血液核酸篩查中的質(zhì)量控制探討

朱守兵，劉祎，章雪江，傅立強(qiáng)（紹興市中心血站，浙江　紹興312000）

血液核酸篩查中的質(zhì)量控制探討

朱守兵，劉祎，章雪江，傅立強(qiáng)
（紹興市中心血站，浙江紹興312000）

目的探索建立以內(nèi)對(duì)照循環(huán)數(shù)（CT）為監(jiān)控對(duì)象的血液核酸篩查質(zhì)量控制方法，為血液核酸篩查的有效開展提供質(zhì)量保障。方法對(duì)8993份標(biāo)本使用Cobas s201核酸篩查系統(tǒng)進(jìn)行6混樣檢測(cè)，以±3s作為內(nèi)對(duì)照CT質(zhì)控上下限，CT＞+3s為失控，即檢測(cè)結(jié)果無(wú)效，CT＜-3s為告警，檢測(cè)結(jié)果有效，但必須進(jìn)行關(guān)注。結(jié)果3個(gè)混樣池 （pool）內(nèi)對(duì)照CT＜-3s，5個(gè)pool內(nèi)對(duì)照CT＞+3s；檢出陽(yáng)性pool 25個(gè)，有效拆分16個(gè)，陽(yáng)性pool有效拆分率64.0%，陽(yáng)性標(biāo)本均為HBV DNA陽(yáng)性，核酸篩查總陽(yáng)性率1.78‰。結(jié)論建立了以內(nèi)對(duì)照CT為監(jiān)測(cè)目標(biāo)的質(zhì)量控制方法，該質(zhì)量控制方法能夠保障核酸篩查結(jié)果穩(wěn)定有效。

核酸檢測(cè)；質(zhì)量控制；內(nèi)對(duì)照循環(huán)數(shù)；質(zhì)控圖

目前血液核酸檢測(cè)在全國(guó)血液系統(tǒng)逐步推廣，核酸檢測(cè)靈敏度高，可以有效縮短病毒檢測(cè)窗口期，并能篩查出隱匿性乙肝，在保障血液安全方面與現(xiàn)有的酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）具有很重要的互補(bǔ)作用［1-3］，然而對(duì)于核酸檢測(cè)的質(zhì)量控制還處于探索階段。作者在核酸檢測(cè)中進(jìn)行了一些探索，在借鑒ELISA質(zhì)量控制方法的基礎(chǔ)上結(jié)合核酸檢測(cè)自身的特點(diǎn)建立了以內(nèi)對(duì)照為監(jiān)測(cè)目標(biāo)的質(zhì)量控制體系，最終檢測(cè)結(jié)果說(shuō)明該質(zhì)量控制體系能夠保障核酸檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定有效。

1　材料與方法

1.1標(biāo)本來(lái)源與檢測(cè)2014年4～10月本血站行ELISA檢測(cè) （項(xiàng)目包括HBsAg、HCV抗體、HIV抗體、梅毒螺旋體抗體）且ALT陰性標(biāo)本8993份，每份標(biāo)本5mL，采用非可替EDTA-K2分離膠抗凝管，標(biāo)本采集后4小時(shí)內(nèi)離心分離血清，標(biāo)本檢測(cè)采用6混樣同時(shí)檢測(cè)HBV DNA、HCV RNA和HIV RNA，檢測(cè)結(jié)果陰性的混樣池（pool）內(nèi)所有標(biāo)本均判為陰性，對(duì)陽(yáng)性的pool進(jìn)行單檢拆分，如果陽(yáng)性pool內(nèi)所有標(biāo)本單檢拆分結(jié)果均為陰性則pool內(nèi)所有標(biāo)本均判為陰性，此pool為無(wú)效拆分pool，單檢拆分時(shí)有標(biāo)本為陽(yáng)性結(jié)果的pool為有效拆分pool，所有檢測(cè)在7天內(nèi)完成。

1.2試劑與儀器Cobas?TaqScreen MPX核酸檢測(cè)試劑盒（瑞士羅氏公司，批號(hào)：S00984，S00979）、50IU/mL HBV DNA質(zhì)控品、50IU/mL HCV RNA質(zhì)控品、200IU/mL HIV RNA質(zhì)控品 （北京康徹斯坦公司，批號(hào)：201404001）、Cobas s201核酸檢測(cè)系統(tǒng)（瑞士羅氏公司）。

1.3質(zhì)量控制方法每批檢測(cè)陰陽(yáng)性對(duì)照及內(nèi)對(duì)照必須符合試劑盒說(shuō)明書要求，能檢出HBV DNA質(zhì)控品、HCV RNA質(zhì)控品、HIV RNA質(zhì)控品，以最初兩天所有pool內(nèi)對(duì)照CT求平均值（）和標(biāo)準(zhǔn)差（s），以±3s為質(zhì)控上下限?？刂坪竺?個(gè)月所有實(shí)驗(yàn)，內(nèi)對(duì)照CT＞+3s為失控，此pool檢測(cè)結(jié)果無(wú)效，CT＜-3s為告警，此pool檢測(cè)結(jié)果有效，但必須進(jìn)行關(guān)注，1個(gè)月結(jié)束。以本月所有內(nèi)對(duì)照CT求和s，用與前面相同的方法控制以后所有實(shí)驗(yàn)。

2　結(jié)果

2.1核酸篩查結(jié)果共檢測(cè)2592個(gè)pool，8993份標(biāo)本，其中陽(yáng)性pool 25個(gè)，pool陽(yáng)性率0.96%，共有效拆分鑒定16個(gè)pool，9個(gè)pool未拆分成功，有效拆分率64.0%，經(jīng)拆分共16份標(biāo)本陽(yáng)性，鑒定結(jié)果均為HBV DNA陽(yáng)性，核酸檢測(cè)總陽(yáng)性率1.78‰。

表1　6～10月內(nèi)對(duì)照CT變化情況

圖1　5月質(zhì)控圖

圖2　6～10月質(zhì)控圖

3　討論

核酸檢測(cè)從在血液系統(tǒng)試點(diǎn)到不斷推進(jìn)已有2年多時(shí)間，至今全國(guó)還沒(méi)有形成成熟統(tǒng)一的質(zhì)量控制方法，深圳血液中心莊乃保等［4］曾經(jīng)通過(guò)檢測(cè)HBV DNA質(zhì)控品使用即刻法對(duì)核酸檢測(cè)進(jìn)行質(zhì)量控制，但HCV RNA、HIV RNA并沒(méi)有HBV DNA質(zhì)控品穩(wěn)定性高，因此對(duì)于HCV RNA、HIV RNA質(zhì)控品是否可以借鑒與HBV DNA質(zhì)控品相同的方法還需更多的實(shí)驗(yàn)。山東血液中心的張妍等［5］通過(guò)觀察核酸檢測(cè)過(guò)程中多項(xiàng)指標(biāo)的變化情況對(duì)質(zhì)量進(jìn)行持續(xù)監(jiān)測(cè)。在總結(jié)各種質(zhì)量控制方法的優(yōu)缺點(diǎn)和分析核酸檢測(cè)自身特點(diǎn)的基礎(chǔ)上，作者對(duì)核酸檢測(cè)的質(zhì)量控制進(jìn)行了一些探索：由于核酸檢測(cè)的過(guò)程中內(nèi)對(duì)照和標(biāo)本在相同的條件下進(jìn)行提取和擴(kuò)增，因此內(nèi)對(duì)照提取和擴(kuò)增情況可以很好地反映目的基因的提取和擴(kuò)增情況，由于提取和擴(kuò)增條件受環(huán)境影響較小，因此內(nèi)對(duì)照擴(kuò)增相對(duì)穩(wěn)定，所有pool內(nèi)對(duì)照CT的CV僅為1.21%，根據(jù)這些特點(diǎn)作者建立了以內(nèi)對(duì)照CT為監(jiān)控目標(biāo)的質(zhì)控法。本質(zhì)量控制體系監(jiān)控結(jié)果顯示：6月以來(lái)共3個(gè)pool內(nèi)對(duì)照CT＜-3s，與ELISA方法的質(zhì)控判斷標(biāo)準(zhǔn)不同，此pool結(jié)果有效，但必須作為告警點(diǎn)，同時(shí)注意觀察是偶發(fā)還是系統(tǒng)誤差造成，共5個(gè)pool內(nèi)對(duì)照CT＞+3s，此pool結(jié)果無(wú)效，提取或者擴(kuò)增抑制物對(duì)標(biāo)本的污染、隨機(jī)誤差、儀器運(yùn)行中的任何異常等均可造成這一結(jié)果。

本文共檢出陽(yáng)性pool 25個(gè)，有效拆分鑒定16 個(gè)pool，有效拆分率64.0%，高于山東血液中心的結(jié)果［5］，16份陽(yáng)性標(biāo)本經(jīng)鑒定均為HBV DNA陽(yáng)性，核酸檢測(cè)總陽(yáng)性率1.78‰，與國(guó)內(nèi)其他血液系統(tǒng)的結(jié)果比較一致［1，3］，從核酸檢測(cè)的結(jié)果來(lái)看，本質(zhì)量控制方法能夠保障核酸檢測(cè)結(jié)果穩(wěn)定有效。

［1］鄭優(yōu)榮，梁浩堅(jiān)，李仲平，等.核酸檢測(cè)技術(shù)在廣州地區(qū)獻(xiàn)血者血液篩查中的應(yīng)用.中國(guó)輸血雜志.2013，26（12）:1211 ［2］鄒崢嶸，謝云崢，伍曉菲，等.上海地區(qū)無(wú)償獻(xiàn)血者乙型肝炎病毒隱匿性感染情況和突變分析.中國(guó)輸血雜志，2013，26（8）:701

［3］安萬(wàn)新，鄧雪蓮，梁曉華，等.大連市血液中心 HBsAg陰性獻(xiàn)血者 HBV感染的確認(rèn)與 HBV核酸檢出效率的評(píng)估.中國(guó)輸血雜志，2014，27（3）:268

［4］莊乃保，葉賢林，李活，等.血液乙型肝炎核酸篩查質(zhì)量控制方法的研究.中國(guó)輸血雜志，2008，21（11）:844

［5］張妍，唐建華，李英蓮，等.核酸檢測(cè)實(shí)驗(yàn)室常用質(zhì)量監(jiān)控指標(biāo)的探討.中國(guó)輸血雜志，2014，27（6）:620