酒精依賴對地西泮抗驚厥作用的影響

湯潔，王朵朵，馬焦，鳳雅薇，樓鵬，張心宇，徐佳晨，高洋洋，武靜茹

酒精依賴對地西泮抗驚厥作用的影響

湯潔1，王朵朵1，馬焦1，鳳雅薇1，樓鵬1，張心宇1，徐佳晨1，高洋洋1，武靜茹2△

目的 研究酒精依賴對地西泮抗驚厥作用的影響。方法 成年昆明種小鼠36只，均分為酒精依賴組（A組）、地西泮組（D組）和生理鹽水組（N組）。A組用含0.8%乙醇的生理鹽水進(jìn)行腹腔注射，其他2組注射生理鹽水，每天上、下午各1次，0.2 mL/次，注射7 d。檢測小鼠7 d的自主活動情況。7 d后行電驚厥實驗，A組和D組腹腔注射0.05%地西泮溶液0.05 mL/10 g，N組注射等體積生理鹽水，給藥前及給藥后15、30、60 min分別測量3組小鼠驚厥閾值。結(jié)果 第2～6天，A組小鼠自主活動計數(shù)小于其他2組（P＜0.05），第1和7天，3組小鼠自主活動計數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義。給藥前，A組驚厥閾值高于D組和N組（P＜0.05）；給藥后，N組驚厥閾值與給藥前相比差異無統(tǒng)計學(xué)意義；給藥后15 min，D組驚厥閾值高于A組和N組，A組閾值高于N組（P＜0.05）；給藥后30 min、60 min，A組和D組驚厥閾值均高于N組（P＜0.05），A組和D組驚厥閾值差異無統(tǒng)計學(xué)意義。結(jié)論 酒精依賴有抗驚厥的作用；酒精依賴會使地西泮的抗驚厥作用減弱。

酒精依賴；地西泮；抗驚厥；電刺激；γ-氨基丁酸

酒精是全球范圍內(nèi)應(yīng)用最為廣泛的濫用物質(zhì)。由于酒精濫用、酒精中毒導(dǎo)致的心理、軀體上的疾病已成為全世界關(guān)注的健康問題。長期飲酒會對機(jī)體產(chǎn)生影響，甚至?xí)a(chǎn)生酒精依賴。酒精依賴是反復(fù)飲酒引起的一種特殊心理狀態(tài)，表現(xiàn)為對酒的渴求和經(jīng)常需要飲酒的強(qiáng)迫性體驗，它貫穿整個依賴過程，其特點(diǎn)是戒斷綜合征、復(fù)發(fā)性和耐受性。有研究表明，酒精依賴的產(chǎn)生機(jī)制是由特定的γ-氨基丁酸（GABA）A型受體（GABAA受體）亞單位介導(dǎo)的，并且能夠影響其他GABAA受體亞單位，使其對一定劑量的酒精敏感。此外酒精還可以通過細(xì)胞內(nèi)信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑影響GABA在大腦不同區(qū)域的表達(dá)［1-3］。臨床常用抗驚厥藥物地西泮（diazepam，安定）能增強(qiáng)GABA的神經(jīng)傳遞功能和突觸抑制效應(yīng)，并且促進(jìn)GABA與GABAA受體的結(jié)合［4］。酒精依賴會影響GABA和GABAA受體亞單位，但是否會影響地西泮的抗驚厥作用進(jìn)而影響其抗驚厥的治療，目前鮮見報道。本實驗通過建立酒精依賴小鼠模型，再行電驚厥實驗，研究酒精依賴對地西泮抗驚厥作用的影響，以期為臨床用藥提供實驗依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實驗動物及分組 成年昆明種清潔級小鼠36只，雌雄不限，體質(zhì)量（20±2）g，由徐州醫(yī)學(xué)院實驗動物中心提供，實驗期間小鼠自由攝食飲水。采用隨機(jī)數(shù)字表法將36只小鼠隨機(jī)分為3組：酒精依賴組（A組）、地西泮組（D組）和生理鹽水組（N組），每組12只。

1.2 實驗藥品及儀器 地西泮注射液（濟(jì)川藥業(yè)集團(tuán)股份有限公司，批號：1402012）；無水乙醇（天津市永大化學(xué)試劑有限公司，批號：20140220）。BL-420E+生物功能實驗系統(tǒng)（成都泰盟科技有限公司），YLS-1A多功能小鼠自主活動記錄儀（山東省醫(yī)學(xué)科學(xué)院設(shè)備站）。

1.3 實驗方法

1.3.1 建立酒精依賴模型 將小鼠飼養(yǎng)于安靜的籠子里，自然光照，室溫控制在18～24℃。參照文獻(xiàn)［5］中的方法將A組小鼠用含0.8%乙醇的生理鹽水注射液進(jìn)行腹腔注射，D組和N組小鼠則注射生理鹽水，每天上午、下午各注射1次，0.2 mL/次，共注射7 d。每天下午注射完畢15 min后，將3組小鼠逐只放入YLS-1A多功能小鼠自主活動記錄儀中，記錄小鼠5 min的自主活動計數(shù)，并記錄小鼠的體質(zhì)量。

1.3.2 電驚厥實驗［6-7］A組和D組小鼠腹腔注射0.05%地西泮溶液0.05 mL/10 g，N組注射等體積生理鹽水。將BL-420E+生物功能實驗系統(tǒng)連接完畢，驚厥與痛覺實驗交流電刺激器輸出線的2個鱷魚夾尖端用生理鹽水浸濕，夾住小鼠雙耳部（每次所夾部位大致相同）。輸出電壓調(diào)至30 V，刺激時間設(shè)為0.5 s，刺激周期設(shè)為單周期。啟動電刺激輸出觀察小鼠是否發(fā)生驚厥，小鼠的驚厥發(fā)生過程：僵直屈曲期→后肢伸直期→陣攣期→恢復(fù)期，以后肢強(qiáng)直作為驚厥的指標(biāo)。刺激后，若小鼠沒有產(chǎn)生后肢強(qiáng)直驚厥，則適當(dāng)調(diào)大輸出電壓繼續(xù)刺激，直至產(chǎn)生后肢強(qiáng)直驚厥，記錄實驗電壓參數(shù)作為小鼠的驚厥閾值。給藥前及給藥后15、30、60 min測量3組小鼠驚厥閾值。對每只小鼠給藥前的驚厥閾值各測2次，每次間隔10 min，取其平均值。

1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 13.0統(tǒng)計軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計量資料以±s表示，組間比較采用單因素方差分析和q檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 酒精依賴模型建立結(jié)果 第2～6天，A組小鼠自主活動計數(shù)小于其他2組（P＜0.05），第1和7天，3組小鼠自主活動計數(shù)差異無統(tǒng)計學(xué)意義（P＞0.05），見表1。

2.2 電驚厥實驗結(jié)果 給藥前，A組驚厥閾值高于D組和N組（P＜0.05）；給藥后15 min，D組驚厥閾值高于A組和N組，A組閾值高于N組（P＜0.05）；給藥后30 min、60 min，A組和D組驚厥閾值均高于N組（P＜0.05），A組和D組驚厥閾值差異無統(tǒng)計學(xué)意義。組內(nèi)比較：N組給藥前后的驚厥閾值差異無統(tǒng)計學(xué)意義；D組給藥后15～60 min的驚厥閾值均高于給藥前，給藥后30～60 min的驚厥閾值低于給藥后15 min，而30 min與60 min無明顯差異（P＞0.05）；A組給藥后15～30 min的驚厥閾值均高于給藥前，給藥后60 min的驚厥閾值低于給藥后15～30 min，而15 min與30 min無明顯差異（P＞0.05），見表2。

Tab.1 Comparison of mice's independent activity counts in each day between different groups表1 3組小鼠的自主活動計數(shù)比較（n=12，次，±s）

Tab.1 Comparison of mice's independent activity counts in each day between different groups表1 3組小鼠的自主活動計數(shù)比較（n=12，次，±s）

＊P＜0.05，＊＊P＜0.01；a與N組比較，b與D組比較，P＜0.05

組別N組D組A組F 第1天169.9±36.5 170.3±38.2 172.1±22.4 0.015 第2天174.9±39.3 172.5±40.9 132.5±20.0ab5.654＊＊第3天175.5±29.2 177.5±31.0 115.0±19.6ab20.625＊＊組別N組D組A組F 第4天169.8±31.1 174.3±23.5 91.1±21.2ab40.062＊＊第5天168.3±35.8 166.5±25.8 118.9±18.1ab12.373＊＊第6天173.0±34.2 165.1±31.6 137.1±22.0ab4.836＊第7天168.5±27.8 171.3±26.3 170.5±24.8 0.035

Tab.2 Changes of convulsion threshold among the three groups of mice at various time points according to drug administration表2 3組小鼠在給藥前后不同時點(diǎn)電驚厥閾值的變化（n=12，V，±s）

Tab.2 Changes of convulsion threshold among the three groups of mice at various time points according to drug administration表2 3組小鼠在給藥前后不同時點(diǎn)電驚厥閾值的變化（n=12，V，±s）

＊＊P＜0.01；a與N組比較，b與D組比較，P＜0.05；#與給藥前比較，※與給藥后15 min比較，☆與給藥后30 min比較，P＜0.05

組別N組D組A組F給藥前45.3±6.7 43.4±3.1 58.5±7.5ab22.421＊＊給藥后15 min 46.2±5.8 85.0±6.3a#78.3±7.4ab#123.444＊＊給藥后30 min 46.5±7.1 72.3±8.4a#※73.6±10.3a#36.994＊＊給藥后60 min 43.8±6.5 66.0±8.7a#※65.0±8.5a※☆29.787＊＊F 0.373 74.912＊＊12.847＊＊

3 討論

驚厥是中樞神經(jīng)過度興奮的一種癥狀，表現(xiàn)為全身骨骼肌不自主的強(qiáng)烈收縮，多見于小兒高熱、子癇、破傷風(fēng)、癲癇大發(fā)作和中樞興奮藥中毒等。在臨床麻醉過程中，局麻藥誤入血管內(nèi)或單位時間內(nèi)吸收入血的局麻藥劑量過大，使血液中局麻藥濃度過高，引起毒性反應(yīng)，可產(chǎn)生中樞神經(jīng)系統(tǒng)毒性驚厥，是臨床上常見的并發(fā)癥，嚴(yán)重威脅著患者的生命。這是由于中樞抑制性神經(jīng)元對局麻藥較中樞興奮性神經(jīng)元更敏感，首先被局麻藥所抑制，因此引起脫抑制而出現(xiàn)興奮現(xiàn)象［8］。驚厥的類型多種多樣，一般分為強(qiáng)直型、陣攣型、跑跳型等。為便于統(tǒng)計比較，本實驗以藥物能否對抗強(qiáng)直型驚厥為指標(biāo)［9］。

慢性攝入酒精可使動機(jī)行為發(fā)生適應(yīng)性變化，隨著攝入時間的增加，酒精對自主行為的抑制作用逐漸減弱，表明長期攝入酒精后機(jī)體對酒精出現(xiàn)適應(yīng)的現(xiàn)象，反映了酒精依賴的表現(xiàn)之一——對酒精的耐受性［13］。動物的自主活動情況反映其中樞神經(jīng)系統(tǒng)的功能狀態(tài)，興奮時活動次數(shù)增加，抑制時活動次數(shù)減少，所以小鼠自主活動實驗是評價中樞神經(jīng)系統(tǒng)興奮狀態(tài)的一項重要指標(biāo)［14］。本實驗采用寧玲玲等［5］的酒精依賴小鼠建模方法，并通過用觀察小鼠自主活動來驗證建模成功與否，結(jié)果與預(yù)計一致，也與Harkany等［15］報道的慢性消耗酒精抑制動物動機(jī)行為，隨著應(yīng)用酒精時間的延長，從而出現(xiàn)適應(yīng)的現(xiàn)象一致。

電驚厥實驗結(jié)果顯示，酒精依賴的小鼠給藥前閾值高于其他組小鼠，說明酒精依賴對小鼠有抗驚厥作用，可能與酒精對GABAA受體的直接或間接作用，以及影響GABA在大腦的表達(dá)，促進(jìn)其合成和釋放有關(guān)。酒精可以增加GABA能的神經(jīng)活性物質(zhì)合成，引起突觸外GABA的釋放增加，從而增強(qiáng)GABA與GABAA受體相結(jié)合的作用，產(chǎn)生一定的抗驚厥效果［1-3］。

驚厥閾值可以反映機(jī)體抗驚厥的能力。地西泮給藥使得給藥后酒精依賴組和地西泮組小鼠的驚厥閾值始終大于生理鹽水組，說明地西泮有抗驚厥作用。給藥前，酒精依賴組小鼠驚厥閾值高于地西泮組，說明酒精依賴已對小鼠有一定的抗驚厥作用，給藥后，受到了地西泮抗驚厥的作用，酒精依賴組的驚厥閾值反而低于地西泮組，說明酒精依賴使得地西泮的抗驚厥作用減弱。酒精依賴減弱地西泮抗驚厥作用的機(jī)制，可能與酒精依賴影響GABA和GABAA受體亞單位有關(guān)。許多酒精引起的行為變化，與GABAA受體激動劑的作用重疊，并通過GABAA受體修飾進(jìn)行改變。有報道顯示乙醇與BZ有相同的GABAA受體結(jié)合位點(diǎn)，由于酒精依賴后，一部分GABAA受體已被占用，當(dāng)給予地西泮時，乙醇與地西泮競爭結(jié)合位點(diǎn)，地西泮與GABAA受體α亞單位上的苯二氮受體結(jié)合減少，從而使GABA與GABAA受體結(jié)合減少，抗驚厥作用減弱［1-4］。但從結(jié)果上看，酒精依賴對地西泮抗驚厥作用的影響具有時效性，30 min和60 min時，酒精依賴組和地西泮組的驚厥閾值無明顯差異，其機(jī)制可能是隨著時間的推移，與GABAA受體結(jié)合的乙醇逐漸被地西泮所取代，一段時間后，地西泮與GABAA受體已結(jié)合完全，酒精不再影響其抗驚厥的效果，但具體的作用機(jī)制還有待于進(jìn)一步研究。

綜上，酒精依賴存在一定的抗驚厥作用，且會使地西泮的抗驚厥作用減弱。當(dāng)臨床上患者出現(xiàn)驚厥癥狀時，應(yīng)仔細(xì)詢問其是否有醉酒、酗酒史，對酒精依賴的患者，若采用地西泮抗驚厥，可酌情增大藥物劑量。

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（2014-10-10收稿 2014-11-27修回）

（本文編輯 閆娟）

Impacts of alcohol dependence on the anticonvulsant effect of diazepam

TANG Jie1，WANG Duoduo1，MA Jiao1，F(xiàn)ENG Yawei1，LOU Peng1，ZHANG Xinyu1，XU Jiachen1，GAO Yangyang1，WU Jingru2△
1 Class 2，Grade 2011，School of Anesthesia，Xuzhou Medical College，Jiangsu 221000，China；2 Teaching and Research Section of Anesthesia Physiology，Xuzhou Medical College
△Corresponding Author E-mail：wujingr5810@sina.com

Objective To study the impacts of alcohol dependence on the anticonvulsant effect of diazepam.Meth?ods Kunming mice（n=36）were divided into 3 groups（n=12 in each group），Alcohol Dependence Group（A group），Diaze?pam Group（D group）and Normal Saline Group（N group）.A group received an intraperitoneal injection with a 0.2 mL dose of 0.8% alcohol in NS（normal saline），while both D and N group received an injection with a 0.2 mL dose of NS without alco?hol，twice a day.Mice's autonomic activities were monitored every day.After 7 days，the electroconvulsive experiment was performed.Both A and D group were given a weight-based dose of 0.05 mL/10 g of 0.05%diazepam via intraperitoneal injec?tion，while N group was given a 0.05 mL/10 g dose of NS.Before administration and after 15，30，60 min of administration，the convulsion threshold of each group was measured.Results The count of autonomic activity of mice in A group was less than that of mice in D and N group during the 2nd day to 6th day（P＜0.05）.On the 1st and 7th day，the difference of the count of autonomic activity of mice between A group and the other two groups was not statistically significant（P＞0.05）.The convulsion threshold of mice in A group was higher than that of mice in D and N group before administration（P＜0.05）.Af?ter administration，the convulsion threshold of mice in N group didn't show statistically significant difference from that of mice before administration（P＞0.05）.After 15 min of administration，the convulsion threshold of mice in D group was high?er than that of mice in A and N group（P＜0.05），while the convulsion threshold of mice in A group was higher than that of mice in N group（P＜0.05）.After 30 min and 60 min of administration，both the convulsion thresholds of mice in A and D group were higher than that of mice in N group（P＜0.05）.However，at this point，the difference of the convulsion thresholds of mice between A and D group was not statistically significant（P＞0.05）.Conclusion Alcohol dependence has anticon?vulsant effect.Alcohol dependence weakens the anticonvulsant effect of diazepam.

alcohol dependence；diazepam；anticonvulsant action；electric stimulation；gamma-aminobutyric acid

R338.8，R741.05，R969.2，R971+.6

A

10.11958/j.issn.0253-9896.2015.04.007

國家自然科學(xué)基金青年基金項目（81200861）；徐州市科技計劃項目（KC14SH075）；地方高校國家級大學(xué)生創(chuàng)新創(chuàng)業(yè)訓(xùn)練計劃項目（201310313013）

1徐州醫(yī)學(xué)院麻醉學(xué)院2011級2班（郵編221000）；2徐州醫(yī)學(xué)院麻醉生理學(xué)教研室

湯潔（1993），女，本科在讀，主要從事神經(jīng)生理研究

△E-mail：wujingr5810@sina.com