丙型肝炎臨床檢驗技術(shù)現(xiàn)狀及研究進展

張晶秋

遼陽市傳染病醫(yī)院檢驗科，遼寧遼陽 111099

丙型肝炎是丙型肝炎病毒（HCV）感染所致的典型全球性傳染性疾病，HCV 傳播途徑較多，主要通過血液傳播，也可通過家庭內(nèi)接觸、性接觸、母嬰傳播，但至今依然有及半數(shù)的HCV 患者感染傳播途徑未能明確，這表明HCV 傳播有許多綜合途徑或隱性途徑[1]。據(jù)WHO 調(diào)查分析所提供的數(shù)據(jù)結(jié)果，全球每一百人中就存在3 例HCV 病毒感染者，感染人數(shù)早已破億，且每年都有大量新增感染病例。由于目前臨床上尚未研制出專門有效的丙型肝炎疫苗，因而需找靈敏的HCV 檢驗途徑、積極預(yù)防并及早發(fā)現(xiàn)HCV 感染是避免丙型肝炎發(fā)病、影響人類健康的最佳方式[2]。該研究為尋求有效可靠的HCV 檢驗方式，對近年來研究較多的HCV 抗原檢測技術(shù)、HCV-RNA 核算擴增檢測技術(shù)、抗-HCV 檢測以及HCV 核心抗原和抗-HCV 檢測手段應(yīng)用現(xiàn)狀及研究進展進行了綜述。

1 抗-HCV 檢驗技術(shù)

抗-HCV 檢測技術(shù)是最早出現(xiàn)、研究和應(yīng)用時間最久的HCV 檢測技術(shù)。HCV 感染者外周血中所含HCV 含量較低、病毒抗原含量較低，一般的方式很難直接檢測并發(fā)現(xiàn)HCV 感染，此種方式是歷經(jīng)十幾年不斷嘗試、改良得到的有效檢測方式，并進一步演變出ELISA、雙抗原加薪、充足免疫印跡法（RIBA）、蛋白芯片檢測法、間接酶聯(lián)免疫吸附試驗（間接ELISA）、免疫層析法等多種實用可靠的方式[3]。提及的這些各類檢測手段中，重組免疫印跡法（RIBA）尤以極高的靈敏度得到一致認可，并且已經(jīng)成為抗體檢測的最佳標(biāo)準(zhǔn)；蛋白芯片的正確使用可靈敏得出準(zhǔn)確的抗-HCV 分型；ELISA 則因其簡單的操作、成本較低的設(shè)備材料和較滿意的檢測結(jié)果而成為目前應(yīng)用最廣、最實用的抗-HCV檢測技術(shù)[4]。

當(dāng)前的抗-HCV 檢驗技術(shù)可根據(jù)所用抗原類型及時間先后分為3 代：第一代抗-HCV，以病毒基因組非結(jié)構(gòu)區(qū)獲取IgG 試劑盒所需抗原，其使用大大降低了HCV 輸血感染率，其同時還有抗體檢出用時長、假陽性率高、靈敏度較低等缺陷[5]；第二代試劑同時包含有HCV 核心區(qū)多肽C22-3、C100 抗原、非結(jié)構(gòu)區(qū)抗原C33C、抗-C33C、抗-C22-3 感染后可焦躁檢驗發(fā)現(xiàn)，特異性及敏感性均良好，一般在HCV 感染發(fā)生后的8～12 周期可檢測發(fā)現(xiàn)；第三代HCV 抗體ELISA 試劑中有重組NSS 多肽成分存在，相對降低了核心區(qū)抗原比例，同時提升了非結(jié)構(gòu)區(qū)NSS區(qū)C33C 抗原占比數(shù)據(jù)，同時添加NSS 區(qū)抗原、特異性、敏感性均更優(yōu)[6]。

2 HCV-RNA 核酸擴增檢測技術(shù)（NAT）

有一項HCV 復(fù)制活躍相對準(zhǔn)確的指標(biāo)，即為外周血中檢出HCV RNA，HCV 感染發(fā)生的14 d 內(nèi)即可檢測發(fā)現(xiàn)HCV RNA，而感染恢復(fù)之前的血清改物質(zhì)水平再次達到新高峰。當(dāng)前，NAT 檢測技術(shù)已經(jīng)成為部分臨床工作者使用的HCV 感染確認途徑使用[7]。HCV RNA 水平會隨飲食情況發(fā)生變化，當(dāng)攝入食物蛋白、脂肪含量高時，其更易因結(jié)合脂蛋白、脂質(zhì)而導(dǎo)致檢出水平遠遠低于日常水平，這也是導(dǎo)致檢查不準(zhǔn)確的一種常見原因一。此外，NAT 檢測技術(shù)操作過程需要高標(biāo)準(zhǔn)的設(shè)備予以支持、經(jīng)驗豐富的操作人員予以配合，而且此種檢驗方式用時長、操作步驟繁瑣漫長，可行性不太高，而且檢查結(jié)果可能因為檢查過程意外污染而呈現(xiàn)假陽性而影響檢查結(jié)果準(zhǔn)確度，因而此種檢驗方式在實際臨床工作中或?qū)嶒炇已芯恐卸茧y以真正大范圍推廣應(yīng)用，普及難度較高[8]。

NAT 檢驗技術(shù)的不同廠商研發(fā)出的方法和相關(guān)設(shè)備不盡相同，PCR 測定方式相對適用于更多的條件及患者，使用效果最被認可，目前尤以套式PCR 技術(shù)最佳，目前應(yīng)用較多、效果最滿意的當(dāng)屬熒光定量PCR 技術(shù)，此種技術(shù)檢測HCV 感染時，有較高靈敏度，而且有自動定量檢測手段更方便使用[9]。近年來關(guān)于NAT 技術(shù)應(yīng)用的最新研究先后發(fā)現(xiàn)了基因芯片技術(shù)、環(huán)介導(dǎo)等溫基因擴增技術(shù)（LAMP），前者操作簡單、對儀器設(shè)備和材料要求不高，應(yīng)用前景廣闊。

3 HCV 抗原檢測技術(shù)

隨著HCV 抗原檢測技術(shù)的不斷更新和相關(guān)研究的不斷深入，有學(xué)者提出抗原抗體復(fù)合物解離劑、單克隆抗體的加緊研究和應(yīng)用是改良HCV 抗原檢測現(xiàn)有技術(shù)的關(guān)鍵所在[10]。近些年，西方一些研究嘗試推出定量、定性法相關(guān)的雙抗體夾心法對血清標(biāo)本中游離HCV 或總HCV 核心抗原ELISA 試劑盒。上述新型檢驗技術(shù)相比RT-PCR 技術(shù)進一步簡化了操作、增強了環(huán)境適應(yīng)性、縮短了檢驗所需時間，假陽性率也進一步得到控制，可以說，此種新的檢驗技術(shù)很大程度上克服了原有技術(shù)的短板，尤其適用于HCV 血清學(xué)轉(zhuǎn)換前期的抗-HCV 陽性感染病毒血癥分析、急性丙型肝炎診斷工作和HCV 感染者就醫(yī)過程中病毒血癥跟蹤觀察等工作，HCV 核心抗原存在時間僅有27～70 d，延長難度大，因而HCV 核心抗原測定仍不能脫離抗-HCV 檢測結(jié)果而單獨進行。另外，HCV 核心區(qū)基因變異與HCV 核心抗原檢測結(jié)果有直接而復(fù)雜的聯(lián)系，抗原檢測敏感度并非一成不變。因而，對當(dāng)前推廣的試劑盒進行改良，就需要著重提升單克隆抗體的天然抗原構(gòu)象表位親和力[11]。

4 同時檢測抗-HCV 與HCV 核心抗原技術(shù)

抗原抗體聯(lián)合檢驗技術(shù)是臨床專家經(jīng)過反復(fù)實踐分析，探索出的血清學(xué)、HCV 篩查試劑盒聯(lián)合檢測新技術(shù)，當(dāng)前相對成熟的成果是HCV 核心抗原和外周蛋白抗體及部分核心抗體相結(jié)合的檢測試劑盒。HCV 核心抗原是HCV 感染者體內(nèi)出現(xiàn)的早期感染指標(biāo)，幾乎與HCV RNA 同時出現(xiàn)，這體現(xiàn)了核心抗原和HCV RNA 的動力學(xué)變化密切相關(guān)。

HCV 核心抗原側(cè)測定分析主要依靠血清樣品HCV 核心抗原水平定量檢測或雙抗體夾心法定性檢測。此種檢驗技術(shù)極少因樣品內(nèi)所含抗-HCV 影響而出現(xiàn)精確度降低現(xiàn)象，結(jié)果相對可靠靈敏，此種技術(shù)可應(yīng)用于HCV 早期急性丙型肝炎的臨床診斷。不久的將來，市場上將會出現(xiàn)越來越多的聯(lián)合檢測類試劑盒，通過兩步檢測實現(xiàn)篩查、診斷和輔助治療工作，縮短檢驗所需時間是日后亟需解決的難題[12]。

綜上所述，HCV 檢驗技術(shù)主要有HCV 抗原檢測技術(shù)、HCVRNA 核算擴增檢測技術(shù)、抗-HCV 檢測以及HCV 核心抗原和抗-HCV 檢測共4 種類型，各有優(yōu)劣，且都在不斷改良和發(fā)展中。日后，臨床上除了需要研究更多新的檢驗技術(shù)，還需要解決檢驗用時長、靈敏度低、結(jié)果易受影響等問題。

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