江西省不同產(chǎn)地粉防己主要藥效成分含量分析

賴曉蓮，郭圣茂，彭仁，陳蘭蘭，廖興國(guó)

(1.江西農(nóng)業(yè)大學(xué)園林與藝術(shù)學(xué)院，江西 南昌 330045；2.江西師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，江西 南昌 330027)

江西省不同產(chǎn)地粉防己主要藥效成分含量分析

賴曉蓮1，郭圣茂1，彭仁2，陳蘭蘭1，廖興國(guó)1

(1.江西農(nóng)業(yè)大學(xué)園林與藝術(shù)學(xué)院，江西 南昌 330045；2.江西師范大學(xué)生命科學(xué)學(xué)院，江西 南昌 330027)

采用高效液相色譜法測(cè)定江西省15個(gè)產(chǎn)地粉防己藥材中粉防己堿、防己諾林堿2種主要藥效成分的含量。結(jié)果表明：該測(cè)定方法精密度、重現(xiàn)性良好，供試樣品在48 h內(nèi)穩(wěn)定，適用于粉防己藥材中粉防己堿、防己諾林堿的測(cè)定；不同產(chǎn)地粉防己藥材中2種有效成分的含量存在較大差異，粉防己堿含量的變化范圍為2.28%～6.94%，防己諾林堿含量變化范圍為1.34%～3.15%，以永豐、樂平、宜黃、高安4個(gè)產(chǎn)地藥材中2種有效成分的含量較高。

粉防己；粉防己堿；防己諾林堿；高效液相色譜法

粉防己(StephaniatetrandraS.Moore)又名石蟾蜍、漢防己、白木香。為防己科千金藤屬多年生落葉藤本植物，生于山坡、丘陵地帶的草叢及灌木林緣。粉防己是常用重要中藥，以根入藥，其味苦，性寒，有利水消腫、祛風(fēng)止痛之功效，主治水腫鼓脹、手足攣痛、濕熱腳氣、癬疥瘡腫、高血壓等癥[1]。粉防己堿(tetrandrine)和防己諾林堿(fangchinoline)為粉防己主要藥效成分，它們的含量是粉防己相關(guān)藥品質(zhì)量控制的主要檢測(cè)指標(biāo)[2]。近期研究表明，粉防己堿在抗癌方面也有突出表現(xiàn)[3-5]。

粉防己屬野生品種，分布于江西、安徽、浙江、湖北、湖南、福建、廣東、廣西等地。由于連年掠奪性采挖，各產(chǎn)地野生資源已嚴(yán)重萎縮，目前主要由江西、安徽供粉防已藥材，其它產(chǎn)地供應(yīng)量已逐漸消失或產(chǎn)出量甚微[6]。為保護(hù)粉防己野生資源和維持粉防己藥材的正常供應(yīng)，有必要開展粉防己人工馴化和種植的研究。本文通過分析江西不同產(chǎn)地粉防己藥材中粉防己堿和防己諾林堿的含量，來探討產(chǎn)地因素對(duì)于粉防己藥材品質(zhì)的影響，為其良種選育及開發(fā)利用提供參考。

1 儀器、試劑與樣品

1.1 儀器與試劑

儀器：島津LC-2010CHT型高效液相色譜儀，包括自動(dòng)進(jìn)樣器、UV-VIS檢測(cè)器、柱溫箱和色譜工作站。試劑：十二烷基磺酸鈉( 國(guó)產(chǎn)分析純)，乙腈( 國(guó)產(chǎn)色譜純)，甲醇( 國(guó)產(chǎn)色譜純)，對(duì)照品粉防己堿和防己諾林堿購(gòu)自中國(guó)藥品與生物制品檢定所。

1.2 樣品采集與處理

2013年8—10月于江西信豐、南康、會(huì)昌、寧都、遂川、吉安、永豐、宜春、高安、宜黃、臨川、樂平、浮梁、武寧、修水等15個(gè)縣市采挖粉防己根，洗凈，除去粗皮，曬至半干，切段，干燥。粉碎過40目篩備用。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件

色譜柱：Kromasil ODS-1(4.6 mm×200 mm，5 μm)；流動(dòng)相：乙腈-水-甲醇-冰醋酸( 40∶30∶30∶1) ( 每100 mL含0.41 g十二烷基磺酸鈉)；流速1.0 mL·min-1；柱溫25 ℃；紫外檢測(cè)波長(zhǎng)280 nm；采用外標(biāo)峰面積法計(jì)算含量[2，7-8]。

2.2 樣品液制備

圖1 粉防己堿、防己諾林堿對(duì)照品色譜圖

精確稱取過40目篩的粉防己藥材粉末5 g，以250 mL 90%乙醇回流提取2次，2 h·次-1，合并所得提取液，濃縮至浸膏，加流動(dòng)相溶解，定容至25 mL，搖勻。精確吸取5 mL溶液，稀釋定容至50 mL，用微孔濾膜過濾，得待測(cè)樣品溶液。

圖2 粉防己樣品色譜圖

2.3 對(duì)照品溶液制備和線性關(guān)系考察

精確稱取對(duì)照品防己諾林堿5.95 mg、粉防己堿11.85 mg，按饒毅等[2]建立的分析方法，制備對(duì)照品溶液，并進(jìn)行含量測(cè)定，色譜圖見圖1。以峰面積積分值為縱坐標(biāo)，進(jìn)樣量為橫坐標(biāo)，建立線性回歸方程。粉防己堿標(biāo)準(zhǔn)曲線為：Y=650.48X+168.72，r=0.9995(n=5)，在0.474～4.740 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；防己諾林堿標(biāo)準(zhǔn)曲線為：Y=536.77X-227.06，r=0.9991(n=5)，在0.238～2.380 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。

2.4 精密度試驗(yàn)

分別精確吸取粉防己堿、防己諾林堿對(duì)照溶液10 μL，連續(xù)5次測(cè)定粉防己堿、防己諾林堿含量，計(jì)算得RSD分別為1.07%、1.25%，表明試驗(yàn)精密度良好。

2.5 重現(xiàn)性試驗(yàn)

精密稱取同一產(chǎn)地粉碎后混合均勻的粉防己樣品5份，按樣品液制備方法制得供試液，連續(xù)測(cè)定粉防己堿、防己諾林堿的含量，色譜圖見圖2。計(jì)算得RSD分別為1.73%、1.46%，表明方法重視性良好。

2.6 穩(wěn)定性試驗(yàn)

取某一產(chǎn)地粉碎后混合均勻的粉防己樣品，按樣品液制備方法制得供試液，室溫放置，分別于0、2、4、8、12、24、48 h 后測(cè)定粉防己堿、防己諾林堿的含量，結(jié)果見表1。由表1可知，RSD分別為1.684%、2.027%，表明供試品溶液在48 h內(nèi)穩(wěn)定。

表1 樣品液放置不同時(shí)間后有效成分含量 %

2.7 樣品含量測(cè)定

精確稱取不同產(chǎn)地粉防己樣品5 g，按照樣品液制備方法進(jìn)行提取和處理，測(cè)定粉防己堿、防己諾林堿的含量，3次重復(fù)，以平均值作為結(jié)果。重復(fù)測(cè)定結(jié)果的相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差應(yīng)小于5%，否則須重新測(cè)定。測(cè)定結(jié)果見表2。

由表2可知，15個(gè)產(chǎn)地藥材粉防己堿含量的變化范圍為2.28%～6.94%，防己諾林堿含量變化范圍為1.34%～3.15%。以永豐、樂平、宜黃、高安4個(gè)產(chǎn)地藥材中2種有效成分的含量較高。

3 結(jié)論與討論

藥用植物產(chǎn)品的功效是由所含有效成分作用的結(jié)果。有效成分含量、各種成分的比例等，是衡量藥用植物產(chǎn)品質(zhì)量的主要指標(biāo)。本文采用高效液相色譜法測(cè)定江西省由南到北15個(gè)縣市粉防己藥材中粉防己堿、防己諾林堿2種主要藥效成分的含量。試驗(yàn)結(jié)果表明，粉防己堿標(biāo)準(zhǔn)曲線為：Y=650.48X+168.72，r=0.9995(n=5)，在0.474～4.740 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；防己諾林堿標(biāo)準(zhǔn)曲線為：Y=536.77X-227.06，r=0.9991(n=5)，在0.238～2.380 μg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好。且該測(cè)定方法精密度、重現(xiàn)性良好，供試樣品在48 h內(nèi)穩(wěn)定，適用于粉防己藥材中粉防己堿、防己諾林堿的測(cè)定。15個(gè)產(chǎn)地藥材粉防己堿含量的變化范圍為2.28%～6.94%，防己諾林堿含量變化范圍為1.34%～3.15%。以永豐、樂平、宜黃、高安4個(gè)產(chǎn)地藥材中2種有效成分的含量較高。

表2 不同產(chǎn)地樣品中粉防己堿、防己諾林堿的含量

黃麗萍等[8]對(duì)湖北、安徽等8個(gè)產(chǎn)地的粉防己藥材分析結(jié)果顯示：粉防己堿含量的變化范圍為4.11%～7.01%，防己諾林堿含量變化范圍為1.87%～3.45%。也表明，不同產(chǎn)地粉防己藥材中藥效成分的含量存在較大差異。藥材的藥效成分種類、比例、含量受藥用植物遺傳物質(zhì)、生長(zhǎng)年限和環(huán)境條件的影響，即在特定的氣候、土質(zhì)、生態(tài)等外部環(huán)境條件影響下的內(nèi)部代謝(含次生代謝)產(chǎn)物。例如，有研究者發(fā)現(xiàn)，兩面針有效成分含量與土壤有效磷含量成正相關(guān)[9]。不同產(chǎn)地粉防己藥材中藥效成分含量差異是環(huán)境因素還是遺傳因素造成，或者是兩者偶合的結(jié)果，有待于后續(xù)的深入研究加以揭示。

[1]中國(guó)藥典委員會(huì).中華人民共和國(guó)藥典：一部[M].2005版.北京：化學(xué)工業(yè)出版社，2005：101.

[2]饒毅，黎莉，劉隆洪，等.HPLC法同時(shí)測(cè)定防己藥材中防己諾林堿和粉防己堿[J].中草藥，2006，37(4)：612-613.

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[7]黃澤春，王益群.高效液相色譜法測(cè)定防己藥材中粉防己堿與防己諾林堿的含量[J].中南藥學(xué)，2008(5)：541-543.

[8]黃麗萍，左堅(jiān)，張穎.不同產(chǎn)地粉防己藥材中主要生物堿含量對(duì)比研究[J].甘肅中醫(yī)學(xué)院學(xué)報(bào)，2010，27(3)：65-67.

[9]孫世榮，蔣水元，李虹，等.廣西兩面針種群分布特征[J].福建林業(yè)科技，2010，37(2)：78-81.

Determination of Tetrandrine and Fangchindine inStephaniatetrandrafrom DifferentAreas in Jiangxi Province

LAI Xiao-lian1，GUO Sheng-mao1，PENG Ren2，CHEN Lan-lan1，LIAO Xing-guo1

(1.CollegeofLandscapeArchitectureandArt，JiangxiAgriculturalUniversity，Nanchang330045，Jiangxi，China；2.CollegeofLifeScience，JiangxiNormalUniversity，Nanchang330027，Jiangxi，China)

The content of tetrandrine(TET) and fangchindine(FAN) inStephaniatetrandrafrom different areas in Jiangxi Province was determined by HPLC.The result indicated that the method is accurate，reproducible，and samples in the 48 h stable，suitable for determination of TET and FAN inStephaniatetrandra.The contents of TET and FAN inStephaniatetradrafrom different places were markedly different，the content of TET were 2.28%～6.94%，the content of FAN 1.34%～3.15%，the contents of TET and FAN inStephaniatetrandrafrom Yongfeng，Leping，Yihuang and Gaoan were higher than others.

Stephaniatetrandra；tetrandrine；fangchinoline；HPLC

2014-03-09；

2014-04-20

江西省科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(20111BBG70030-5)；中央財(cái)政林業(yè)科技推廣示范資金項(xiàng)目(JXTG[2013]11)

賴曉蓮(1978—)，女，江西寧都人，江西農(nóng)業(yè)大學(xué)園林與藝術(shù)學(xué)院實(shí)驗(yàn)師，從事森林培育研究。E-mail：laixiaolian@126.com。

郭圣茂(1970—)，男，江西寧都人，江西農(nóng)業(yè)大學(xué)園林與藝術(shù)學(xué)院副教授，從事森林培育研究。E-mail：shmguo@163.com。

10.13428/j.cnki.fjlk.2015.01.018

S759.82；R284.1

A

1002-7351(2015)01-0084-03