深靜脈血栓形成動(dòng)物模型的建立方法及其進(jìn)展

張俠陵 熊?chē)?guó)祚

南華大學(xué)第二附屬醫(yī)院，湖南衡陽(yáng) 421000

深靜脈血栓形成動(dòng)物模型的建立方法及其進(jìn)展

張俠陵 熊?chē)?guó)祚

南華大學(xué)第二附屬醫(yī)院，湖南衡陽(yáng) 421000

下肢深靜脈血栓形成(deep vein thrombosis of lower extremity，DVT)作為血管外科的常見(jiàn)疾病，其動(dòng)物模型的建立是研究疾病的發(fā)病機(jī)制和治療方法的重要條件。該文對(duì)近年來(lái)對(duì)于各種實(shí)驗(yàn)性深靜脈血栓動(dòng)物模型的方法及其利弊進(jìn)行概述，為今后動(dòng)物實(shí)驗(yàn)提供充足的參考依據(jù)。

深靜脈血栓形成；動(dòng)物模型；DVT

隨著醫(yī)療水平的進(jìn)步，深靜脈血栓形成因其高發(fā)病率、高致死率逐漸受到臨床醫(yī)生的重視。目前對(duì)其病因的研究仍處于假設(shè)階段。動(dòng)物模型為研究DVT的發(fā)病機(jī)制和評(píng)價(jià)對(duì)應(yīng)的治療方法提供了可能，迄今用于深靜脈血栓動(dòng)物模型約有50年的歷史，現(xiàn)將各主流方法報(bào)道如下。

1 下腔靜脈結(jié)扎法

1.1 大鼠模型

此為最經(jīng)典的模型,1980年Reyers等[1]通過(guò)結(jié)扎大鼠下腔靜脈第一次建立起深靜脈血栓動(dòng)物模型：將大鼠麻醉后，沿腹白線進(jìn)腹，分離出下腔靜脈，于左腎靜脈下方結(jié)扎其下腔靜脈，縫合后2～6 h打開(kāi)腹腔，可見(jiàn)血栓形成。此方法結(jié)扎后3 h約60%～80%的小鼠可形成血栓，6 h后血栓形成率可達(dá)100%。在對(duì)于藥物在體內(nèi)抑制血栓形成的研究中，此法有廣泛的應(yīng)用。

也有學(xué)者在Reyers的方法的基礎(chǔ)上做出許多改進(jìn)，如張智輝等同時(shí)結(jié)扎下腔靜脈和髂總靜脈，建立的大鼠深靜脈血栓模型,證明白細(xì)胞在DVT形成中起重要作用。并將各種改良法進(jìn)行比較，證實(shí)采用縮窄下腔靜脈+阻斷夾阻斷+結(jié)扎腎靜脈至髂靜脈水平的下腔靜脈各屬支的方法，可以建立起穩(wěn)定的大鼠DVT疾病模型[2]。賽力克·馬高維亞等[3]在備制大鼠深靜脈血栓模型時(shí)，將普通交換導(dǎo)絲放置于左腎靜脈與下腔靜脈匯合處下方，與下腔靜脈一并結(jié)扎，1 h后抽出導(dǎo)絲。成功建立出，近心端保持通暢的深靜脈血栓動(dòng)物模型，此法有利于觀察藥物溶栓或抗栓塞作用的效果。

1.2 兔模型

可能因?yàn)榻?jīng)濟(jì)適用性等原因，以兔下腔靜脈結(jié)扎制備深靜脈血栓模型者遠(yuǎn)小于大鼠。方法如大鼠模型，在左腎靜脈下方結(jié)扎下腔靜脈。兔模型下腔靜脈較粗大，可用于靜脈造影等介入實(shí)驗(yàn)。

2 股靜脈阻斷法

Rhodes等[4]通過(guò)暫時(shí)阻斷股靜脈近、遠(yuǎn)兩端的方法建立了深靜脈血栓犬模型。方法如下：將犬麻醉后，分離出股靜脈，分別結(jié)扎股靜脈近、遠(yuǎn)兩端約48 h。模型成功率可達(dá)97%～100%。此方法還可用于兔模型中，因避免開(kāi)腹可減少動(dòng)物創(chuàng)傷，提高實(shí)驗(yàn)動(dòng)物存活。

造模原理為局部血液瘀滯，內(nèi)皮細(xì)胞損傷，啟動(dòng)內(nèi)源性凝血系統(tǒng)，同時(shí)異物留置血液中啟動(dòng)外源性凝血系統(tǒng)，促使血栓形成。Knight等[5]在麻醉動(dòng)物后（犬、兔）沿股靜脈走形，切開(kāi)暴露股靜脈，阻斷股靜脈兩端后，于近心端插入螺旋銅絲，逐層縫合后，建立起深靜脈血栓動(dòng)物模型。此法結(jié)合放射性核素標(biāo)記法，在研究新、舊血栓成分上有廣泛的應(yīng)用。

3 股靜脈電刺激法

方法如下：先給大鼠每日肌肉注射地塞米松磷酸鈉，使血液保持高凝狀態(tài)。再將大鼠麻醉，經(jīng)股內(nèi)側(cè)行縱行切口，分離出長(zhǎng)約 1.5 cm的股靜脈，股靜脈的遠(yuǎn)、近端分別接通正、負(fù)極電源，1.5 mA,持續(xù)7 min。即可形成血栓。楊軍[6]應(yīng)用此法根據(jù)形成的血栓的濕重與纖溶指標(biāo)，研究藥物對(duì)于血栓形成的抗凝作用。此法可在保持血管完整性同時(shí)形成血栓，對(duì)后續(xù)切片觀察提供了便利。

4 凝血酶直接注入法

韓力群等[7]將實(shí)驗(yàn)犬麻醉后，切開(kāi)暴露右側(cè)股靜脈，穿刺置入導(dǎo)管，緩慢注入500U凝血酶。并用彩色超聲多普勒動(dòng)態(tài)觀察血栓形成過(guò)程，成功制備深靜脈血栓動(dòng)物模型。也可將目標(biāo)血管暫時(shí)阻斷后，注入凝血酶。通過(guò)阻斷血流、損傷血管壁、激活凝血因子提高模型制備的成功率。

5 創(chuàng)傷法

創(chuàng)傷性深靜脈血栓動(dòng)物模型，是具有骨科特點(diǎn)，符合骨科臨床實(shí)際的新型動(dòng)物模型。趙學(xué)凌[8]利用自制的打擊裝置，以不同的打擊強(qiáng)度，打擊大鼠雙側(cè)大腿近端外側(cè)，制作出骨折組（瞬間打擊能量為4.2 J）,創(chuàng)傷組（瞬間打擊能量為2.4 J），兩種大鼠模型。然后均行髖人字石膏固定，成功建立大鼠創(chuàng)傷性深靜脈血栓模型，實(shí)驗(yàn)證明骨折組在第7 d靜脈血栓形成率為85%，為研究創(chuàng)傷性深靜脈血栓形成的理論基礎(chǔ)提供了實(shí)驗(yàn)依據(jù)。宋恩等[9]將大鼠股靜脈分離，并用血管鉗夾閉股靜脈約3 s，再用雙后肢髖人字石膏外固定予以制動(dòng)，最終建立起創(chuàng)傷性深靜脈血栓動(dòng)物模型。

6 家兔耳緣靜脈血栓法

將家兔耳緣靜脈分離出2 cm長(zhǎng)的靜脈段,結(jié)扎上下兩端,并暫時(shí)阻斷兩側(cè)分支血管以阻止血流。抽出該段血液,并注入凝血酶。暫時(shí)打開(kāi)兩側(cè)分支血管,使血液充盈入目標(biāo)靜脈段中，再次阻斷分支血管，使目標(biāo)靜脈段內(nèi)形成血塊。取下阻斷分支血管的血管夾,分別打開(kāi)結(jié)扎線,通過(guò)透射光觀察血栓消失及血流恢復(fù)的時(shí)間,此法可以觀察藥物的溶栓作用。

7 展望

研究DVT發(fā)病機(jī)制、病理變化和治療方法需要合適的動(dòng)物模型。迄今，建立深靜脈血栓動(dòng)物模型，主要為阻斷靜脈血流，造成血液淤滯，激活內(nèi)源性凝血系統(tǒng)，誘發(fā)血栓形成。也有許多以注入血栓誘導(dǎo)劑（如凝血酶），加以機(jī)械性損傷血管內(nèi)皮細(xì)胞。其中下腔靜脈結(jié)扎法最為方便易行且經(jīng)濟(jì)常用，其大鼠血栓模型，普遍用于藥物的抗血栓的機(jī)制的研究;對(duì)血管介入溶栓、取栓等治療及對(duì)血栓影像學(xué)診斷的研究,需要較為粗大的犬、兔的股靜脈，其缺點(diǎn)在于實(shí)驗(yàn)費(fèi)用高昂、造模后管理難度大等方面。侯旭等[10]，通過(guò)比較正常動(dòng)物和老齡動(dòng)物的深靜脈血栓動(dòng)物模型中下腔靜脈的拉伸力學(xué)特性，表明不同年齡層的動(dòng)物靜脈血栓形成的條件有所差別。國(guó)外學(xué)者M(jìn)osesson MW[11]，利用轉(zhuǎn)基因技術(shù)，制備的含人體纖維蛋白酶原基因的轉(zhuǎn)基因老鼠，制作出深靜脈血栓模型，證實(shí)了凝血酶-γ鏈序列在血栓形成中有著重要作用。使用轉(zhuǎn)基因老鼠制備DVT動(dòng)物模型，有助于對(duì)深靜脈血栓形成的發(fā)病機(jī)制進(jìn)行更深入的研究，可能成為今后的主流研究方向。目前公認(rèn)DVT的發(fā)病機(jī)制是Virchow的三大病因，即血流滯緩、血液高凝、靜脈壁的損傷。從病因水平制作出DVT模型，將是制作出符合臨床實(shí)際的模型的關(guān)鍵，對(duì)于今后推進(jìn)深靜脈血栓形成防治研究有極大的幫助，同時(shí)大量文獻(xiàn)證明中醫(yī)藥對(duì)于深靜脈的發(fā)病、發(fā)展有良好的干預(yù)效果，因此制備出符合中醫(yī)證候的深靜脈血栓模型，也將是需要我們努力研究的放向。

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Deep vein thrombosis establish methods and progress in animal models

ZHANG Xialing XIONG Guozuo
The selond Affiliated Hospital of NanHua University,Hengyang Hunan,421000,China

Deep Vein Thrombosis of lower extremity is a common disease of vascular surgery.The establishment of its animal model is the most important requirement for the study of pathogenesis and therapeutic methods.This paper summarizes ways to establish animal model of DVT and illustrates advantages and disadvantages of each method,which can provide sufficient reference basis for the further study.

Deep Vein Thrombosis；Animal model；DVT

R725

A

1674-0742（2015）02（c）－0197-02

2014-11-18）

張俠陵（1987-），男，湖南人，醫(yī)學(xué)碩士，學(xué)生，研究方向：血管外科。

熊?chē)?guó)祚(1973-)，男，湖南人，醫(yī)學(xué)博士，副主任醫(yī)師，研究方向：血管外科。