復(fù)方黃芩苷滴鼻凝膠的制備與質(zhì)量控制

汪風芹，高新富，胡麗敏，孫迎東，劉明華，王玉

(濱州醫(yī)學院附屬醫(yī)院藥學部，濱州 256603)

目前，治療變應(yīng)性鼻炎大多采用口服抗組胺藥和抗菌藥物，局部外用糖皮質(zhì)激素。但其不良反應(yīng)明顯，長時間應(yīng)用易造成鼻黏膜萎縮變性。為此，筆者選擇具有顯著抗炎、抗變態(tài)反應(yīng)作用[1]、并能降低毛細血管通透性的黃芩苷、冷刺激藥薄荷腦、低劑量鹽酸麻黃堿，以卡波姆-940為凝膠基質(zhì)，硼砂為pH和黏度調(diào)節(jié)劑，配制滴鼻凝膠，現(xiàn)報道如下。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 島津 LC-20AT高效液相色譜儀，Prominence SPD-20A/UV-VIS檢測器;Thermo ODS-2 Hypersil色譜柱(250 mm ×4.6 mm);pHS-3C 酸度計(上海精密科學儀器有限公司雷磁儀器廠);NDJ-79旋轉(zhuǎn)式黏度計(上海平軒科學儀器廠);CP225D電子天平(德國賽多利斯，d=0.000 01)。

1.2 試藥 黃芩苷(諸城市浩天藥業(yè)有限公司，批號:20120526，含量:90.6%)，鹽酸麻黃堿(赤峰艾克制藥科技有限公司，批號:20110324，含量:99.4%)，薄荷腦(安徽豐樂香料，批號:20120922，含量:99.3%)，卡波姆-940(南京威爾化工有限公司，批號:20130102)，硼砂(湖南爾康制藥有限公司，批號:20121009，含量:101.0%)，乙醇(河北建寧藥業(yè)有限公司，批號:20121009，含量:95.3%)，甘油(湖南爾康制藥有限公司，批號:20121009，含量:99.3%)，5%羥苯乙酯溶液(濱州醫(yī)學院附屬醫(yī)院制劑室，批號:20120128，含量:5.12%)，黃芩苷對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號:110715-201117，含量:91.7%)，鹽酸麻黃堿對照品(中國食品藥品檢定研究院，批號:171241-201007，含量:99.9%)。乙腈為色譜純，其余為分析純，含量測定用水為重蒸水。

2 處方與制備

2.1 處方 黃芩苷11.04 g(實際含黃芩苷10 g)，鹽酸麻黃堿5 g，薄荷腦1 g，卡波姆-940 0.3 g，硼砂 7 g，乙醇10 mL，甘油15 mL，5%羥苯乙酯溶液10 mL，純化水加至1 000 mL。

2.2 制備工藝 將處方量卡波姆-940粉末緩慢均勻撒于300 mL純化水表面，靜置過夜，使其自然溶脹，攪拌均勻;取處方量黃芩苷混懸于純化水200 mL中，加到上液中攪勻，得黃色混懸液;稱取硼砂加入適量純化水加熱溶解，放涼分次加到上述黃色混懸液，邊加邊攪至黃色澄明黏稠膠液為止;再依次加入處方量甘油，鹽酸麻黃堿溶液(稱取鹽酸麻黃堿5 g溶于適量純化水，充分攪勻，分次加入，邊加邊攪拌)，薄荷腦乙醇溶液(稱取薄荷腦1 g，溶于95%乙醇，充分攪勻分次加入，邊加邊攪拌)，5%羥苯乙酯溶液(稱取羥苯乙酯5 g，溶于適量95%乙醇，加入甘油50 mL攪勻，再加入95%乙醇至100 mL，充分攪勻，精密量取10 mL，分次加入，邊加邊攪拌)，最后加純化水至1 000 mL，攪勻即得(批號:20130612，20130723，20130906)。

3 質(zhì)量控制

3.1 性狀 本品為淡黃色透明液狀凝膠。

3.2 鑒別

3.2.1 黃芩苷 取本品1 g，加三氯化鐵試液2滴，即顯污綠色。

3.2.2 鹽酸麻黃堿 取本品1 g，加硫酸銅試液2滴與氫氧化鈉溶液(1→5)1 mL，即顯藍紫色;加乙醚1 mL，振搖后放置，乙醚層即顯紫紅色，水層變成藍色。

3.3 pH測定 按《中華人民共和國藥典》2010年版二部pH測定項下方法，取樣品5 g，加純化水25 mL稀釋后測定，測得pH為5.5～6.5，符合滴鼻劑要求。

3.4 微生物限度檢查 按《中華人民共和國藥典》2010年版二部規(guī)定檢查，符合滴鼻劑項下有關(guān)規(guī)定。

3.5 黏度測定 取本品照《中華人民共和國藥典》2010年版二部附錄VI G黏度測定方法，在25℃環(huán)境下，采用NDJ-79型旋轉(zhuǎn)式黏度計測得樣品的動力黏度，5次平均值為22 Pa·s。

3.6 含量測定

3.6.1 色譜條件 Thermo ODS-2 Hypersil(250 mm×4.6 mm，5 μm)色譜柱，流動相 A 為乙腈，流動相 B 為1.0%磷酸溶液(含0.4%三乙胺)。梯度洗脫程序A:0～3 min，12%;～12min，12%→27%;～23min，27%;～24 min，27%→12%;(A+B=100%)。黃芩苷檢測波長為280 nm，鹽酸麻黃堿檢測波長為210 nm[2]，采用Prominence SPD-20A/UV-VIS檢測器同時測定;流速1.0 mL·min－1，柱溫30 ℃。

3.6.2 系統(tǒng)適用性實驗 分別配制含黃芩苷100 μg·mL－1、鹽酸麻黃堿 25 μg·mL－1的對照品溶液，分別取以上對照品溶液和“3.6.9”項供試品溶液及由不含黃芩苷和鹽酸麻黃堿的樣品制備的陰性對照液注入液相色譜儀，進樣10 μL，記錄色譜圖，鹽酸麻黃堿和黃芩苷能很好分離，鹽酸麻黃堿理論板數(shù)為11 337，黃芩苷理論板數(shù)為121 818，結(jié)果見圖1。

3.6.3 線性關(guān)系考察 精密稱取黃芩苷對照品21.22 mg、鹽酸麻黃堿對照品 5.07 mg，置 200 mL 量瓶，加水使溶解并稀釋至刻度，取上述對照品溶液注入液相色譜儀，進樣量分別為 4，6，8，10，12，14 μL，以黃芩苷和鹽酸麻黃堿進樣量(μg)為橫坐標(X)，以峰面積為縱坐標(Y)，得回歸方程分別為黃芩苷:Y=3 317 320.72X －512.39，r=1.000 0;鹽酸麻黃堿:Y=2 159 407.52X －4 107.37，r=1.000 0。結(jié)果表明，黃芩苷在進樣量0.424 4～1.485 4 μg范圍內(nèi)線性良好，鹽酸麻黃堿在進樣量0.202 8～0.709 8 μg范圍內(nèi)線性良好。

3.6.4 精密度實驗 取“3.6.3”項線性考察項下對照品溶液各連續(xù)進樣5次，進樣量10 μL，記錄黃芩苷和鹽酸麻黃堿的峰面積，RSD分別為 0.07%和0.09%。

圖1 4種溶液的高效液相色譜圖

3.6.5 含量測定方法重復(fù)性實驗 取同批樣品5份，按樣品“3.6.9”項方法測定含量，結(jié)果黃芩苷和鹽酸麻黃堿含量RSD分別為1.31%，1.24%，表明此方法重復(fù)性良好。

3.6.6 檢測限與定量限 取“3.6.3”項線性考察項下對照品溶液，逐級減少進樣量，以信噪比為3∶1時，計算檢測限;以信噪比為10∶1時，計算定量限。結(jié)果表明黃芩苷檢測限 0.031 83 μg，定量限 0.095 49 μg，鹽酸麻黃堿檢測限 0.025 34 μg，定量限 0.050 69 μg。

3.6.7 穩(wěn)定性實驗 取“3.6.9”項樣品測定項下供試品溶液，分別于0，3，6，12，24 h 以相同體積進樣，結(jié)果峰面積基本不變，峰面積RSD=0.97%，說明樣品溶液在24 h內(nèi)穩(wěn)定。

3.6.8 加樣回收實驗 精密量取批號為20130723的樣品0.5 mL(相當于黃芩苷 5 mg、鹽酸麻黃堿2.5 mg)，置100 mL量瓶，分別精密加入黃芩苷對照品約 3，5，7 mg，鹽酸麻黃堿對照品 1.5，2.5，3.5 mg，加水稀釋至刻度，得濃度約為供試品溶液濃度80%，100%，120%的溶液，每個濃度3 份，按“3.6.9”項樣品測定項下方法測定，黃芩苷平均加樣回收率為100.4%，RSD=1.56%。鹽酸麻黃堿平均加樣回收率為101.9%，RSD=1.64%。見表 1，2。

3.6.9 樣品的測定 分別精密量取3批樣品各1 mL(相當于黃芩苷10 mg、鹽酸麻黃堿5 mg)，分別置100 mL量瓶，加水稀釋至刻度，經(jīng) 0.45 μm 微孔濾膜過濾后作為供試品溶液。取供試品溶液10 μL注入液相色譜儀，按外標法計算黃芩苷和鹽酸麻黃堿的含量，結(jié)果見表3。

表1 復(fù)方黃芩苷滴鼻凝膠中黃芩苷回收率實驗結(jié)果

表2 復(fù)方黃芩苷滴鼻凝膠中鹽酸麻黃堿回收率實驗結(jié)果

3.7 樣品穩(wěn)定性考察 取樣品10 g，裝入帶刻度的離心管中，以 2 500 r·min－1(r=12 cm)離心 30 min，結(jié)果凝膠無分層現(xiàn)象;另取樣品10 g，均勻裝入包裝盒內(nèi)，加蓋，分別置于55℃干恒溫箱6 h和－15℃冰箱內(nèi)24 h，恢復(fù)室溫后凝膠無分層現(xiàn)象;再將樣品裝入包裝盒，加蓋，于室溫放置3，6，12個月，抽樣檢查，分別考察其性狀、鑒別、含量、微生物限度等各項指標，結(jié)果各指標均未見明顯變化。

表3 復(fù)方黃芩苷滴鼻凝膠中黃芩苷和鹽酸麻黃堿的含量mg·mL－1

4 討論

打噴嚏、流清涕和鼻癢是變應(yīng)性鼻炎的主要臨床癥狀，也是Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)在鼻局部的特征性癥狀反應(yīng)，故減少和消除局部癥狀是改善Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)在鼻腔局部的特征性癥狀的客觀依據(jù)，也是變態(tài)反應(yīng)性鼻炎的診斷和療效評定標準的主要內(nèi)容[3-5]。顧紅纓等[6]研究了黃芩苷對Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)豚鼠超微結(jié)構(gòu)的影響，電鏡結(jié)果顯示，黃芩苷給藥組與未給藥致敏組豚鼠超微結(jié)構(gòu)在發(fā)生變態(tài)反應(yīng)后有較大的差異;黃芩苷可顯著抑制Ⅰ型變態(tài)反應(yīng)豚鼠超微結(jié)構(gòu)改變。本滴鼻凝膠中的薄荷腦可選擇性地作用于黏膜的冷感受器產(chǎn)生冷感，由于感受器的反射作用，使局部血管收縮，腫脹減輕，從而使鼻塞鼻癢的不適感得到緩解。

由于黃芩苷在水中的溶解度為160 mg·L－1，在水中極微溶解[7];可溶于碳酸鈉、氫氧化鈉等堿性溶液中，所以筆者選擇0.7%硼砂作為黃芩苷的助溶劑和pH調(diào)節(jié)劑。

黃芩苷的分子結(jié)構(gòu)具有-COOH基團，其水溶液的穩(wěn)定性受pH影響較大，在堿性溶液中不穩(wěn)定，易導(dǎo)致溶液變?yōu)榘底厣?。作者?jīng)多次實驗證明，復(fù)方黃芩苷滴鼻凝膠的pH是影響黃芩苷及制劑穩(wěn)定性的重要因素。所以將本制劑的pH定為5.5～6.5，此范圍制劑的顏色、黏度及含量均佳。

從目前文獻報道的滴鼻凝膠劑分析，研究者在設(shè)計處方時沒有考慮到藥物對鼻黏膜正常功能的影響。大多使用的卡波姆濃度較高[8-10]，一般為0.5% ～0.8%，與皮膚用藥濃度相當，因此黏稠度高，不適于滴鼻用。在設(shè)計制劑處方時沒有考慮滴鼻劑的滲透壓，大多數(shù)滴鼻凝膠的滲透壓為高滲，有的高于等滲2倍，而且沒有制定制劑的pH?！吨袊t(yī)院制劑規(guī)范(西藥制劑第二版)》明確規(guī)定[11];鼻腔分泌液的正常pH為5.5～6.5，使用與鼻腔分泌液pH不同的藥液，可阻礙纖毛的運動，滴鼻劑的正常pH應(yīng)為4.5～6.5。鼻腔應(yīng)用的水溶液應(yīng)為稀溶液，濃溶液容易刺激鼻腔黏膜，等滲溶液或者略高滲的溶液刺激性最輕。本制劑的滲透壓約為 1.0，略高于等滲，pH 為 5.5 ～6.5，完全符合上述規(guī)定。本制劑采用0.3%卡波-940，其黏度為22 Pa·s，為適宜黏度的流變型液體。比滴鼻液體制劑在鼻腔的滯留時間長，且不易流入鼻咽部，可減少咽喉部的不適，還具有緩慢釋藥作用，從而提高藥物的生物利用度。

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