化學(xué)發(fā)光法在梅毒特異性抗體檢測(cè)中低值結(jié)果的分析

[摘要] 目的 探討化學(xué)發(fā)光微粒法（CMIA）在梅毒特異性抗體低值結(jié)果中的臨床應(yīng)用。方法 選取該院2013年12月—2014年6月該院和門(mén)診病人常規(guī)免疫檢測(cè)標(biāo)本5673例，使用化學(xué)發(fā)光微粒法（CMIA）對(duì)5673人份標(biāo)本進(jìn)行初篩，陽(yáng)性標(biāo)本進(jìn)一步使用梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（TPPA）和甲苯胺紅不加熱血清凝集實(shí)驗(yàn)（TRUST）進(jìn)行了對(duì)比檢測(cè)。結(jié)果 使用CMIA法檢測(cè)5673份標(biāo)本中，陽(yáng)性標(biāo)本為347例，占總標(biāo)本數(shù)6.11%。其中S/CO值大于10的標(biāo)本為204例、S/CO值5～10的標(biāo)本81例、S/CO值1～5的標(biāo)本62例。在347例CMIA法陽(yáng)性標(biāo)本中，TPPA檢測(cè)為陽(yáng)性的305例（87.8%）TRUST檢測(cè)為陽(yáng)性的130例（37.5%）。2種方法比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.005）。 結(jié)論 CMIA在梅毒特異性抗體的檢測(cè)中，靈敏度較好，適合大批量篩查。對(duì)于S/CO值<5的標(biāo)本，應(yīng)結(jié)合TPPA和TRUST進(jìn)行復(fù)檢，有條件的實(shí)驗(yàn)室可使用免疫印跡法進(jìn)行確證。

[關(guān)鍵詞] 化學(xué)發(fā)光微粒法；梅毒特異性抗體；低值結(jié)果

[中圖分類號(hào)] R446.6 [文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼] A [文章編號(hào)] 1674-0742（2015）02（c）-0181-02

[Abstract] Objective To investigate the chemical luminescence particle method （CMIA） in the clinical application of syphilis specific antibody results in low value. Methods Using chemiluminescence microparticle （CMIA） on for 5673 specimens were screened， positive samples were further use of Treponema pallidum gelatin agglutination test （TPPA） and toluidine red unheated serum agglutination test （TRUST） were measured. Results Using CMIA method to detect 5673 samples， there were 347 cases， accounted for the total number of samples of 6.11%. The S/CO value is greater than 10 specimens for 204 cases， a S/CO value of 5 ～ 10 specimens from 81 patients， S/CO value of 1 ～ 5 of the specimens of 62 cases. In 347 cases of CMIA positive specimens， 305 cases positive detection for TPPA （87.8%） TRUST for the detection of 130 positive cases （37.5%）. Comparison of 2 methods had significant difference（P < 0.005）. Conclusion Syphilis specific antibody detection in CMIA， the sensitivity is better， suitable for mass screening. For values of S/CO less than 5 specimens should be combined with the TPPA and TRUST re examination， laboratory conditions can use Western blot confirmation.

[Key words] Chemiluminescence method of microparticle； Syphilis specific antibody；Low results

梅毒是由梅毒蒼白螺旋體引起的一種性傳播疾病，可引起神經(jīng)、心血管等多系統(tǒng)損害，嚴(yán)重影響人群的身體健康。此外，梅毒亦可通過(guò)胎盤(pán)傳給胎兒，導(dǎo)致自發(fā)性流產(chǎn)、死產(chǎn)或先天梅毒等。90年代末以來(lái)，全國(guó)梅毒報(bào)告病例數(shù)明顯增加，呈快速流行的趨勢(shì)，已成為我國(guó)重要的公共衛(wèi)生問(wèn)題。

為了控制梅毒的院內(nèi)感染，衛(wèi)生部已規(guī)定凡是手術(shù)、輸血及各種創(chuàng)傷性檢查的患者，均需進(jìn)行梅毒特異性抗體的血清學(xué)檢測(cè)。自2011年以來(lái)，該院檢驗(yàn)科開(kāi)始使用化學(xué)發(fā)光微粒子法（CMIA）進(jìn)行梅毒特異性抗體篩查。CMIA具有特異性好、敏感度高、可定量、全自動(dòng)操作、重復(fù)性好等優(yōu)點(diǎn)。但在長(zhǎng)期的工作中，也發(fā)現(xiàn)CMIA法在檢測(cè)中尤其是低值標(biāo)本中具有一定的假陽(yáng)性，因此，為了更好的指導(dǎo)臨床的診斷和治療，避免誤診。該實(shí)驗(yàn)將自2013年12月—2014年6月間的住院病人5673人份標(biāo)本分別使用用化學(xué)發(fā)光微粒子法（CMIA）、梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（TPPA）和TRUST（甲苯胺紅不加熱血清凝集實(shí)驗(yàn)）分別進(jìn)行了檢測(cè)。現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料

該院住院和門(mén)診病人常規(guī)免疫學(xué)檢測(cè)標(biāo)本5673例，其中男3125例，女2548例。年齡16～86歲，平均年齡39歲。

1.2 儀器與試劑

CMIA檢測(cè)是采用鄭州安圖生物公司A2000化學(xué)發(fā)光儀器以及配套試劑。TPPA是采用日本瑞必歐株式會(huì)社試劑。TRUST采用上海榮盛生物藥業(yè)有限公司生產(chǎn)的試劑。

1.3 檢測(cè)方法

使用CMIA法對(duì)5673份標(biāo)本進(jìn)行篩查，測(cè)得結(jié)果在S/CO值在1.0以上的為陽(yáng)性。然后，陽(yáng)性標(biāo)本使用TPPA和TRUST進(jìn)行檢測(cè)。以上方法均嚴(yán)格按照儀器和試劑說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.4 統(tǒng)計(jì)方法

使用SPSS11.5軟件進(jìn)行對(duì)數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，計(jì)數(shù)資料進(jìn)行χ2檢驗(yàn)， P<0.05具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2 結(jié)果

2.1 使用CMIA法檢測(cè)5673份標(biāo)本中，陽(yáng)性標(biāo)本為347例，占總標(biāo)本數(shù)6.11%。其中S/CO值大于10的標(biāo)本為204例、S/CO值5～10的標(biāo)本81例、S/CO值1～5的標(biāo)本62例。在347例CMIA法陽(yáng)性標(biāo)本中，TPPA檢測(cè)為陽(yáng)性的305例（87.8%），TRUST檢測(cè)為陽(yáng)性的130例（37.5%）。經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)檢驗(yàn)，P<0.005具有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異。

2.2 CMIA法篩查陽(yáng)性標(biāo)本347例（S/CO值>10、5～10和1～5三種濃度），使用TPPA和TRUST方法進(jìn)行對(duì)比檢測(cè)結(jié)果，見(jiàn)表1。

3 討論

隨著社會(huì)的發(fā)展和對(duì)外交流的增多，我國(guó)近年來(lái)梅毒螺旋體感染人群日益增長(zhǎng)。因此，梅毒抗體的檢查也成為各個(gè)實(shí)驗(yàn)室的一個(gè)重要項(xiàng)目?；瘜W(xué)發(fā)光微粒子法（CMIA）是近年來(lái)開(kāi)始應(yīng)用的新型檢測(cè)技術(shù)，由于CMIA使用全自動(dòng)重組TP抗原（TPN15、TPN17、TPN47）包被微粒子檢測(cè)血清抗體[1]。使用兩步驟免疫檢測(cè)，避免了鉤狀效應(yīng)的產(chǎn)生。有報(bào)道稱CMIA檢測(cè)各期梅毒患者梅毒抗體的敏感性為98.7%～100%，特異性為99.9%[2]。從該試驗(yàn)中也可以看出，化學(xué)發(fā)光微粒子法（CMIA）與TPPA法相比較，敏感性較高，在低值標(biāo)本中，差異性更加明顯。CMIA法另外具有快速、高通量等優(yōu)點(diǎn)。

梅毒螺旋體明膠凝集試驗(yàn)（TPPA）是目前梅毒檢測(cè)中比較常用的確認(rèn)實(shí)驗(yàn)方法。TPPA是將經(jīng)過(guò)提純處理的梅毒螺旋體特異性抗原包，使用明膠顆粒為載體，當(dāng)抗原和血清中抗體發(fā)生特異性反應(yīng)時(shí)就會(huì)出現(xiàn)顆粒凝集現(xiàn)象，凝集的強(qiáng)度與抗體濃度成正相關(guān)。除對(duì)I期梅毒敏感性稍低外，對(duì)其余各期梅毒的敏感性和特異性均較高[3]。

TRUST（甲苯胺紅不加熱血清凝集實(shí)驗(yàn)）主要應(yīng)用于梅毒非特異性抗體的檢測(cè)，梅毒非特異性抗體相比特異性抗體出現(xiàn)時(shí)間晚二周左右，非活動(dòng)期或在治療期間的梅毒患者非特異抗體濃度會(huì)下降或轉(zhuǎn)陰，晚期梅毒患者非特異性抗體有可能轉(zhuǎn)陰等原因[4]，因此，對(duì)于Ⅱ期梅毒TRUST具有很高的臨床診斷價(jià)值，但對(duì)于I、Ⅲ期梅毒則檢出率較低。治療期或處于非活動(dòng)期的梅毒非特異性抗體檢出率也較低，易出現(xiàn)假陰性。

該試驗(yàn)結(jié)果表明，CMIA檢測(cè)梅毒特異性抗體濃度在1～5S/CO值時(shí)，TPPA的檢出率僅為56.45%。主要原因是：① CMIA法的分子抗原主要選自梅毒螺旋體外膜的脂蛋白，多肽抗原是使用基因重組表達(dá)而獲得。再用血清清蛋白與之相連接，試劑抗原所使用的合成多肽不做提純，可能造成非特異性反應(yīng)升高，從而導(dǎo)致CMIA法包含引起不符合的序列使檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)不符合。②自身免疫性疾病和惡性腫瘤患者的標(biāo)本中，含有一些干擾免疫檢測(cè)的抗體而造成假陽(yáng)性。③部分老年人由于生理的改變和免疫功能的異常，產(chǎn)生的一些抗體和蛋白質(zhì)，從而導(dǎo)致結(jié)果出現(xiàn)假陽(yáng)性。有報(bào)道認(rèn)為使用CMIA法測(cè)定梅毒特異性抗體的最佳篩查Cutoff值為3.125。這樣，CMIA法的特異性有顯著的升高，并保留了原有的高敏感性[5]。

根據(jù)有關(guān)資料，TPPA在檢測(cè)梅毒特異性抗體中，IgG型抗體反應(yīng)性與IgM型抗體相比較弱，而在一些感染性人群中，卻主要以IgG型抗體為主。因此，這部分人群在TPPA檢測(cè)中，常常出現(xiàn)低滴度的反應(yīng)，甚至出現(xiàn)假陰性[6]。在該試驗(yàn)中，CMIA檢測(cè)梅毒濃度在1～5S/CO值時(shí)，TPPA的陽(yáng)性率為56.45%，對(duì)于這部分低濃度的人群，有進(jìn)一步發(fā)展的可能，最好進(jìn)行觀察監(jiān)控。

TRUST（甲苯胺紅不加熱血清凝集實(shí)驗(yàn)）是檢測(cè)非特異性抗體常用的方法，梅毒非特異性抗體是患者被梅毒螺旋體感染后釋放出的物質(zhì)而產(chǎn)生的自身抗體，稱為反應(yīng)素。非特異性抗體比特異性抗體出現(xiàn)要晚兩周左右。因此，在患者被梅毒螺旋體感染的初期，非特異性抗體在檢測(cè)中常常顯示為陰性。在經(jīng)過(guò)治療后，梅毒非特異性抗體會(huì)漸漸轉(zhuǎn)陰，這也是I期和晚期梅毒非特異性抗體陽(yáng)性率較低的原因[7]。非特異性抗體也受多種疾病的影響，例如一些感染性疾病和自身免疫性疾病。而此時(shí)，實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中，假陽(yáng)性的幾率也較高。該試驗(yàn)結(jié)果顯示，CMIA檢測(cè)梅毒濃度在1～5S/CO值時(shí)，TRUST陽(yáng)性率僅為9.67%，與有關(guān)文獻(xiàn)數(shù)據(jù)相吻合[8]。

在該實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，表明使用CMIA法檢測(cè)梅毒抗體中，對(duì)于低值結(jié)果的標(biāo)本，尤其是S/CO值1～5時(shí)，應(yīng)采用多種方法進(jìn)行復(fù)檢，有條件的實(shí)驗(yàn)室最好能使用TPPA或免疫印跡法進(jìn)行復(fù)檢，并與臨床診斷相結(jié)合。避免出現(xiàn)假陽(yáng)性而導(dǎo)致臨床誤診，消除醫(yī)療糾紛的隱患。

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（收稿日期：2014-11-2）