紅景天膠囊對兔急性心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用

雷尚芳，鮑升娟，郭俐宏，穆敬平，雷尚林

（1.十堰市太和醫(yī)院，湖北十堰 442000;2.十堰市張灣區(qū)花果醫(yī)院，湖北十堰 442000;3.十堰市張灣區(qū)衛(wèi)生監(jiān)督局，湖北十堰 442000）

紅景天膠囊對兔急性心肌缺血再灌注損傷的保護(hù)作用

雷尚芳1，鮑升娟2，郭俐宏1，穆敬平1，雷尚林3*

（1.十堰市太和醫(yī)院，湖北十堰 442000;2.十堰市張灣區(qū)花果醫(yī)院，湖北十堰 442000;3.十堰市張灣區(qū)衛(wèi)生監(jiān)督局，湖北十堰 442000）

目的 研究紅景天膠囊對兔急性心肌缺血再灌注損傷的的影響及其保護(hù)機(jī)制。方法 實(shí)驗(yàn)選取10只健康日本大耳白兔為假手術(shù)組，另取20只隨機(jī)分為模型組及紅景天組，2組均采用手術(shù)結(jié)扎左側(cè)冠狀動脈前降支30 min后再灌注60 min，反復(fù)3次以造成急性心肌缺血再灌注損傷動物模型。術(shù)后3組動物均灌胃給藥，測定治療前及治療1、2周總超氧化物歧化酶（T-SOD）、一氧化氮（NO）、血管內(nèi)皮素-1（ET-1）、血清丙二醛（MDA）、血清肌酸激酶（CK）、白細(xì)胞介素-6（IL-6）水平，記算治療2周后兔心肌缺血梗死率（%）等指標(biāo)，并分析紅景天膠囊對兔急性心肌缺血再灌注損傷的影響。結(jié)果 紅景天膠囊明顯提高紅景天組兔NO含量及T-SOD活性，降低ET-1及血清MDA、CK、IL-6水平，減少急性心肌缺血梗死率，與模型組比較，差異均有統(tǒng)計學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 紅景天膠囊可提高兔急性心肌缺血再灌注后T-SOD及NO活性，促進(jìn)氧自由基清除酶清除氧自由基、降低心肌缺血時脂質(zhì)過氧化，進(jìn)而改善再灌注損傷后受損血管內(nèi)皮并維持其正常功能，增加心肌組織耐缺氧能力，對急性心肌缺血再灌注具有保護(hù)作用。

日本大耳白兔;紅景天膠囊;缺血再灌注;超氧化物歧化酶

冠脈溶栓術(shù)、冠脈搭橋術(shù)、急性心肌梗死、心肌梗死再通術(shù)等疾病和手術(shù)常引起急性心肌缺血再灌注損傷［1］。急性心肌缺血常導(dǎo)致室性心律失常，血液檢查時氧自由基清除酶活性降低、血清心肌酶譜升高等臨床表現(xiàn)。大面積急性心肌缺血患者常因心衰導(dǎo)致循環(huán)衰竭而猝死，病死率高，嚴(yán)重威脅患者生命［2］。紅景天膠囊具有抗缺氧、抑制過氧化脂質(zhì)的產(chǎn)生［3］，改善冠狀動脈血流、抑制血栓形成的作用，對缺血心肌有良好的保護(hù)作用［4］，臨床上常用于此類疾病的輔助治療。但紅景天膠囊對急性心肌缺血再灌注損傷的影響及其機(jī)制鮮有系統(tǒng)的動物實(shí)驗(yàn)研究。本實(shí)驗(yàn)采用日本大耳白兔復(fù)制急性心肌缺血再灌注損傷動物模型，經(jīng)灌胃給藥治療的方法，研究其對日本大耳白兔急性心肌缺血再灌注損傷的影響，為其臨床用藥提供實(shí)驗(yàn)及理論依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動物 日本大耳白兔30只，體質(zhì)量1.8～2.5 kg，實(shí)驗(yàn)動物由湖北醫(yī)藥學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，實(shí)驗(yàn)動物生產(chǎn)許可證SCXK（鄂）2011-0008，實(shí)驗(yàn)動物設(shè)施使用許可證SYXK（鄂）2011-0031。實(shí)驗(yàn)前選取10只健康日本大耳白兔作為假手術(shù)組，另取20只按文獻(xiàn)［5］分別制備急性心肌缺血動物模型，并采用隨機(jī)數(shù)字表編號隨機(jī)分為模型組、紅景天組。

1.2 儀器及藥品 BL-420F生物信號采集記錄系統(tǒng)（成都泰盟公司）;小動物呼吸機(jī)（成都泰盟公司）;紅景天膠囊（西藏央科生物科技生產(chǎn)，批準(zhǔn)文號:藏衛(wèi)食準(zhǔn)字〔2002〕08號）。MDA、CK及T-SOD檢測試劑盒（南京建成生物工程研究所）;ET-1、NO、IL-6試劑盒（杭州達(dá)文生物有限公司）。

1.3 兔急性心肌缺血動物模型制備 3組動物在造模前夜均禁食但不禁水，耳緣靜脈注射2%戊巴比妥鈉（120 mg/kg）麻醉固定，于胸骨左緣4－5肋間隙開胸暴露心臟，并接小動物呼吸機(jī)防止動物窒息死亡。假手術(shù)組僅開胸但不結(jié)扎左冠狀動脈前降支造模。模型組及紅景天組在距心臟根部0.2 cm處用6號手術(shù)線結(jié)扎左冠狀動脈前降支，結(jié)扎前在活結(jié)下置一5號輸液器軟管，拉緊手術(shù)線結(jié)扎30 min后抽出輸液器軟管復(fù)灌30 min，反復(fù)3次后抽出輸液器軟管及絲線，造成兔急性心肌缺血再灌注損傷動物模型，術(shù)中以出現(xiàn)T波倒置、ST段抬高及室性心律失常為造模成功標(biāo)志。造模后小心關(guān)閉動物胸腔，分層縫合，碘伏消毒（2次/d，連續(xù)5 d），術(shù)后注射青霉素（80萬U/次，1次/d，連續(xù)3 d）以預(yù)防感染。紅景天組經(jīng)灌胃給藥紅景天膠囊4 mL/（kg·d），按成人體表面積換算:兔（200 g）/人（70 kg）=0.018/1;模型組及假手術(shù)組術(shù)后灌等量生理鹽水，3組動物均連續(xù)給藥治療2周。

1.4 檢測指標(biāo) 參照文獻(xiàn)［6］，3組動物于再灌注前及治療1、2周3個時間點(diǎn)經(jīng)耳緣靜脈各取血2 mL加入離心管中，4℃冰箱靜置1 h，然后再按5 000 r/min于高速離心機(jī)中離心10 min，取上清液，采用酶聯(lián)免疫吸附法（ELISA）檢測，嚴(yán)格按試劑盒說明書操作，分別檢測NO含量及T-SOD活性，ET-1、MDA、CK、IL-6水平。治療2周后在取血完畢時用手術(shù)剪斷頭處死動物，暴露心臟并找到胸主動脈，用1%伊該文思藍(lán)1 mL經(jīng)由主動脈注入左心室，剪下心臟，精確剔除心房及右室擴(kuò)藍(lán)染區(qū)域，精確剝離梗死部位，電子天平精確稱左心室梗死部位重量并計算梗死率，梗死率（%）=（梗死部位質(zhì)量/心肌總質(zhì)量）×100%。

1.5 統(tǒng)計學(xué)處理 數(shù)據(jù)處理采用SPSS 18.0統(tǒng)計分析軟件，全部實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示，治療前后比較采用配對t檢驗(yàn)，組間比較采用成組t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 紅景天膠囊對兔T-SOD、NO及ET-1水平的影響 見表1。

表1 紅景天膠囊對兔T-SOD、ET-1及NO水平的影響（±s，n=10）

表1 紅景天膠囊對兔T-SOD、ET-1及NO水平的影響（±s，n=10）

注:與治療前比較，#P＜0.05;與假手術(shù)組比較，△P＜0.05;與模型組比較，▲P＜0.05

組 別 T-SOD/（U/mL））造模前 治療1周 治療2周ET-1/（ng/mL）造模前 治療1周 治療2周NO/（nmol/mL）造模前 治療1周 治療2周假手術(shù)組 221.61 ±17.72225.67±17.34 224.99±19.71 110.21± 9.92108.21 ±9.97 107.97 ±8.27 107.20 ±9.78109.20± 9.28 107.23± 9.27模型組 217.32 ±15.74107.28±10.70#△ 122.21±13.71#△ 108.38± 9.81231.30 ±14.89#△ 217.37 ±17.80#△ 105.40 ±8.3180.40± 7.33#△ 89.45± 6.33#△▲紅景天組 215.15 ±16.01156.05±11.09#△▲ 179.21±10.39#△▲ 112.20±13.20170.20 ±7.20#△▲ 139.20 ±8.72#△▲ 106.25 ±7.97164.70±12.32#△▲ 120.78± 9.79#△▲

2.2 紅景天膠囊對兔MDA、CK及IL-6的影響 見 表2。

表2 紅景天膠囊對兔MDA、CK及IL-6的影響（±s，n=10）

表2 紅景天膠囊對兔MDA、CK及IL-6的影響（±s，n=10）

注:與治療前比較，#P＜0.05;與假手術(shù)組比較，△P＜0.05;與模型組比較，▲P＜0.05

組 別 CK/（IU/L）造模前 治療1周 治療2周MDA/（nmol/mL）造模前 治療1周 治療2周IL-6/（pg/mL）造模前 治療1周 治療2周假手術(shù)組 42.12 ±3.27 40.01 ±5.22 41.700 ±5.07 2.51± 0.21 2.49± 0.17 2.530± 0.21 97.50 ±12.2192.90±19.10 89.30 ±17.21模型組 42.79 ±3.50 161.70±12.17#△ 127.34±10.47#△ 2.53± 0.09 32.10±3.43#△ 24.13± 2.01#△ 141.5 ±19.10 152.40±17.70 142.50 ±21.70紅景天組 43.27 ±5.21 97.37± 7.22#△▲ 59.27 ±4.27#△▲ 2.49± 0.07 19.41±1.19#△▲ 13.37± 0.82#△▲ 137.7 ±20.00 79.40±14.00#△▲ 65.70± 9.80#△▲

2.3 紅景天膠囊對兔急性心肌缺血面積的影響 見 表3。

表32 周后測得兔急性心肌缺血范圍（±s，n=10）

表32 周后測得兔急性心肌缺血范圍（±s，n=10）

注:與模型組比較，#P ＜0.05

組 別 壞死區(qū)/g 非壞死區(qū)/g 左室重量/g 梗死率/%模型組 0.158 7 ±0.075 0.312 1 ±0.042 1 0.463 9 ±0.061 37.27 ±0.84紅景天組 0.121 7 ±0.061# 0.412 4 ±0.043 8# 0.452 8 ±0.024 28.11 ±0.54#

3 討論

紅景天（Crassulaceae）為景天科植物紅景天或大花紅景天，主產(chǎn)于西藏、四川、吉林、前蘇聯(lián)等高原高寒地區(qū)，素有“高原人參”之稱［7］。性甘、澀，寒，歸脾、肺經(jīng)，藥用其根莖。現(xiàn)代醫(yī)學(xué)研究［8］發(fā)現(xiàn)，紅景天含紅景天甙、紅景天甙元、二苯甲基六氫吡啶、沒食子酸、β-谷甾醇等成分。紅景天苷是紅景天主要藥理活性［9］，具有抗疲勞、耐缺氧、抗寒冷、抗微波輻射，提高免疫力［10］，明顯抑制輻射引起的心和肝臟LPO（過氧化脂質(zhì)）的產(chǎn)生，對脂質(zhì)和細(xì)胞膜起到保護(hù)作用［11］?，F(xiàn)已制成紅景天膠囊、口服液及注射液等應(yīng)用于臨床治療冠心病等心腦血管栓塞及缺血再灌注類疾病并取得了良好的療效［12］。

機(jī)體在正常情況下，自由基的生成與清除維持著動態(tài)平衡，當(dāng)發(fā)生急性心肌梗死后，特別在缺血區(qū)血管再通后氧自由基大量產(chǎn)生，血管內(nèi)皮合成和釋放NO相對不足，造成拮抗ET-1作用減弱。同時，機(jī)體對氧自由基的清除能力亦急劇下降而導(dǎo)致再灌注損傷，此時 ET-1、MAD、CK大量產(chǎn)生，T-SOD酶及 NO活性下降，造成細(xì)胞膜基本特征的改變，細(xì)胞代謝和功能發(fā)生障礙甚至死亡，臨床檢測ET-1、MAD、CK升高，T-SOD及NO活性下降。

ET-1主要由血管內(nèi)皮細(xì)胞生成，對調(diào)節(jié)血管張力、控制血流分布及心肌缺血再灌注等方面起重要作用，ET-1參與心肌缺血再灌注損傷的病理過程，當(dāng)發(fā)生急性心肌缺血時會造成血管內(nèi)皮功能紊亂，ET-1水平顯著升高［13］。IL-6是重要的炎癥因子，在急性心肌梗死時的炎性反應(yīng)時會大量產(chǎn)生，其具有廣泛的誘導(dǎo)炎癥和調(diào)節(jié)免疫的功能，可客觀反映機(jī)體炎性活動［14］，并與病情嚴(yán)重程度呈正相關(guān)［15］。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，紅景天膠囊可提高T-SOD活性，抑制缺血再灌注兔CK及MDA的釋放，減少IL-6介導(dǎo)的炎性反應(yīng)，促進(jìn)NO產(chǎn)生，并使NO及ET-1達(dá)到動態(tài)平衡。同時，紅景天組心肌梗死率低于模型組，說明紅景天膠囊能使兔急性心肌缺血梗死范圍縮小，減輕急性心肌缺血程度。

綜上所述，紅景天膠囊具有明顯的改善急性心肌缺血再灌注后心肌缺血缺氧、降低IL-6介導(dǎo)的炎性反應(yīng)，增加T-SOD及NO活性，促進(jìn)氧自由基清除酶清除氧自由基能力，維持血管內(nèi)皮結(jié)構(gòu)及功能的完整性，保護(hù)受損心肌的作用，有較高的臨床使用價值。

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Protective effects of Rhodiola Capsule on rabbits with acute myocardial ischemia reperfusion injury

LEI Shangfang1，BAO Shengjuan2，GUO Lihong1，MU Jingping1，LEI Shanglin3*
（1.Taihe Hospital of Shiyan City，Shiyan 442000，Hubei Province，China;2.Zhangwan District Huaguo Hospital of Shiyan City.Shiyan 442000，Hubei Province，China;3.Zhangwan District Health Supervision Bureau of Shiyan City，Shiyan 442000，Hubei Province，China）

ObjectiveTo study the effects of Rhodiola Capsule on rabbits with acute myocardial ischemia reperfusion injury and its protective mechanism.MethodsWe selected 10 healthy Japanese big ear rabbits into sham operation group，another 20 were randomly divided into model group and Rhodiola group，two rabbits were by surgical ligation of the left anterior descending coronary artery for 30 min and reperfusion for 60 min，repeated 3 times to cause acute myocardial ischemia reperfusion injury animal model.After three groups of animals were gavage，measured before treatment and 1 weeks of treatment 2 W total superoxide dismutase（T-SOD），nitric oxide（NO）and endothelin-1（ET-1），serum malondialdehyde（MDA），serum creatine kinase（CK），interleukin-6（IL-6）level，counting for the treatment of rabbit myocardial ischemia or infarction rate after 2 W（%）and other indicators，and by the analysis of effects of Rhodiola Capsule on rabbits with acute myocardial ischemia reperfusion injury.ResultsRhodiola capsule obviously improve Rhodiola group of rabbit NO content and T-SOD activity，decrease ET-1 and serum MDA，CK，IL-6 levels，reduce the rate of acute myocardial ischemic infarction.Compared with the model group，P ＜0.05，with significant difference.ConclusionRhodiola capsule can improve T-SOD and NO activity in rabbits with acute myocardial ischemia reperfusion，promote the oxygen free radical scavenging enzymes scavenging oxygen free radicals，lipid peroxidation，reduce the myocardial ischemia reperfusion injury，and then improve the damaged vascular endothelial and maintain its normal function，increase myocardial tissue hypoxia，on acute myocardial ischemia and perfusion has protective effect.

Japanese big ear white rabbits;Rhodiola Capsule;ischemia reperfusion;enzyme

R285.5

A

2095－6258（2015）04－0673－04

10.13463/j.cnki.cczyy.2015.04.005

湖北省科技廳基金項(xiàng)目（2013cfc037）。

雷尚芳（1972－），女，主管護(hù)師，主要從事臨床藥理及傳染病護(hù)理。

雷尚林，電話－18972486567，電子信箱－951777718@qq.com

2014－11－18）