原發(fā)性膽汁性肝硬化免疫發(fā)病機(jī)制的研究進(jìn)展

唐學(xué)良

[摘要] 目的 探究原發(fā)性膽汁性肝硬化（PBC）免疫發(fā)病機(jī)制。方法 選取該院2011年3月—2013年3月收治的100名PBC患者作為研究資料，根據(jù)他們病情的不同，分為PBC活動(dòng)期組和PBC穩(wěn)定期組，并選擇同期的50名身體健康體檢者作為對(duì)照組。抽取所有試驗(yàn)人員晨起空腹?fàn)顟B(tài)下的肘靜脈血液，利用雙色熒光標(biāo)記技術(shù)，對(duì)所有血樣中的CD4+CD25+T細(xì)胞亞群和CD4+CD28+T細(xì)胞亞群的變化情況，用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行觀(guān)察和檢測(cè)。結(jié)果 PBC活動(dòng)期患者血液中的CD4+CD25+T細(xì)胞亞群含量比PBC穩(wěn)定期患者和健康人群低（P<0.05），而CD4+CD28+T細(xì)胞亞群含量比PBC穩(wěn)定期患者和健康人群高（P<0.05）；同時(shí)，PBC穩(wěn)定期患者血液中的CD4+CD25+T細(xì)胞亞群含量比健康人群低（P<0.05），而CD4+CD28+細(xì)胞亞群含量比健康人群高（P<0.05）。結(jié)論 CD4+CD25+T含量在PBC患者血液中的減少，打破了效應(yīng)T細(xì)胞亞群和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞亞群之間的動(dòng)態(tài)平衡關(guān)系，患者維持自身免疫應(yīng)答的穩(wěn)態(tài)遭到破壞，最終引發(fā)PBC病癥。

[關(guān)鍵詞] 原發(fā)性；膽汁性；肝硬化；免疫發(fā)病機(jī)制

[中圖分類(lèi)號(hào)] R57 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2015）01（b）-0088-02

原發(fā)性膽汁性肝硬化（primary biliary cirrhosis， PBC）是由于某種免疫介質(zhì)傳遞不足，導(dǎo)致免疫調(diào)節(jié)功能紊亂發(fā)生免疫亢進(jìn)的一種疾病，臨床典型表現(xiàn)為瘙癢和疲勞。患者常見(jiàn)皮膚抓痕、肝脾體積增大、黃疸等癥狀，但并不是特異性癥狀。黃疸的癥狀通常出現(xiàn)在PBC的晚期階段，但在早期PBC患者中也并不少見(jiàn)。根據(jù)臨產(chǎn)的PBC病發(fā)量統(tǒng)計(jì)，PBC每年的發(fā)病率大約為萬(wàn)分之3.95，發(fā)病的患者大多數(shù)為女性（占83%左右），患者的平均年齡為（63.4±3.5）歲，臨床主要表現(xiàn)為四肢乏力和皮膚瘙癢[2]。PBC的特異性診斷指標(biāo)為血清AMAs呈陽(yáng)性，一般確診后平均存活年限為（15.6±1.8）年。雖然男性和女性PBC患者在血清學(xué)、組織學(xué)以及生物化學(xué)方面不存在本質(zhì)差異，卻在病癥學(xué)方面有明顯區(qū)別，男性PBC患者出現(xiàn)亞種并發(fā)癥的可能性更高，肝癌和消化系統(tǒng)病變等并發(fā)癥都較為常見(jiàn)。相關(guān)資料指出，隨著PBC早期診斷技術(shù)的進(jìn)步及熊去氧膽酸（ursodeoxycholic acid， UDCA）治療方法在臨床應(yīng)用的逐漸推廣，有效地提高3PBC的臨床治療效果，但是仍有部分患者治療效果不理想，需接受肝移植手術(shù)。研究顯示，自身免疫特征、遺傳因素、外界環(huán)境是PBC發(fā)病機(jī)制中的重要誘因。該研究選取2011年3月—2013年3月該院收治的100例PBC患者作為研究對(duì)象，利用雙色熒光標(biāo)記技術(shù)對(duì)所有血樣中的CD4+CD25+T細(xì)胞亞群和CD4+CD28+T細(xì)胞亞群的變化情況用流式細(xì)胞術(shù)進(jìn)行觀(guān)察和檢測(cè)，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

該研究選取100例PBC患者作為對(duì)象根據(jù)他們病情的不同，分為PBC活動(dòng)期組和PBC穩(wěn)定期組，PBC活動(dòng)期組患者65人，PBC穩(wěn)定期患者35人。PBC活動(dòng)期組中，男性20名，女性45名，年齡36～81歲，平均年齡（58.4±14.2）歲；PBC穩(wěn)定期組中，男性9名，女性26名，年齡34～82歲，平均年齡（57.8±15.7）歲。這100名患者都符合2000年美國(guó)肝病學(xué)會(huì)制定的對(duì)PBC 的診斷指導(dǎo)建議，且都不存在其他可能干擾實(shí)驗(yàn)結(jié)果的肝臟疾病，如藥物性、酒精性肝病患者；肝內(nèi)或肝外膽道梗阻、肝腫瘤等。同時(shí)，選擇同期的50名身體健康體檢者作為對(duì)照組，對(duì)照組中男性20名，女性30名，年齡25～85歲，平均年齡（53.9±16.3）歲。

1.2 方法

實(shí)驗(yàn)要求所有參與實(shí)驗(yàn)人員在實(shí)驗(yàn)當(dāng)日晨起后不得進(jìn)食，然后抽取實(shí)驗(yàn)對(duì)象的手肘靜脈血液作為樣本，并加入新鮮肝素鈉抗凝，然后將血樣送檢。然后，使用COULTER EPICS XL流式細(xì)胞儀檢測(cè)送檢的血樣。標(biāo)準(zhǔn)單克隆熒光抗體包括：FITC-CD4、PE-CD25、PE-CD28以及溶血素。將適量的雙色抗體（FITC-CD4/PE-CD25、FITC-CD4/PE-CD28）加入至送檢的血樣中，在避光、常溫的條件下，孵育血樣20 min，隨后將2 mL左右的紅細(xì)胞裂解溶液加入血樣中，利用OptimaTMXPN超速離心機(jī)以1 200 r/min的速度進(jìn)行5 min的離心操作，將離心后產(chǎn)生的上清液去除，加入2 mL左右的磷酸鹽緩沖液，繼續(xù)以1 000 r/min的速度進(jìn)行5 min的離心操作，再次將離心后產(chǎn)生的上清液去除，對(duì)以上過(guò)程進(jìn)行再一次重復(fù)操作，隨后將500 μL磷酸鹽緩沖液加入兩次離心后的血樣中，最后檢測(cè)其結(jié)果。檢測(cè)的過(guò)程中，對(duì)于淋巴細(xì)胞門(mén)A，通過(guò)前向散色光和側(cè)向散色光進(jìn)行鎖定，將各個(gè)通道間設(shè)置為補(bǔ)償自動(dòng)調(diào)節(jié)，隨后觀(guān)察并記錄CD4+CD25+T細(xì)胞亞群和CD4+CD28+細(xì)胞亞群的變化情況。

1.3 統(tǒng)計(jì)方法

采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)軟件對(duì)以上數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)量方式使用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（x±s），組間比較采用t檢驗(yàn)。P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

PBC活動(dòng)期患者血液中的CD4+CD25+T細(xì)胞亞群占CD4+T細(xì)胞總量的比例相對(duì)于PBC穩(wěn)定期患者和健康人群水平低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而CD4+CD28+細(xì)胞亞群占CD4+T細(xì)胞總量的比例相對(duì)于PBC穩(wěn)定期患者和健康人群水平高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；同時(shí)， PBC穩(wěn)定期患者血液中的CD4+CD25+T細(xì)胞亞群占CD4+T細(xì)胞總量的比例相對(duì)于健康人群水平低，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），而CD4+CD28+T細(xì)胞亞群占CD4+T細(xì)胞總量的比例相對(duì)于健康人群水平高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。以上結(jié)果說(shuō)明PBC患者血液中的CD4+CD25+T細(xì)胞亞群和CD4+CD28+細(xì)胞亞群含量存在顯著的變化，見(jiàn)表1。

表1 PBC患者不同時(shí)期和健康人群血樣中兩種細(xì)胞亞群的含量對(duì)比（x±s）

3 討論

在20世紀(jì)90年代，因?yàn)镻BC是一種會(huì)對(duì)肝臟造成比較嚴(yán)重的損害的疾病，其臨床癥狀和病毒性肝炎的癥狀存在很大的重合性，又因?yàn)槲覈?guó)一直乙肝肝病高發(fā)國(guó)家，所以當(dāng)時(shí)的醫(yī)生在臨床診斷時(shí)無(wú)法對(duì)PBC病癥做出正確的判斷，常常被誤診為病毒性肝炎，從而嚴(yán)重耽誤了PBC疾病的治療，加重了患者的痛苦[3-4]。

20世紀(jì)90年代之后，越來(lái)越多的醫(yī)生和基礎(chǔ)研究學(xué)者開(kāi)始對(duì)PBC這種特殊的肝病給予了更多的關(guān)注和研究。在我國(guó)，一大批著名的風(fēng)濕病、消化病、肝病專(zhuān)家，如李明宇、莊輝煌、張福強(qiáng)、邱德川、楊少偉、張鎮(zhèn)松、王吉耀、姚光弼、賈繼東等，他們?cè)谂R床治療的實(shí)踐過(guò)程中，觀(guān)察PBC這種疾病的發(fā)病原因和病情發(fā)展趨勢(shì)，從臨床診斷、病程觀(guān)測(cè)、藥物治療等方面入手，進(jìn)行科學(xué)分析和研究，發(fā)表了不少文章，呼吁國(guó)內(nèi)醫(yī)生和醫(yī)學(xué)研究人員加強(qiáng)對(duì)PBC疾病的重視，進(jìn)一步對(duì)PBC的臨床和基礎(chǔ)進(jìn)行探索和研究[5]。

事實(shí)上，目前對(duì)于PBC的確診方式并不復(fù)雜，特異性診斷指標(biāo)為血清AMAs呈陽(yáng)性，約90%的PBC患者都符合這一特性[6]。因此，只要醫(yī)院全面展開(kāi)檢測(cè)病人血清AMAs這一項(xiàng)目，就可以使PBC的臨床確診變得方便而快捷。而少部分血清AMAs呈陰性的PBC病患，身體中其他免疫抗體會(huì)特異性地出現(xiàn)，比如核心蛋白p62抗體、核心蛋白gp210抗體、抗平滑肌抗體（SMA）、核纖層蛋白B受體（LBR）抗體等，這些抗體的存在同樣為PBC病癥的診斷提供了可靠的依據(jù)。此外，對(duì)于血清AMAs呈陰性的PBC患者的診斷，除了通過(guò)檢測(cè)以上免疫抗體外，還需要結(jié)合患者的臨床癥狀，必要時(shí)可以進(jìn)行肝臟病理活檢。

對(duì)于PBC發(fā)病機(jī)制的研究，經(jīng)歷了漫長(zhǎng)而又艱難的過(guò)程。國(guó)外在過(guò)去的70多年間對(duì)PBC病癥的持續(xù)研究中，較為全面地了解了PBC的相關(guān)情況，然而這一可怕病癥依然存在很多未解之謎等待國(guó)內(nèi)外醫(yī)學(xué)工作者和研究人員再進(jìn)行深入的研究。例如：（1）PDC-E2作為抗原，普遍地存在于所有的人體細(xì)胞中，為什么PBC患者只針對(duì)BEC的PDC-E2產(chǎn)生免疫抗體；（2）BEC對(duì)于PDC-E2是否具有直接抗原遞呈作用；（3）為什么PBC破壞淋巴細(xì)胞存在自身抗原耐受性，其原理是什么；（4）為什么PBC病癥在女性人群的發(fā)病率遠(yuǎn)遠(yuǎn)高于男性，這一現(xiàn)象是否與X性染色體有直接關(guān)聯(lián)；（5）PBC在男性人群中的發(fā)病率相對(duì)女性明顯較低，是否與Y染色體存在直接關(guān)聯(lián)；（6）性激素在PBC的病情發(fā)展過(guò)程中起到了什么作用。以上這些問(wèn)題都有待于醫(yī)學(xué)研究人員進(jìn)行探索和研究，通過(guò)大量的臨床實(shí)驗(yàn)進(jìn)行驗(yàn)證和解釋。

PBC作為一種免疫介質(zhì)傳遞不足，導(dǎo)致免疫調(diào)節(jié)功能紊亂發(fā)生免疫亢進(jìn)、肝內(nèi)膽小管進(jìn)行性增生和非膿性炎癥作為主要特征的慢性膽汁性淤積性疾病[7]。臨床研究顯示，PBC患者在自身的免疫平衡系統(tǒng)受到破壞后，機(jī)體本身抗原物質(zhì)耐受能力變差，從而導(dǎo)致肝內(nèi)中小型膽管受到持續(xù)攻擊，引起破壞性膽汁淤積及肝膽炎癥[8]。CD4+CD25+T細(xì)胞亞群是一種專(zhuān)職抑制性細(xì)胞，具有特殊免疫調(diào)節(jié)作用：通過(guò)細(xì)胞間接觸進(jìn)而抑制NK細(xì)胞和CD28+細(xì)胞等人體自身反應(yīng)細(xì)胞所產(chǎn)生細(xì)胞毒作用。另一方面，CD4+CD28+T細(xì)胞亞群具有促使Th1和Th2細(xì)胞調(diào)節(jié)失衡的效果，從而使得以Th1細(xì)胞因子為主的免疫反應(yīng)進(jìn)入肝臟損害過(guò)程。該次試驗(yàn)顯示，PBC活動(dòng)期患者血清CD4+CD25+T含量明顯低于PBC穩(wěn)定期患者和健康人群，而CD4+CD28+細(xì)胞亞群含量則相對(duì)較高，結(jié)合以上結(jié)果及相關(guān)臨床資料，該次研究認(rèn)為PBC患者疾病的發(fā)展同患者機(jī)體CD4+CD28+、CD4+CD25+T細(xì)胞亞群失調(diào)引起患者免疫系統(tǒng)功能紊亂之間存在密切關(guān)系，其具體作用機(jī)制有待于進(jìn)一步深入研究。

綜上所述，CD4+CD25+T含量在PBC患者血液中的減少，打破了效應(yīng)T細(xì)胞亞群和調(diào)節(jié)性T細(xì)胞亞群之間的動(dòng)態(tài)平衡關(guān)系，患者維持自身免疫應(yīng)答的穩(wěn)態(tài)遭到破壞，最終引發(fā)PBC病癥。

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（收稿日期：2014-10-10）