人乳頭瘤病毒16型感染及其高危因素分析

段蒙，陳秀杰，曲芃芃

人乳頭瘤病毒16型感染及其高危因素分析

段蒙1，2，陳秀杰1，曲芃芃2△

目的 檢測天津市市區(qū)健康篩查女性中人乳頭瘤病毒（HPV）16型感染率，分析HPV16感染的危險因素。方法 通過問卷調(diào)查方式對2 000例天津市市區(qū)健康普查女性進行相關(guān)因素調(diào)查，同時收集入組女性的宮頸脫落細胞。通過巢式PCR擴增和焦磷酸測序技術(shù)進行HPV型別檢測，采用χ2檢驗和多因素Logistic回歸分析HPV16感染的高危因素。結(jié)果 2 000例篩查標本中，HPV陽性271例（13.55%），其中前3位為HPV16型陽性占39.5% （107/271），HPV58型陽性占15.13%（41/271），HPV18型陽性占9.59%（26/271）。HPV16感染率吸煙者高于不吸煙者，首次性交年齡≤25歲者高于＞25歲者，性伴侶數(shù)≥2者高于＜2者，懷孕次數(shù)≥2者高于＜2者，流產(chǎn)次數(shù)≥3者高于＜3者，避孕方式為非避孕套者高于避孕套者（均P＜0.05）；HPV16感染率在不同年齡、飲酒史、教育水平、以前婦科體檢等因素間差異無統(tǒng)計學意義。吸煙史和首次性交年齡≤25歲為HPV16感染的獨立危險因素。結(jié)論 天津市市區(qū)健康普查婦女HPV感染以HPV16型最常見。避免高危因素的暴露，制止女性過早發(fā)生性行為，同時改變不良生活習慣是預(yù)防HPV16感染及降低宮頸癌發(fā)生的有效措施。

人乳頭瘤病毒16；感染；宮頸腫瘤；問卷調(diào)查；危險因素；焦磷酸測序技術(shù)

宮頸癌是全球范圍導致女性死亡的第二大惡性腫瘤，嚴重威脅著婦女的生存健康，88%的死亡病例發(fā)生在肯尼亞、納米比亞、泰國、中國等發(fā)展中國家［1］。人乳頭瘤病毒（human papillomavirus，HPV）感染是導致宮頸癌及宮頸上皮內(nèi)瘤變（CIN）發(fā)生的主要病因，尤其是高危型人乳頭瘤病毒（hr-HPV）的持續(xù)感染［2］。在不同的HPV型別中，HPV16是浸潤性宮頸癌及其癌前病變最常見的型別，大約55%的宮頸癌組織中能檢出 HPV16［3］。大多數(shù)感染HPV16的女性只是一過性的感染，并不會進展為宮頸癌，只有HPV16持續(xù)感染才會發(fā)生宮頸癌，研究表明造成高危型HPV感染及持續(xù)感染的原因之一可能與宿主潛在相關(guān)危險因素暴露有關(guān)［4］。目前，大量研究多是關(guān)于高危型HPV感染高危因素的調(diào)查，對于某一易感型別的危險因素分析資料較少。鑒于高危型HPV感染相關(guān)因素的研究數(shù)據(jù)可能存在多個型別高危因素之間的干擾及地區(qū)的差異，不能確切分析某些高危因素是具體針對哪些型別的感染，缺乏特異性，并不能有效預(yù)防高致癌型別如HPV16、18的感染或持續(xù)感染的發(fā)生，因此本研究通過調(diào)查HPV16在天津市市區(qū)健康普查人群中的感染率，了解天津地區(qū)HPV16感染及其持續(xù)感染的高危因素。

1 對象與方法

1.1 研究對象及納入標準 2013年3—7月對2 000例自愿參加“天津子宮頸癌HPV感染中瑞合作篩查項目”的天津市市區(qū)成年女性進行宮頸癌及HPV相關(guān)情況的問卷調(diào)查，同時收集宮頸脫落細胞進行HPV的檢測。納入研究的女性年齡24～72歲，中位年齡46歲，已婚占93.95%（1 879/2 000），離婚/喪偶/未婚（有性生活史）占6.05%（121/2 000）；漢族人數(shù)占96.50%（1 930/2 000），回族占2.75%（55/2 000），其余少數(shù)名族（包括滿族、朝鮮族、哈尼族、蒙古族、壯族）占0.75% （15/2 000）。入選標準：智力健全，有性生活史，年齡20～75歲，目前未妊娠，無急性生殖道炎癥，無宮頸切除和全子宮切除史，無盆腔放射治療史。受檢時處于非月經(jīng)期，受檢前24 h內(nèi)未發(fā)生性行為，3 d內(nèi)陰道未用藥。本研究被調(diào)查對象均簽署知情同意書。

1.2 方法

1.2.1 主要試劑與儀器 微量樣品基因組DNA提取試劑盒購自北京天根生化科技公司；PCR Master Mix（即dNTP，Taq DNA聚合酶和MgCl2預(yù)混試劑）購自Fermentas公司；PCR所用引物均由上海生工生物有限公司合成；GEL200凝膠成像儀（美國，柯達）；梯度96孔熱循環(huán)儀（美國，ABI）；焦磷酸測序儀及相關(guān)試劑盒（德國，QIAGEN公司）。

1.2.2 DNA的制備 所有標本的基因組DNA均使用微量DNA提取試劑盒從宮頸液基細胞殘留液中提取的，具體操作步驟按試劑盒所提供說明書進行，將提取的基因組DNA放于4℃用于檢測分析。所有提取的DNA樣本均經(jīng)過PCR擴增β-globin基因（內(nèi)參照）驗證模板的質(zhì)量并驗證PCR擴增體系的可行性。

1.2.3 HPV基因擴增 以提取的基因組DNA為模板，用巢式PCR（MY09/11，GP5+/6+）篩選出HPV陽性標本，引物序列見表1。首先用MY09/11通用引物進行擴增，對于MY09/ 11 PCR陽性標本，以MY09/11 PCR擴增產(chǎn)物為模板，再進行GP5+/6+引物PCR。每次PCR均設(shè)立陽性對照和陰性對照。

Tab.1 The sequences of HPV general primers表1 HPV擴增通用引物MY09/11和GP5+/6+序列

1.2.4 焦磷酸測序 HPV陽性標本的PCR擴增產(chǎn)物直接用于焦磷酸測序。首先用BG03檢測焦磷酸測序儀的運行狀態(tài)，狀態(tài)良好開始檢測HPV陽性PCR產(chǎn)物。單鏈序列模板轉(zhuǎn)移到含有測序引物的96孔板中，20種HPV型別在4個不同的序列反應(yīng)中分析。HPV序列用PyroMark Gold Q96試劑在PSQ 96 MA系統(tǒng)中完成，結(jié)果由人工根據(jù)各堿基序列在PSQ 96 MA軟件中分析。

1.2.5 調(diào)查方式 采用調(diào)查問卷的方法對被調(diào)查對象進行資料收集。調(diào)查問卷為自行設(shè)計的“天津子宮頸癌HPV感染篩查調(diào)查問卷”。問卷內(nèi)容包括調(diào)查對象基本情況，月經(jīng)、婚育及性行為史等情況。由專業(yè)人員現(xiàn)場進行一對一詢問，填寫并收集完整的調(diào)查問卷。

1.3 統(tǒng)計學方法 本研究采用SPSS 17.0軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析，組間HPV16感染率的比較采用χ2檢驗，將其中P＜0.05的變量采用多因素非條件Logistic回歸模型進行分析。P＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結(jié)果

2.1 HPV檢測結(jié)果 2 000例篩查標本中，HPV陽性271例（13.55%），其中前3位為HPV16型陽性占39.5%（107/271），HPV58型陽性占 15.13%（41/ 271），HPV18型陽性占9.59%（26/271）。

2.2 不同因素間HPV16型感染情況比較 HPV16感染均發(fā)生在漢族和已婚婦女中。HPV16感染率吸煙者高于不吸煙者，首次性交年齡≤25歲者高于＞25歲者，性伴侶數(shù)≥2者高＜2者，懷孕次數(shù)≥2者高于＜2者，流產(chǎn)次數(shù)≥3者高于＜3者，避孕方式為非避孕套者高于避孕套者（均P＜0.05）；HPV16感染率在不同年齡、飲酒史、教育水平、以前婦科體檢等因素間差異無統(tǒng)計學意義，見表2。

Tab.2 Potential risk factors for HPV16 infection表2 HPV16型感染的相關(guān)因素分析 例（%）

2.3 影響HPV16感染相關(guān)因素的Logistic回歸分析 以是否為HPV感染（是=1，否=0）為因變量，以吸煙史、首次性交年齡≤25歲、性伴侶數(shù)≥2、懷孕次數(shù)≥2、流產(chǎn)次數(shù)≥3和避孕方式為避孕套（以上均賦值是=1，否=0）為自變量，進行多因素非條件Logistic逐步回歸模型分析，納入標準為P＜0.05，排除標準為P≥0.05，結(jié)果顯示，吸煙史和首次性交年齡≤25歲為HPV16感染的獨立危險因素，見表3。

Tab.3 Logistic regression analysis of risk factors for HPV16 infection表3 HPV16感染相關(guān)因素的Logistic回歸分析

3 討論

研究表明大部分的性活躍女性感染過HPV16［5］，僅有一小部分HPV16感染者會發(fā)展成持續(xù)感染，繼而發(fā)生宮頸癌，提示HPV16的感染及持續(xù)性感染是多種因素相互作用的結(jié)果。雖然針對HPV16感染的多價預(yù)防性疫苗已經(jīng)問世，但是由于經(jīng)濟和疫苗不良反應(yīng)等多因素影響，目前中國大陸地區(qū)并沒有投入使用，而且這些疫苗對于已感染HPV16的女性沒有清除作用，亦不能阻斷HPV16的持續(xù)感染，故僅僅依靠目前研發(fā)的預(yù)防性疫苗降低宮頸癌的患病率預(yù)計耗時較長，因此，了解HPV16感染的高危因素并將干預(yù)措施普及化，從婦女自身主觀方面預(yù)防其感染，可以達到降低宮頸癌發(fā)生的預(yù)期效果。

有流行病學研究表明，不同地區(qū)、人群HPV感染基因型的分布存在差異［6-7］，本研究結(jié)果顯示，天津市市區(qū)以HPV16型感染最常見，其感染率為5.35% （107/2 000），HPV16型感染率的地區(qū)差異，考慮與地域、經(jīng)濟文化、工作性質(zhì)等多因素有關(guān)。有研究顯示70%的宮頸癌患者合并HPV16或18型感染，其中宮頸鱗癌多伴有HPV16型感染［8］，且宮頸鱗癌是子宮頸癌最常見的組織學類型，提示預(yù)防HPV16型感染，可以有效降低宮頸鱗癌的發(fā)生率。

本研究中雖然不同年齡間HPV16感染率差異無統(tǒng)計學意義，但20～30歲年齡組HPV16感染率在數(shù)值上最高，提示年輕女性易感染HPV16，與Baan?drup等［9］研究結(jié)果基本一致，這可能與該階段女性處于性行為活躍期有關(guān)，年輕女性HPV16的易感也可能是宮頸癌年輕化的部分原因。另外，本研究結(jié)果顯示，吸煙史、首次性交年齡、性伴侶數(shù)、懷孕次數(shù)、流產(chǎn)數(shù)及避孕方式與HPV16感染有關(guān)。吸煙和首次性交年齡≤25歲是HPV16感染的獨立危險因素，與Vinodhini等［10］調(diào)查結(jié)果一致，但是性伴侶數(shù)并不是HPV16感染的危險因素，與國內(nèi)其他多個地區(qū)研究結(jié)果并不相符［11］，可能與本研究僅分析HPV16單一型別感染因素有關(guān)。本研究中有吸煙史者發(fā)生HPV16感染的風險是無吸煙史者的1.965倍，可能與香煙煙霧中可溶性的致癌物質(zhì)如尼古丁、可替寧等可直接作用于宮頸上皮細胞，從而影響宮頸上皮化生，損傷宮頸上皮細胞相關(guān)［10，12］，且香煙煙霧中的有害物質(zhì)還可以改變宮頸上皮細胞內(nèi)朗罕氏細胞、T淋巴細胞及免疫調(diào)節(jié)劑的密度，從而影響機體的體液和細胞免疫反應(yīng)，增加HPV16感染的敏感性，使宮頸上皮易發(fā)生HPV16持續(xù)感染［12］。

由于25歲以下女性宮頸癌發(fā)生率及因?qū)m頸癌造成的死亡率非常低，且有較高的假陽性篩查結(jié)果，此年齡段參與宮頸癌HPV篩查弊大于利，推薦25歲之前主要以細胞學篩查為主，HPV篩查應(yīng)從25歲以后開始［13］。本研究為調(diào)查所有年齡人群HPV16的分布情況，對25歲之前有性生活的年輕女性也進行了HPV篩查，發(fā)現(xiàn)首次性交年齡≤25歲的女性HPV16感染的風險較高，其原因可能是年輕女性子宮頸生理不成熟，宮頸陰道部的移行帶擴大易造成上皮輕微損傷、無周期性孕激素分泌等生理特點，為HPV16侵入宮頸及駐留提供有利條件，易造成HPV16感染及持續(xù)感染。且首次性交年齡較小的女性，因缺乏對HPV的認識，不了解怎樣預(yù)防性傳播疾病尤其是HPV感染，也可能會從對方感染HPV16。Giuliano等［14］研究顯示，每年約6%的男性感染HPV16型，且男性不具備通過自身免疫清除病毒的能力，這也可能是年輕女性HPV16易感的因素之一。對于已感染HPV16的女性，應(yīng)盡可能避免暴露于高危因素，從而阻止HPV16的持續(xù)感染或再感染。

人群篩查和宮頸癌的早期發(fā)現(xiàn)、早期治療是降低子宮頸癌發(fā)病率和死亡率最有效的方法，盡管宮頸癌的篩查可以降低宮頸癌發(fā)生的危險，卻不能避免HPV16的感染，不能從病因上減少宮頸癌的發(fā)生。因此，避免高危因素的暴露，制止女性過早發(fā)生性行為，同時改變不良生活習慣是預(yù)防HPV16感染及降低宮頸癌發(fā)生的有效措施。

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（2014-07-24收稿 2014-12-18修回）

（本文編輯 陳麗潔）

Incidence and risk factors of human papilloma virus type 16 infection

DUAN Meng1，2，CHEN Xiujie1，QU Pengpeng2△
1 Tianjin Medical University，Tianjin 300070，China；2 Tianjin Central Hospital of Gynecology Obstetrics
△Corresponding Author E-mail：qu.pengpeng@hotmail.com

Objective To investigate the incidence and risk factors of human papillomavirus type 16（HPV16）infec?tion among women through health screenings in Tianjin urban area.Methods A total of 2 000 women from Tianjin urban area were recruited for this study，and potential risk factors were investigated by questionnaire as well as by collecting cervi?cal exfoliated cells from the participants.HPV type was examined using polymerase chain reaction and pyrosequencing tech?nology，then the risk factors of HPV16 infection were examined by chi square test and the multiple factor logistic regression analysis.Results Among those 2 000 women who received health screenings，a total of 271 cases were HPV positive （13.55%）.HPV16 accounts for the most common human papillomavirus types（39.5%，107/271）while HPV58 account for 15.13%（41/271）and HPV18 account for 9.59% （26/271）.Factors related to HPV16 infection were investigated include smoking history，initial age of sex（＞25 years old or not），number of pregnancies（≥2 or not），number of sexual partners（≥2 or not）and contraception measures（condom or other ways）with χ2=6.268，8.540，4.951，7.123，6.053，5.019，respectively.（P＜0.05）.Age，alcohol intake，education level and previous gynecologial examination did not differ significantly among HPV16 positive patients compared to those with negative HPV.Multiple factor Logistic regression model analysis showed that the independent factors were smoking history and initial age for sex（≤25 years old）（P＜0.05）.Conclusion HPV16 is the most common type of cervical infection among women in Tianjin urban area.Changing inappropriate sexual behavior and smoking cessation are effective measures to prevent HPV16 infection and reduce incidence of cervical cancer.

human papillomavirus 16；infection；uterine cervical neoplasms；questionnaires；risk factors；pyrosequencing

R711.32，R737.33

A

10.11958/j.issn.0253-9896.2015.04.012

天津市科技計劃（09ZCZDSF0390）

1天津醫(yī)科大學（郵編300070）；2天津市中心婦產(chǎn)科醫(yī)院

作者信息：段蒙（1989），女，碩士在讀，主要從事婦科腫瘤研究

△E-mail:qu.pengpeng@hotmail.com