖，又含有酸性糖和堿性糖的雜多糖。另外，中性糖還包括了六碳糖、五碳糖和六碳甲基糖。單糖組成中葡萄糖（Glc）是最主要成分，其次還含有氨基葡萄糖（GlcN）、甘露糖（Man）、半乳糖（Gal）和巖藻糖（Fuc），還含有少量的木糖（Xyl）、鼠李糖（Rha）、葡萄糖醛酸（GlcUA）和氨基半乳糖（GalN）。所含單糖物質(zhì)的量比為n（Man）∶n（GlcN）∶n（Rha）∶n（GlcUA）∶n（GalN）∶n（Glc）∶n（Gal）∶n（Xyl）∶n（Fuc）= 1∶1.38∶0.87∶0.53∶0.52∶5.37∶1.38∶1.05∶2.40。2.3單環(huán)刺螠內(nèi)臟多糖的分子質(zhì)量

圖2VP高效凝膠滲透色譜圖Fig.2HPGPC chromatogram of VP

如圖2所示，單環(huán)刺螠內(nèi)臟多糖VP的高效凝膠滲透色譜圖呈現(xiàn)單一和較對稱的峰，表明單環(huán)刺螠內(nèi)臟多糖的分子質(zhì)量分布比較集中。通過分子質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)曲線方程：y=-0.7919x+21.601（R2=0.997）計算得到VP分子質(zhì)量主要集中在4.1×103u左右。由此可知，單環(huán)刺螠內(nèi)臟多糖VP為分子質(zhì)量分布較為單一的低聚糖。

2.4單環(huán)刺螠內(nèi)臟多糖的理化性質(zhì)分析

對單環(huán)刺螠內(nèi)臟多糖VP進(jìn)行理化性質(zhì)分析，其總糖含量為69.2%，蛋白質(zhì)含量2.7%，表明通過酶解已經(jīng)去除絕大部分蛋白質(zhì)，糖醛酸含量為5.1%，氨基己糖含量為13.6%，結(jié)果與單糖組成一致。另外，和很多海洋動物來源的類糖胺聚糖一樣，VP含有硫酸取代基，含量為8.9%。VP總糖含量測定以含量最多的葡萄糖Glc為標(biāo)準(zhǔn)對照品，但是由于氨基己糖苯酚硫酸法不顯色，另外由于硫酸取代基的影響，造成糖含量偏低。因此對于富含氨基糖的多糖總糖含量測定更接近于中性糖測定［18］。綜合以上結(jié)果可知，單環(huán)刺螠內(nèi)臟多糖為硫酸酯化的低聚類糖胺聚糖。

2.5單環(huán)刺螠內(nèi)臟多糖的紅外光譜分析

圖33單環(huán)刺螠內(nèi)臟多糖的紅外光譜Fig.3IR spectrum of VP

如圖3所示，3387cm-1處的強(qiáng)吸收峰是多糖O—H或者N—H的吸收峰；2930cm-1處弱吸收為甲基或者亞甲基C—H的伸縮振動；1652cm-1處的吸收峰歸屬為羧基或酰胺基團(tuán)C=O的伸縮振動；1245cm-1處的弱的吸收峰是S=O的伸縮振動引起的，同樣印證了多糖含有少量硫酸基；1038cm-1處的強(qiáng)吸收峰為多糖環(huán)醚C—O—C的伸縮振動峰，是多糖的特征吸收峰。818cm-1處的吸收峰表明VP存在b構(gòu)型連接方式［19-20］。

2.6單環(huán)刺螠內(nèi)臟多糖的甲基化分析

表22單環(huán)刺螠內(nèi)臟多糖甲基化后GC--MMSS分析Table2Analysis results by GC-MS for methylated polysaccharide

VP單糖組成非常復(fù)雜，特別是堿性糖和酸性糖由于極性較大，很難通過GC-MS對其連接方式進(jìn)行準(zhǔn)確的測定。本實(shí)驗(yàn)只確定了大部分中性糖的連接方式。如表2所示，葡萄糖是VP最主要的單糖組成，其連接方式主要為Glcp（1→、→4）-Glcp（1→、→4，6）-Glcp（1→和→3，6）-Glcp（1→。甘露糖主要含有Manp（1→、→2）-Manp（1→和→6）-Manp（1→連接方式。半乳糖含有Galp（1→和→4）-Galp（1→連接方式。而巖藻糖主要含有→4）-Fucp（1→連接方式，另外還含有Fucp（1→、→3）-Fucp（1→和→3，4）-Fucp（1→。從這些多糖的連接方式可以看出，單環(huán)刺螠內(nèi)臟多糖富含分支結(jié)構(gòu)，推測分支可能發(fā)生在→4）-Fucp（1→的3位，→4）-Glcp（1→的6位或→3）-Glcp（1→的6位，這些位點(diǎn)也可能是硫酸基的取代位點(diǎn)。GC-MS未給出更多單糖的連接方式相關(guān)信息，因此不能判斷多糖的構(gòu)象，進(jìn)一步確定糖醛酸和氨基糖的連接方式、多糖的構(gòu)象及主鏈、支鏈的連接順序還需要進(jìn)行深入的結(jié)構(gòu)研究。

2.7單環(huán)刺螠內(nèi)臟多糖的抗脂質(zhì)過氧化活性

糖胺聚糖是很多海洋生物如海參、扇貝的重要活性成分［21-22］，具有廣泛的生物活性，而調(diào)節(jié)血脂是其重要活性之一。研究表明海洋糖胺聚糖能夠有效地降低脂質(zhì)過氧化物的產(chǎn)生，通過自由基的清除達(dá)到調(diào)節(jié)心血管并延緩衰老的作用［23］。單環(huán)刺螠內(nèi)臟多糖作為低分子質(zhì)量的硫酸酯化類糖胺聚糖，通過對比分析，內(nèi)臟多糖中的類糖胺聚糖體現(xiàn)出良好的體外抗脂質(zhì)過氧化活性（圖4），在10mg/mL時對自由基的清除率接近90%，其半數(shù)清除質(zhì)量濃度為2.47mg/mL，表明單環(huán)刺螠內(nèi)臟多糖存在較好的脂質(zhì)過氧化物清除作用，推測單環(huán)刺螠內(nèi)臟類糖胺聚糖是單環(huán)刺螠內(nèi)臟中的活性成分，其生物活性有待進(jìn)一步深入開發(fā)。

圖44單環(huán)刺螠內(nèi)臟多糖的脂質(zhì)過氧化物清除曲線Fig.4Scavenging curve of VP against lipid peroxide

3　結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)通過兩步酶解法提取單環(huán)刺螠內(nèi)臟多糖，得率為6.2%，和單純熱水提取相比，酶解法大大降低了內(nèi)臟多糖的蛋白質(zhì)含量，相應(yīng)地提高了多糖的純度。單環(huán)刺螠內(nèi)臟多糖的分子質(zhì)量分布較為均一，約為4.1×103u。理化性質(zhì)和單糖組成分析結(jié)果表明，單環(huán)刺螠內(nèi)臟為硫酸酯化的類糖胺聚糖，硫酸根含量為8.9%，單糖組成以葡萄糖（Glc）為主，其次還含有氨基葡萄糖（Glc）、甘露糖（Man）、半乳糖（Gal）和巖藻糖（Fuc），還含有少量的木糖（Xyl）、鼠李糖（Rha）、葡萄糖醛酸（GlcUA）和氨基半乳糖（GalN）。海洋動物中很多都含有硫酸酯化的雜多糖，單糖組成各異，單環(huán)刺螠內(nèi)臟多糖的單糖組成和櫛孔扇貝、方格星蟲等單糖組成較為相似，只是單環(huán)刺螠內(nèi)臟多糖葡萄糖的比例更高，而方格星蟲多糖不含有硫酸基［24-25］。

結(jié)構(gòu)研究表明單環(huán)刺螠內(nèi)臟多糖為富含β構(gòu)型的多分支結(jié)構(gòu)，主要由Glcp（1→、→4）-Glcp（1→、→4，6）-Glcp（1→和→3，6）-Glcp（1→組成，還存在Manp（1→、→2）-Manp（1→和→6）-Manp（1→連接方式。半乳糖含有Galp（1→和→4）-Galp（1→連接方式。而巖藻糖主要含有→4）-Fucp（1→，另外還有Fucp（1→、→3）-Fucp（1→和→3，4）-Fucp（1→連接方式。

海洋糖胺聚糖具有豐富的生物活性，在調(diào)節(jié)免疫力、調(diào)節(jié)心血管疾病和抗腫瘤等方面都具有良好的生物活性。而對單環(huán)刺螠內(nèi)臟類糖胺聚糖體外活性的初步研究表明，其也呈現(xiàn)出良好的體外脂質(zhì)過氧化物清除活性，提示其可能具有調(diào)節(jié)血脂、預(yù)防動脈粥樣硬化等相關(guān)活性，具有深入研究的價值，其具體結(jié)構(gòu)和生物活性還有待進(jìn)一步研究。

［1］李諾，宋淑蓮，唐永政.單環(huán)刺螠［J］.生物學(xué)通報，1998，33（8）：12-14.

［2］王雷，劉海梅，彭鴿，等.單環(huán)刺螠營養(yǎng)成分及體內(nèi)活性物質(zhì)的研究進(jìn)展［J］.魯東大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2011，27（4）：342-345.

［3］孟祥欣，郭承華，董新偉，等.單環(huán)刺螠（Urechis unicinctus）廢棄內(nèi)臟營養(yǎng)成分分析［J］.煙臺大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)與工程版，2008，21（3）：232-234.

［4］王靜鳳，王奕，趙林，等.日本刺參的抗腫瘤及免疫調(diào)節(jié)作用研究［J］.中國海洋大學(xué)學(xué)報：自然科學(xué)版，2007，37（1）：93-96.

［5］遲玉森，莊桂東，黃福祥，等.海參多糖對小白鼠傷口愈合的影響［J］.食品科學(xué)，2005，26（7）：211-214.

［6］許靜，解秋菊.海參臟器多糖體外抗氧化活性研究［J］.食品研究與開發(fā)，2011，32（12）：29-31.

［7］許靜，周鳳梅，彭芳，等.酶法提取海參臟器多糖條件優(yōu)化研究［J］.食品研究與開發(fā)，2011，31（8）：28-31.

［8］焦緒棟，安傳鋒，王福亮，等.單環(huán)刺螠廢棄內(nèi)臟中粗多糖的提取工藝優(yōu)化［J］.食品科學(xué)，2013，34（2）：27-30.

［9］CHEN Yin，MAO Wenjun，YANG Yupin，et al.Structure and antioxidant activity of an extracellular polysaccharide from coralassociated fungus， Aspergillus versicolor LCJ-5-4［J］. Carbohydrate Polymers，2012，87（1）：218-226.

［10］殷秀紅，趙峽，張紫恒，等.紫貽貝多糖的提取，分離和基本理化性質(zhì)分析［J］.中國海洋藥物，2011，30（2）：12-18.

［11］DUBOIS M，GILLES K A，HAMILTON J K.Colorimetric method for determination of sugars and related substances［J］.Analytical Biochemistry，1956，28：350-356.

［12］BENSADOUN A，WEINSTEIN D.Assay of proteins in the presence of interfering materials［J］.Analytical Biochemistry，1976，70（1）：241-250.

［13］BITTER T，MUIR H M.A modified uronic acid carbazole reaction［J］.Analytical Biochemistry，1962，4：330-334.

［14］TERHO T，HARTIALA K.Method for determination of the sulfate content of glycosamino glycans［J］.Analytical Biochemistry，1971，41：471-477.

［15］張維杰.糖復(fù)合物生化研究技術(shù)［M］.2版.杭州：浙江大學(xué)出版社，1999：18.

［16］CHEN Yin，MAO Wenjun，WANG Baofeng，et al.Preparation and characterization of an extracellular polysaccharide produced by the deep-sea fungus Penicillium griseofulvum［J］.Bioresource Technology，2013，132：178-181.

［17］LIU X，SUN Z L，ZHANG M S，et al.Antioxidant and antihyperlipidemic activities of polysaccharides from sea cucumber Apostichopus japonicus［J］.Carbohydrate Polymers，2012，90（4）：1664-1670.

［18］蘇暢，夏文水，姚惠源.氨基葡萄糖和乙酰氨基葡萄糖的測定方法［J］.食品工業(yè)科技，2003，24（6）：74-77.

［19］王長云，管華詩，李八方.扇貝氨基多糖的紅外光譜分析［J］.海洋湖沼通報，1994（3）：32-39.

［20］CHEN Shiguo，WANG Jingfeng，XUE Changhu，et al.Sulfation of a squid ink polysaccharide and its inhibitory effect on tumor cell metastasis［J］.Carbohydrate Polymers，2010，81（3）：560-566.

［21］范秀萍，王瑞芳，吳紅棉，等.菲律賓蛤仔糖胺聚糖RG-1的結(jié)構(gòu)特征及免疫活性研究［J］.中國食品學(xué)報，2012，12（2）：186-190.

［22］李廣靖，崔青曼，袁春營.蝦夷扇貝下腳料糖胺聚糖的化學(xué)組成與生物學(xué)功能研究［J］.食品工業(yè)科技，2012，33（24）：134-139.

［23］文松松, 趙峽，于廣利，等.海洋動物多糖研究進(jìn)展［J］.中國海洋藥物雜志，2008，28（4）：46-51.

［24］李珊，劉賽.扇貝裙邊中糖胺聚糖的氣相色譜定性定量分析及紅外光譜分析［J］.中國海洋藥物，2004，23（6）：8-11.

［25］張桂和，趙謀明，王煒.方格星蟲多糖分離純化及性質(zhì)鑒定［J］.食品與生物技術(shù)學(xué)報，2006，25（4）：63-66.

Physico-chemical Properties and Structure Analysis of Viscera Polysaccharide of Urechis unicinctus and Its Lipid Peroxidation Inhibition Activity

ZHU Senjun，CHEN Mina，NIU Qingfeng，LI Tao，QU Youle，CHEN Yin*
（College of Food and Pharmacy，Zhejiang Ocean University，Zhoushan316022，China）

A polysaccharide was extracted from Urechis unicinctus viscera through digestion by papain and trypsin successively.The physico-chemical properties and structure information of the polysaccharide such as monosaccharide composition，molecular weight and monosaccharide linkages were investigated by chemical and modern spectroscopic analysis.The antioxidant activity in vitro of the polysaccharide was evaluated as well.The results showed that the yield of the viscera polysaccharide（VP）from Urechis unicinctus was6.2%.VP was a heteropolysaccharide with molecular weight of about4.1×103u，and consisted of mannose，glucosamine，rhamnose，glucuronic acid，galactosamine，glucose，galactose，xylose and fucose at a molar ratio of1：1.38：0.87：0.53：0.52：5.37：1.38：1.05：2.40.VP contained8.9%sulfate ester.As the most dominant monosaccharide found in VP，glucose had the linkages of Glcp（1→，→4）-Glcp（1→，→4，6）-Glcp（1→and→3，6）-Glcp（1→.And mannose had Manp（1→，→2）-Manp（1→and→6）-Manp（1→linkage styles.Galactose had the linkages of Galp（1→and→4）-Galp（1→.The linkages of fucose were composed of→4）-Fucp（1→，F(xiàn)ucp（1→，→3）-Fucp（1→and→3，4）-Fucp（1→.VP as a glycosaminoglycan-like polysaccharide had rich bioactivities.VP possessed good lipid peroxidation inhibition ability as evidenced by its EC50value at2.47mg/mL.At10mg/mL，the inhibition rate of lipid peroxidation by VP was near90%.

Urechis unicinctus；viscera polysaccharide；structure；physico-chemical property；lipid peroxidation

R151.2

A

1002-6630（2015）05-0067-05

10.7506/spkx1002-6630-201505013

2014-04-28

浙江省自然科學(xué)基金項目（LQ14H300001）；海洋藥物教育部重點(diǎn)實(shí)驗(yàn)室基金項目（KLMD（OUC）201402）

朱森君（1992—），女，碩士研究生，研究方向?yàn)楹Ｑ筇烊凰幬?。E-mail：abc973262556@163.com

陳蔭（1984—），男，副教授，博士，研究方向?yàn)楹Ｑ笏幱觅Y源開發(fā)與利用。E-mail：mojojo1984@163.com