復發(fā)性尖銳濕疣患者CD4+、CD8+T細胞及調節(jié)性T細胞的表達及其臨床意義

何曉華等

【摘要】目的探討復發(fā)性尖銳濕疣患者CD4+、CD8+T細胞、CD4+CD25+Foxp3+調節(jié)性T細胞（Treg細胞）的表達與臨床意義。方法收集22例復發(fā)性尖銳濕疣患者（觀察組）和24例正常對照者（對照組）的血清，采用流式細胞儀檢測外周血CD4+、CD8+、CD4+/ CD8+T細胞和Treg細胞的表達水平。結果觀察組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的表達明顯低于對照組 （P<0.01），而Treg細胞的表達則明顯高于對照組 （P<0.01）。觀察組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的表達水平與患者的復發(fā)次數無顯著相關性（P>0.05）；Treg的表達水平與患者的復發(fā)次數呈顯著正相關（P<0.01）。結論復發(fā)性尖銳濕疣患者T細胞免疫功能低下，Treg細胞的表達水平與尖銳濕疣的復發(fā)密切相關。

【關鍵詞】尖銳濕疣； CD4+T細胞； CD8+T細胞；CD4+CD25+Foxp3+調節(jié)性T細胞

中圖分類號：R752.5+3 文獻標識碼：ADOI：10.3969/j.issn.10031383.2015.04.007

【Abstract】ObjectiveTo investigate the expressions and clinical significance of CD4+，CD8+T cells and CD4+CD25+Foxp3+regulatory T cells （Treg cells） of patients with recrudescent condyloma acuminatum.Methods22 cases of recrudescent condyloma acuminatum were selected as observation group，and 24 cases of normal controls as control group.Serum of both groups were collected，and flow cytometer was used to detect the expression levels of CD4+，CD8+，CD4+/ CD8+T cells and Treg cells in peripheral blood.Results The expression levels of CD4+， CD8+， CD4+/ CD8+T cells in the observation group were lower than those in the control group （P<0.01），while the expression levels of Treg cells in the former group were higher than those in the latter group （P<0.01）.The recurrent frequency of the patients had no significant correlation with the expression level of CD4+，CD8+，CD4+/ CD8+T cells in the observation group（P>0.05），but it had significant positive correlation with the expression level of Treg cells（P<0.01）.ConclusionPatients with recrudescent condyloma acuminatum have a low Treg cells immune function，and the recurrence of condyloma acuminatum has close relationship with the expression level of Treg cells.

【Key words】condyloma acuminatum；CD4+cell，CD8+Tcell；CD4+CD25+Foxp3+ regulatory T cells

尖銳濕疣（Condyloma acuminatum，CA）是由人類乳頭瘤病毒 （Human papillomavirus，HPV）感染所致，是最常見的性傳播疾病之一，該病容易復發(fā)，傳染性強[1]。近年來，尖銳濕疣發(fā)病率逐年升高[2]。有研究顯示患者細胞免疫功能可能與CA的發(fā)生、發(fā)展和轉歸關系密切[1，3]。本研究通過觀察復發(fā)性CA患者細胞免疫水平，探討CA的發(fā)病機制，以便用于指導CA的治療、判斷預后。

1資料與方法1.1一般資料所有患者來自我院2013年1月～2014年2月性病科門診，按照就診順序收集22例復發(fā)性CA患者作為觀察組。觀察組男15例，女7例，年齡18～48歲，平均（36.28±9.70）歲，病程2個月～2年，平均（10.1±4.3）個月，復發(fā)次數2～6次。選擇在我院體檢中心健康體檢正常者24例作為對照組，其中男10例，女14例，年齡18～50歲，平均（30.68±10.01）歲。兩組年齡、性別等比較差異無統(tǒng)計學意義（P>0.05），具有可比性。

1.2病例入選和排除標準入選標準： ①符合尖銳濕疣的診斷標準：臨床表現(xiàn)為外生殖器、會陰、肛周部位有典型的乳頭狀、菜花狀或雞冠狀增生物；②5%醋酸白試驗陽性；③復發(fā)2次或2次以上；④在本次治療前未經任何治療；⑤無結核、腫瘤、自身免疫性疾病，未合并其他性病，在治療前1個月內沒有全身應用抗病毒藥、免疫調節(jié)劑、中藥等藥物。排除標準：①妊娠期或哺乳期婦女；②精神障礙，難以溝通患者；③合并HIV、生殖器皰疹或者梅毒感染患者。

1.3實驗方法流式細胞儀檢測：抽取兩組受試者肝素抗凝血100 μl，加入淋巴細胞檢測試劑25 μl，混勻，室溫避光染色20 min；加入2 ml紅細胞裂解液，室溫避光放置10 min； 1500 r/min離心5 min棄上清液，加磷酸鹽緩沖液（PBS）2 ml，混勻；1500 r/min離心5 min棄上清液，加2%多聚甲醛PBS 500 ml固定，放置4℃～8℃冰箱待檢測。每管加細胞液100 μl，加入10 μl抗CD4 mAbPerCP、抗CD8mAbPerCP、抗CD4+CD25+Foxp3+ mAbPerCP，溫室避光放置15 min；紅細胞溶解液0.5 μl溶解紅細胞15 min；破膜劑Ⅰ、Ⅱ固定和破膜；加PBS 3 ml，1200 r/min離心5 min，棄上清；加細胞因子抗體，每份標本分別加同型對照IgG1FITC；溫室避光放置15 min；加PBS 4 ml，1200 r/min，離心10 min，棄上清；適量PBS重懸細胞上流式細胞儀檢測；每份標本檢測1萬個細胞，在 CD4+T淋巴細胞中，根據陰性對照試劑結果，以 CD25、Foxp3 設門，分析CD4+CD25+ Foxp3+細胞占 CD4+T淋巴細胞的比例。結果以陽性細胞百分率（%）表示并經Cell Quest功能軟件進行參數獲取和數據分析。

1.4統(tǒng)計學方法采用SPSS 13.0 統(tǒng)計軟件進行統(tǒng)計學分析，計量資料以均數±標準差（±s）表示，組間比較采用兩獨立樣本t檢驗，相關性采用直線相關分析，P<0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2結果2.1兩組T細胞及Treg細胞的表達情況比較觀察組CD4+、CD8+、CD4+/CD8+的表達明顯低于對照組，組間比較差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）；而Treg細胞的表達則明顯高于對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.01）。見表1。

2.2觀察組CD4+、CD8+、CD4+/ CD8+T細胞和Treg細胞與復發(fā)次數的相關性分析觀察組CD4+、CD8+、CD4+/ CD8+的表達水平與患者的復發(fā)次數無顯著相關性（r=0.555，P=0.352；r=-0.319，P=0650；r=0.239，P=0.284）；Treg的表達水平與患者的復發(fā)次數呈顯著正相關（r=0.612，P=0.002）。3討論細胞免疫是免疫活性T淋巴細胞所介導的一系列免疫應答和免疫調節(jié)功能。免疫活性T淋巴細胞可分為CD4和CD8兩個亞群，CD4 T細胞亞群根據它們細胞因子分泌模式和效應子功能的不同又可極化為兩個亞群，即Th1和Th2細胞。研究發(fā)現(xiàn)，CA患者外周血有CD4和CD8細胞亞群數目及比例異常，并有Th1和Th2型細胞因子分泌異常，表達傾向于向Th2偏移[5～7]。Th2介導的細胞免疫功能障礙可能是HPV感染后病毒持久存在并復制致尖銳濕疣治療后反復復發(fā)的病理基礎[5～7]。

前期的研究顯示CA患者的體液免疫缺陷[8，9]，但關于CA患者的細胞免疫功能的研究比較少。本研究旨在探討復發(fā)性CA患者細胞免疫水平，結果顯示，CD4+、CD8+細胞水平及CD4+/ CD8+的比值明顯低于對照組，提示CA患者細胞免疫功能低下，機體免疫監(jiān)測功能減低，HPV病毒復制，臨床表現(xiàn)為疣狀贅生物持續(xù)生長，本研究結果與黃永華等[4]的研究結果基本一致。Treg細胞是一類控制體內自身免疫反應的T細胞亞群。機體對抗原的免疫應答是一把雙刃劍，反饋調節(jié)達到陰陽平衡，一方面清除有害抗原，另一方面又可造成機體損傷[10]。免疫平衡需要完善的調節(jié)機制。Treg細胞對維持機體免疫耐受和免疫應答穩(wěn)態(tài)具有非常重要的作用，可以通過一系列機制抑制過強的免疫應答，使得機體在自身損傷最小的情況下有效地清除抗原或病原體。本研究顯示復發(fā)性CA患者外周血Treg的表達水平明顯高于健康對照組，提示機體受到HPV病毒感染時，體內T細胞向Treg細胞分化明顯加強，產生更多的Treg細胞來清除病毒。復發(fā)性CA患者CD4+、CD8+細胞水平下降，而Treg升高，這種免疫機理可能與病毒刺激機體誘導免疫反應過程中，免疫正應答與潛在免疫耐受誘導同時共存。

本研究結果顯示，CD4+、CD8+細胞水平及CD4+/ CD8+的比值與患者的復發(fā)次數無顯著相關性，但Treg細胞表達水平與患者的復發(fā)次數呈顯著的正相關，即復發(fā)次數越多，Treg細胞水平越高，提示尖銳濕疣患者在首發(fā)時檢測Treg細胞表達水平可判斷預后，對于高表達的患者給予更多的關注。黃永華等[4]的研究結果顯示CA患者抑郁情緒發(fā)生率為48.6%；CA患者抑郁組CD4+、CD8+、CD4+/ CD8+和NK細胞的水平明顯低于非抑郁組，提示CA患者存在明顯抑郁情緒并與個人及社會因素相關，且抑郁者細胞免疫功能更為低下。本研究結果結合前期研究，提示復發(fā)性CA患者除了給予常規(guī)的物理、藥物治療外，還需要緩解患者的抑郁情緒，有助于提高機體細胞免疫功能，減少CA的復發(fā)。參考文獻[1] 李嘉彥，羅育武，楊日東，等.復發(fā)性尖銳濕疣患者 HPV 感染模式和細胞免疫功能的分析[J].皮膚性病診療學雜志，2014，21（3）：197200.

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