蛇床子素固體脂質(zhì)納米粒制劑的制備

陳嬌婷，王妙飛，黃浩，羅國安，2

(1.贛南醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，贛州 341000;2.清華大學(xué)分析中心，北京 100084)

固體脂質(zhì)納米粒(solid 1ipid nanoparticles，SLN)是新型亞微給藥系統(tǒng)，是一種以室溫下為固態(tài)的天然或合成的脂質(zhì)或類脂如卵磷脂、三酰甘油等為基質(zhì)，將藥物包裹于類脂核中制成粒徑50～1 000 nm固體脂質(zhì)粒子給藥體系。它解決了一般脂質(zhì)體在體內(nèi)外不穩(wěn)定的缺點，又避免了作為藥物載體物理不穩(wěn)定性，以及聚合物粒子在制備過程潛在的毒性物質(zhì)和產(chǎn)生的細(xì)胞毒性。同時，還具有對靶器官有特異趨向性、成本低和利于大規(guī)模生產(chǎn)的優(yōu)點。因此，利用蛇床子素開發(fā)固體脂質(zhì)納米粒新型給藥系統(tǒng)有較高的社會和經(jīng)濟價值，具有較好的發(fā)展前景。

筆者在本實驗中以生理相容的單硬脂酸甘油酯為油相，以大豆卵磷脂、泊洛沙姆188為表面活性劑，用熔融-勻化法制成穩(wěn)定的固體脂質(zhì)納米粒分散體，研究了蛇床子素固體脂質(zhì)納米粒(Ost-SLN)的制備工藝和處方優(yōu)化。

1 儀器與試藥

1.1 儀器 Sartorius ALC4100電子天平(廣州市上博電子科技有限公司，感量:0.1 mg);85-2型數(shù)顯恒溫磁力攪拌器(鞏義市科瑞儀器有限公司);NIROSOAVI高壓乳勻機(美國儀器集團);高效液相色譜儀(日本島津);高分辨透射電鏡(81W/AIS2100，西化儀器有限公司)。

1.2 試藥 蛇床子素(南京替斯艾么中藥研究所，批號:110822-200406，含量:≥98%);硬脂酸(上海凌峰化學(xué)試劑有限公司，批號:054K5303，化學(xué)純，含量:98%);大豆卵磷脂(上海愛康精細(xì)化工有限公司，批號:2075523，含量≥92%);泊洛沙姆(南京威爾化工有限公司，批號:WPWA544C，含量≥99%);聚山梨酯80(上海三浦化工有限公司，批號:090426，化學(xué)純，含量≥95%);無水乙醇(上?；瘜W(xué)試劑有限公司，批號:20110528，分析純，含量≥95%);其余試劑均為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 蛇床子素固體脂質(zhì)納米粒的制備 采用熔融-勻化法制備，稱取處方量單硬脂酸甘油酯，在(75±2)℃加熱熔融后，蛇床子素用適量無水乙醇溶解，兩者均勻混合作為油相。取處方量大豆卵磷脂、泊洛沙姆188、水在超聲中溶解，并加熱至(75±2)℃成為水相。在攪拌下將水相緩慢滴加到油相中，制成O/W型初乳。用高壓乳均機在100 MPa壓強下，于(75±2)℃下反復(fù)乳勻5次后，迅速冷卻形成蛇床子素固體脂質(zhì)納米?；鞈乙骸?/p>

2.2 蛇床子素的HPLC法測定

2.2.1 色譜條件 色譜柱:C18柱 Diamonsil TM C18(200 mm × 4.6 mm，5 μm);檢測波長:322 nm;流動相:甲醇-水(75∶25);柱溫:室溫;流速1 mL·min－1;理論板數(shù)按蛇床子素計算應(yīng)不低于2 000，主峰與相鄰雜質(zhì)峰的分離度應(yīng)符合要求。

2.2.2 對照品溶液的制備 取蛇床子素對照品10.0 mg精密稱定，置于100 mL棕色量瓶中，用甲醇稀釋至刻度，配成 100 μg·mL－1對照品溶液。

2.2.3 供試品溶液的制備 精密量取蛇床子素固體脂質(zhì)納米?；鞈乙? mL，置于10 mL量瓶中，用甲醇定容，超聲，靜置，經(jīng)孔徑0.45 μm 微孔濾膜濾過，即得供試品溶液。

2.2.4 陰性對照溶液的制備 按照處方比例制備空白SLN，按照供試品溶液制備方法，制成陰性對照溶液。進樣后與供試品溶液的色譜圖作比較。蛇床子素峰面積的保留時間約7 min，陰性對照溶液在相應(yīng)位置無吸收峰出現(xiàn)，即載體材料和輔料不影響藥物的測定。

2.2.5 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 精密吸取蛇床子素對照品溶液 1.0，2.0，3.0，5.0，7.0，9.0 mL 于 100 mL 量瓶，用甲醇定容，配制成不同濃度的系列標(biāo)準(zhǔn)液，取20 μL進樣，記錄峰面積。以峰面積(Y)對濃度(X)作回歸，得到線性方程為:Y=68 988X －11 763，r=0.999 7。線性范圍:1.0 ～9.0 μg·mL－1，蛇床子素量與峰面積呈良好的線性關(guān)系。

2.2.6 回收率與精密度實驗 回收率實驗:按照繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線的方制備低、中、高濃度蛇床子素甲醇溶液，HPLC法進樣20 μL測定3次，由標(biāo)準(zhǔn)曲線回歸方程計算其測定值，測定值與真實值比值為回收率。測得蛇床子素平均回收率100.12%。精密度實驗:按照繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線方法制備低、中、高濃度蛇床子素甲醇溶液，1 d內(nèi)進樣3次及連續(xù)3 d重復(fù)測定，得日內(nèi) RSD為1.67%，日間RSD為1.38%。

2.2.7 蛇床子素固體脂質(zhì)納米粒包封率的測定 采用超速離心法，精密量取蛇床子素固體脂質(zhì)納米?；鞈乙? mL，置離心管，于 10 000 r·min－1(r=10 cm)離心30 min。取上清液用甲醇定容于10 mL量瓶，經(jīng)孔徑0.45 μm 微孔濾膜濾過，備用。采用“2.1”項色譜條件測定游離藥物濃度。

精密量取蛇床子素固體脂質(zhì)納米?；鞈乙? mL，置10 mL量瓶，用甲醇定容，超聲處理，靜置，經(jīng)孔徑0.45 μm微孔濾膜濾過，備用。采用“2.1”項色譜條件測定蛇床子素固體脂質(zhì)納米粒中總藥量，并根據(jù)公式計算包封率。包封率(%)=[(總藥量 －游離藥物量)/總藥量]×100%。測得其包封率為59.78%。

2.3 正交試驗及結(jié)果分析 在單因素實驗的基礎(chǔ)上，采用L9(34)正交實驗考察A:藥物與單硬脂酸甘油酯質(zhì)量比(藥脂比)、B:大豆卵磷脂與單硬脂酸甘油酯的質(zhì)量比(類脂比)、C:泊洛沙姆質(zhì)量分?jǐn)?shù)的綜合作用對Ost-SLN包封率的影響。因素與水平見表1，正交實驗結(jié)果見表2，方差分析結(jié)果見表3。

表1 因素與水平Tab.1 Factors and levels

表2 正交實驗結(jié)果表Tab.2 Result of orthogonal test

正交實驗結(jié)果:由表2，3的極差分析和方差分析結(jié)果可知，在3個因素中，對Ost-SLN包封率的影響重要性依次為B＞A＞C，選擇A3B2C1組合，即藥脂比為1∶6;類脂比為1∶20;泊洛沙姆質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的工藝制備Ost-SLN。

表3 方差分析Tab.3 Analysis of variance

2.4 Ost-SLN的形態(tài)學(xué)觀察及粒徑分布 形態(tài)學(xué)觀察:按照最佳方案制備的Ost-SLN，在H-700型透射電子顯微鏡(日本日立公司)照片中顯示:Ost-SLN大部分都呈規(guī)則、完整的圓形或卵圓形，粒子分散狀態(tài)良好，無粘連(圖1)。

圖1 蛇床子素固體脂質(zhì)納米粒形態(tài)(×50 000)Fig.1 Morphology of Ost-loaded SLN(×50 000)

粒徑分布:將Ost-SLN樣品用水稀釋至適當(dāng)濃度，用Zeta Sizer 300 HS激光散射粒度分析儀(英國馬爾文公司)測定其粒徑，粒徑分布范圍為100～200 nm，分布比較均勻。粒徑分布圖見圖2。

3 討論

筆者在本實驗中采用熔融-勻化法制備Ost-SLN樣品，將載藥類脂熔融物分散于熱的乳化劑水溶液中形成初乳，初乳經(jīng)高壓乳均機勻質(zhì)形成納米乳，室溫下冷卻固化形成SLN。該法得到的SLN粒徑小且分布窄，但高溫會增加藥物和載體的降解速度。

圖2 蛇床子素固體脂質(zhì)納米粒徑分布圖Fig.2 Particle size distribution of Ost-loaded SLN

研究證明，乳化劑的種類、濃度均可以顯著影響SLN的質(zhì)量[3]。經(jīng)典乳化劑有各種磷脂類如卵磷脂、poloxamer系列以及膽酸鹽類(如膽酸鈉、甘膽酸鈉、?；悄懰徕c、去氧牛磺膽酸鈉);短鏈醇類如丁醇、丁酸等。HEIATA等[4]以不同比例的三月桂酸甘油酯和磷脂為載體材料，制備齊多夫定的親脂性前體藥物齊多夫定棕櫚酸酯的SLN。實驗發(fā)現(xiàn)磷脂的種類對所制備的SLN的性質(zhì)影響很大，采用二棕櫚酰磷脂酰膽堿(dipalmitoylphosphatidylcholine，DPPC)時，可制備中性的SLN，而采用不同摩爾比的DPPC:二肉豆蔻酰磷脂酰甘油(dimyristoylphosphatidylglycero1，DMPG)，則制得帶負(fù)電荷的SLN。前者粒徑為(203±31)nm，后者為(294±32)nm。

本研究采用藥脂比為1∶6，類脂比為1∶20;泊洛沙姆質(zhì)量分?jǐn)?shù)為0.5%的工藝制備Ost-SLN，制成穩(wěn)定的乳化膜，以穩(wěn)定固體脂質(zhì)納米粒的兩相界面，且安全性高。

[1]林愛花，李勇.蛇床子素藥理作用及相關(guān)研究進展[J].醫(yī)學(xué)信息，2010，12:3868.

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[4]HEIATA H，RASHAD T，RICHARD R S，et al.Solid lipid nanoparticles as drug carriers Incorporation and retention of the lipophilic produrg 3 ＇-azido-3 ＇-dcoxythymidinc palmitatc[J].Int J Pharm，1997，146(1):123 －131.