青蒿琥酯對糖尿病腎病大鼠腎組織Toll樣受體4及白細(xì)胞介素-8表達(dá)的影響

聶寒，蘇珂，龍艷，蔣姍姍，孫清

青蒿琥酯對糖尿病腎病大鼠腎組織Toll樣受體4及白細(xì)胞介素-8表達(dá)的影響

聶寒，蘇珂△，龍艷△，蔣姍姍，孫清

目的 觀察青蒿琥酯對糖尿病腎病（DN）大鼠模型腎組織Toll樣受體（TLR）4、白細(xì)胞介素（IL）-8表達(dá)的影響。方法 健康雄性SD大鼠（體質(zhì)量＞200 g）采用高糖高脂聯(lián)合腹腔注射30 mg/kg鏈脲佐菌素（STZ）法建立糖尿病腎病模型。將32只造模成功大鼠隨機(jī)分為B、C、D、E組，另擇8只健康雄性SD大鼠（體質(zhì)量≤200 g）為A組，A、B組給予10 mg/（kg·d）生理鹽水；C、D組分別給予30 mg/（kg·d）、10 mg/（kg·d）青蒿琥酯；E組給予10 mg/（kg·d）依那普利。灌胃給藥12周后，觀察大鼠24 h尿蛋白定量、血肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）、空腹血糖、體質(zhì)量、腎臟肥大指數(shù)（KI）的變化；Western blot法檢測腎組織TLR4蛋白的表達(dá)；ELISA法檢測血清及腎組織IL-8的水平。結(jié)果 B、C、D、E組空腹血糖、KI均明顯高于A組，體質(zhì)量明顯低于A組；B、C、D、E組24 h尿蛋白、Cr、BUN、腎組織TLR4蛋白表達(dá)、血清及腎組織IL-8水平均高于A組，C、D、E組均低于B組，D組高于C組和E組（均P＜0.05）。TLR4蛋白與血清IL-8（r=0.969）、腎組織IL-8（r=0.972）、Cr（r=0.944）、BUN（r=0.903）、24 h尿蛋白（r=0.965）均呈正相關(guān)（均P＜0.05），腎組織IL-8與Cr（r=0.929）、BUN（r=0.940）、24 h尿蛋白（r=0.962）均呈正相關(guān)（均P＜0.05）。結(jié)論 青蒿琥酯可能通過下調(diào)腎組織TLR4蛋白的表達(dá)，減少炎性因子IL-8的釋放，減輕DN的炎癥反應(yīng)，一定程度上緩解DN的發(fā)展。

青蒿素；糖尿病腎?。籘oll樣受體4；白細(xì)胞介素8；炎癥反應(yīng)；青蒿琥酯

糖尿病腎病（DN）作為糖尿病的全身微血管并發(fā)癥之一，具有較高的致死、致殘率，其發(fā)病機(jī)制復(fù)雜多樣。近年有許多學(xué)者提出機(jī)體內(nèi)持續(xù)性慢性低度炎癥狀態(tài)參與DN［1］，其可能機(jī)制之一免疫炎癥反應(yīng)已得到廣泛的認(rèn)可。作為介導(dǎo)免疫炎癥反應(yīng)關(guān)鍵步驟的Toll樣受體（TLR） 4及炎癥因子白細(xì)胞介素（IL）-8被認(rèn)為在DN的免疫炎癥機(jī)制中起著關(guān)鍵性的作用，并隨著DN病程進(jìn)展，其濃度逐漸上升［2］。青蒿琥酯是青蒿素的一種半合成衍生物，具有抗瘧、抑制細(xì)胞增生、免疫調(diào)節(jié)、抗血管增生等作用［3］，本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)其還具有免疫炎癥抑制作用，可能有助于DN的治療［4］。有研究顯示青蒿琥酯可減少哮喘氣道平滑?。?］、腎間質(zhì)［6］中TLR4、IL-8的表達(dá)，減輕其介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)，但有關(guān)青蒿琥酯對DN腎組織中TLR4、IL-8表達(dá)影響的研究尚少見。本研究旨在通過檢測TLR4、IL-8在DN大鼠中的表達(dá)，探討青蒿琥酯對DN炎癥損傷的作用，為臨床治療DN提供新的思路及方法。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物 健康6～8周齡雄性SPF級SD大鼠45只，體質(zhì)量180～220 g，購自湖南斯萊克景達(dá)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物有限公司。

1.1.2 藥品及主要試劑 鏈脲佐菌素（STZ，美國Sigma公司），青蒿琥酯（桂林南藥股份有限公司），馬來酸依那普利（揚(yáng)子江藥業(yè)集團(tuán)），大鼠血肌酐（Cr）、尿素氮（BUN）檢測試劑盒（南京建成生物工程研究所），大鼠IL-8酶聯(lián)免疫吸附（ELISA）試劑盒（上?？泼羯镉邢薰荆每勾笫骉LR4多克隆抗體（美國Abcam公司），辣根過氧化物酶（HRP）標(biāo)記山羊抗兔IgG（北京中杉金橋生物技術(shù)有限公司），硝酸纖維素膜（美國Amersham公司），ECL發(fā)光試劑（Pierce公司）。

1.2 方法

1.2.1 制備模型 大鼠適應(yīng)性飼養(yǎng)1周，喂養(yǎng)期間每周測量大鼠體質(zhì)量，1周后按體質(zhì)量分為正常對照組（A組，≤200 g，n=8）和高糖高脂組（＞200 g，n=37）。正常對照組以普通飼料喂養(yǎng)，高糖高脂組大鼠以高糖高脂飼料喂養(yǎng)，飼料配方按照文獻(xiàn)［7］的方法。6周后禁食12 h，腹腔注射STZ 30 mg/kg（使用前溶于0.1 mmol/L、pH 4.2～4.5無菌檸檬酸鈉緩沖液）復(fù)制2型糖尿病模型，以連續(xù)3次測隨機(jī)血糖大于16.7 mmol/L視為2型糖尿病模型成功。符合2型糖尿病模型的大鼠繼續(xù)喂養(yǎng)4周后，測定尿量大于原尿量50%、尿蛋白排泄率大于30 mg/24 h視為2型糖尿病腎病模型制備成功。3只未成模大鼠于1周后再次注射STZ仍未成模，2只大鼠死亡，余32只大鼠均成模。

1.2.2 分組及給藥 將32只成模大鼠采用隨機(jī)數(shù)字表法分為模型對照組（B組）、青蒿琥酯大劑量組（C組）、青蒿琥酯小劑量組（D組）、依那普利組（E組），每組8只。其中C組和D組分別給予30 mg/（kg·d）、10 mg/（kg·d）青蒿琥酯；E組依據(jù)臨床上常規(guī)用量，并通過人與大鼠的體表面積換算給予10 mg/（kg·d）依那普利；A、B組給予10 mg/（kg·d）生理鹽水。均灌胃給藥12周，實(shí)驗(yàn)過程中不用胰島素。

1.2.3 標(biāo)本收集 于12周末，用代謝籠收集24 h尿量，并迅速送至我院檢驗(yàn)科測定24 h尿蛋白。所有大鼠禁食不禁水12 h后，測量空腹血糖及體質(zhì)量。腹腔注射10%水合氯醛（0.3 mL/100 g）麻醉后從心臟采血4～5 mL，室溫下靜置1 h后以3 000 r/min 4℃離心10 min，取上層血清，-80℃冰箱保存。放血處死大鼠后立即剖腹游離出腎臟，取左腎，濾紙吸干血跡后用電子天平稱腎濕質(zhì)量，計(jì)算腎臟肥大指數(shù)（KI）=腎濕質(zhì)量/體質(zhì)量，余腎組織置于冰上剪碎后放至凍存管中，-80℃冰箱保存。

1.2.4 Western blot法測定TLR4蛋白的表達(dá) 將取出的組織塊稱質(zhì)量后，在液氮中研磨成粉末狀加入裂解液使其溶解，4℃12 000 r/min離心15 min，取上清，用Bradford比色法測定總蛋白濃度。蛋白稀釋后沸水浴中3 min后上樣，經(jīng)10%的SDS-PAGE電泳1 h后，轉(zhuǎn)膜至硝酸纖維素膜上；5%脫脂奶粉室溫下封閉1 h，洗去封存液后加入一抗（兔抗大鼠TLR4多克隆抗體1∶200），4℃孵育過夜；洗膜3次，每次10 min，后加入HRP標(biāo)記的二抗（1∶2 000），室溫下孵育1 h：洗膜3次，每次10 min；后用ECL發(fā)光試劑發(fā)光，膠片曝光，顯影，定影。用圖像分析軟件進(jìn)行灰度值測定，以TLR4灰度值與內(nèi)參β-actin灰度值的比值作為TLR4蛋白表達(dá)的相對水平。

1.2.5 ELISA法測定IL-8的水平 嚴(yán)格按照購買的試劑盒說明書進(jìn)行操作，相同標(biāo)本設(shè)2個(gè)復(fù)孔，重復(fù)2次，在酶標(biāo)儀上于450 nm波長處測定吸光度（OD）值，根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線及OD值計(jì)算各個(gè)標(biāo)本的濃度。

1.2.6 其他指標(biāo) 采用苦味酸比色法測定Cr水平，脲酶法測量BUN水平，全自動(dòng)生化儀檢測24 h尿蛋白。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 16.0軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，計(jì)量資料采用±s表示，各組間比較采用單因素方差分析，組間多重比較采用LSD-t法，相關(guān)分析行Pearson積差相關(guān)，P＜ 0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組大鼠空腹血糖、體質(zhì)量及KI的比較 B、 C、D、E組空腹血糖明顯高于A組（P＜ 0.05），B、C、 D、E組間空腹血糖差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；B、C、D、E組體質(zhì)量明顯低于A組，C、D、E組體質(zhì)量高于B組（P＜ 0.05）；B、C、D、E組KI高于A組，C、D、E組KI低于B組（P＜0.05），見表1。

Tab.1 Comparison of fasting glucose，body weight and Kidney Index among different rat groups表1 各組大鼠空腹血糖、體質(zhì)量及KI的比較（n=8，±s）

＊＊P＜0.01，a與A組比較，b與B組比較，P＜0.05

組別A組B組C組D組E組F空腹血糖（mmol/L）4.618±0.859 24.875±0.872a24.754±0.822a25.675±0.964a24.808±0.844a130.719＊＊體質(zhì)量（g）491.713±12.791 329.725±5.640a362.532±1.743ab347.811±10.416ab331.654±6.781ab891.765＊＊KI（g/kg）3.324±0.219 6.794±0.421a4.837±1.011ab5.971±0.832ab4.611±0.794ab108.473＊＊

2.2 各組大鼠24 h尿蛋白、Cr及BUN的比較 B、C、D、E組24 h尿蛋白、Cr和BUN水平均高于A組，C、D、E組均低于B組，D組高于C組和E組（均P＜0.05），E組與C組差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，見表2。

Tab.2 Comparison of twenty-four hours urine protein，serum creatinine and Urea nitrogen of rats in each group at 12 weeks after completion of the experiment表2 實(shí)驗(yàn)12周后各組大鼠24 h尿蛋白定量、Cr、BUN水平的比較 （n=8，±s）

Tab.2 Comparison of twenty-four hours urine protein，serum creatinine and Urea nitrogen of rats in each group at 12 weeks after completion of the experiment表2 實(shí)驗(yàn)12周后各組大鼠24 h尿蛋白定量、Cr、BUN水平的比較 （n=8，±s）

＊＊P＜0.01，a與A組比較，b與B組比較，c與C組比較，d與D組比較，P＜0.05；表3同

BUN（mmol/L）9.145±0.521 29.242±0.705a11.602±0.624ab18.807±0.624abc10.591±1.075abd1 280.110＊＊組別A組B組C組D組E組F 24 h尿蛋白（mg）18.141±0.702 68.713±1.433a31.332±4.220ab53.067±3.282abc32.781±3.632abd256.732＊＊Cr（μmol/L）23.451±1.460 63.462±4.401a30.471±1.144ab50.491±0.887abc31.515±0.672abd102.117＊＊

2.3 各組大鼠TLR4蛋白表達(dá)及IL-8水平的比較 B、C、D、E組腎組織TLR4蛋白的表達(dá)、血清及腎組織IL-8水平均高于A組，C、D、E組均低于B組，D組高于C組和E組，E組高于C組（均P＜0.05），見表3、圖1。

Tab.3 Comparison expression levels of TLR4 and IL-8 of rats in each group表3 各組大鼠TLR4蛋白、IL-8水平的比較（n=8，±s）

Tab.3 Comparison expression levels of TLR4 and IL-8 of rats in each group表3 各組大鼠TLR4蛋白、IL-8水平的比較（n=8，±s）

組別A組B組C組D組E組F腎組織TLR4蛋白0.243±0.004 0.678±0.005a0.424±0.004ab0.612±0.002abc0.522±0.003abcd128.011＊＊血清IL-8（ng/L）4.479±0.311 14.673±0.115a8.527±0.228ab11.298±0.163abc10.149±0.073abcd361.616＊＊腎組織IL-8（ng/L）5.112±0.210 12.737±1.237a7.211±0.769ab11.301±1.211abc9.149±0.073abcd96.745＊＊

Fig.1 Comparison of TLR4 expression level in the renal tissue of rats圖1 各組大鼠腎組織TLR4蛋白表達(dá)的比較

2.4 相關(guān)性分析 TLR4蛋白與血清 IL-8（r= 0.969）、腎組織IL-8（r=0.972）、Cr（r=0.944）、BUN（r= 0.903）、24 h尿蛋白（r=0.965）均呈正相關(guān)（均P＜0.05），腎組織IL-8與Cr（r=0.929）、BUN（r=0.940）、24 h尿蛋白（r=0.962）均呈正相關(guān)（均P＜0.05）。

3 討論

近些年研究發(fā)現(xiàn)，DN除了已熟知的經(jīng)典的發(fā)病機(jī)制（血流動(dòng)力學(xué)障礙、糖代謝紊亂、氧化應(yīng)激、胰島素抵抗等）外，免疫炎癥反應(yīng)也參與了DN的發(fā)生發(fā)展［8］。有研究證實(shí)糖尿病機(jī)體的內(nèi)環(huán)境紊亂狀態(tài)可以引起腎臟固有細(xì)胞的損傷，并釋放多種炎癥介質(zhì)引起腎小球硬化及腎間質(zhì)纖維化［9］。因此筆者推測炎癥機(jī)制可能單獨(dú)或與上述經(jīng)典機(jī)制相互作用導(dǎo)致DN的發(fā)展惡化。

TLR參與免疫炎癥反應(yīng)的中心環(huán)節(jié)。TLR 4受體是迄今為止發(fā)現(xiàn)最早的TLR亞型之一，是目前被研究最多的Toll樣受體，在免疫炎癥性疾病中的作用也日漸受到關(guān)注［10］。其主要通過MyD88依賴的和非MyD88依賴的信號(hào)途徑通路引起生物活性作用［11］，通路被激活后可以啟動(dòng)其下游各種炎癥介質(zhì)（如IL-8、IL-6、腫瘤壞死因子-α）的合成和釋放，從而引起一系列的炎癥反應(yīng)［12］。DN狀態(tài)下，體內(nèi)多種細(xì)胞因子被損傷活化后觸發(fā)TLR4介導(dǎo)的獲得性免疫反應(yīng)［13］，導(dǎo)致大量的炎癥細(xì)胞因子產(chǎn)生，引起腎臟炎癥反應(yīng)，加重腎損傷，參與DN的發(fā)生發(fā)展［14］。呂金雷等［15］發(fā)現(xiàn)高糖狀態(tài)下可以激活TLR4-MyD88信號(hào)通路，導(dǎo)致下游炎性因子的增加，提示高糖可能是觸發(fā)TLR4活化的因素之一，其介導(dǎo)的免疫炎癥反應(yīng)可能與MyD88依賴的信號(hào)途徑激活有關(guān)。本研究也發(fā)現(xiàn)2型糖尿病腎病大鼠腎組織TLR4蛋白表達(dá)上調(diào)，與IL-8、腎臟損害程度的有關(guān)指標(biāo)呈正相關(guān)，與上述研究結(jié)果相似，進(jìn)一步說明糖尿病腎臟損害的免疫炎癥反應(yīng)機(jī)制與TLR4信號(hào)通路的活化有著密切聯(lián)系，因此阻斷TLR4介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)對治療及緩解DN腎臟病變至關(guān)重要，但是否通過MyD88依賴的信號(hào)途徑介導(dǎo)的炎癥反應(yīng)尚待進(jìn)一步研究。

青蒿琥酯是具有過氧橋的倍半萜類化合物［16］。最新研究表明青蒿琥酯除具有傳統(tǒng)意義上的生物活性外還具有免疫炎癥抑制作用。本研究結(jié)果顯示，青蒿琥酯各劑量組較模型對照組的腎組織TLR4蛋白表達(dá)、血清和腎組織IL-8水平均明顯降低，且青蒿琥酯大劑量組較小劑量組效果更明顯，腎功能損傷程度減輕，24 h尿蛋白量減少，提示青蒿琥酯可能通過下調(diào)TLR4的表達(dá)，減少炎癥介質(zhì)IL-8水平，減輕腎臟的炎癥反應(yīng)，同時(shí)減少尿蛋白的產(chǎn)生，改善腎功能，從而在一定程度上保護(hù)腎臟。另外，本研究中腎組織TLR4蛋白的表達(dá)與IL-8、Cr、BUN及24 h尿蛋白量呈正相關(guān)，提示TLR4的表達(dá)異常與DN的持續(xù)性低度炎癥狀態(tài)有關(guān)，同時(shí)也發(fā)現(xiàn)腎組織IL-8水平與Cr、BUN及24 h尿蛋白量呈正相關(guān)，推測IL-8水平有可能成為判斷腎功能損害程度的一個(gè)指標(biāo)，進(jìn)一步驗(yàn)證上述結(jié)論。同時(shí)發(fā)現(xiàn)青蒿琥酯各劑量組間空腹血糖無明顯差異，提示青蒿琥酯對腎臟的保護(hù)機(jī)制可能獨(dú)立于血糖的作用。青蒿琥酯大劑量組與依那普利組相比各種腎功能損害指標(biāo)無明顯差異，推測30 mg/（kg·d）青蒿琥酯可能與10 mg/（kg·d）依那普利在保護(hù)腎功能方面的療效相似。

綜上所述，青蒿琥酯可能通過下調(diào)腎組織TLR4的表達(dá)，減少炎癥因子IL-8的釋放，減少蛋白尿，改善腎功能，從而對腎臟病變程度的惡化起到一定程度的緩解作用，但具體機(jī)制尚需進(jìn)一步研究。

［1］Huang L，Liao TT，Gong J，et al.The influence of bailing capsule on microinflammatory state in diabetic nephropathy with chronic renal failure［J］.China Modern Med J，2014，21（15）:72-74.［黃龍，廖婷婷，龔俊，等.百令膠囊對糖尿病腎病慢性腎衰竭微炎癥狀態(tài)的影響［J］.中國當(dāng)代醫(yī)藥，2014，21（15）：72-74］.

［2］Yang M，Gan H，Shen Q，et al.Proinflammatory CD14+CD16+mono?cytes are associated with microinflammation in patients with type 2 diabetes mellitus and diabetic nephropathy uremia［J］.Inflamma?tion，2012，35（1）:388-396.doi:10.1007/s10753-011-9374-9.

［3］Liu L，Zuo LF，Wang J.Effects of artesunate on membrane potential of mitochondria and cell apoptosis of Ec9706 cells［J］.Med J Chin PLA，2014，39（1）:25-29.［劉亮，左連富，王靜.青蒿琥酯對食管癌Ec9706細(xì)胞線粒體膜電位及凋亡的影響［J］.解放軍醫(yī)學(xué)雜志，2014，39（1）:25-29］.

［4］Jiang SS，Long Y，Su K，et al.Effects of artesunate on high glucoseinduced cell apoptosis，TNF-α and IL-8 expression in renal tubu?lar epithelial cells［J］.Tianjin Med J，2015，43（1）:20-24.［蔣姍姍，龍艷，蘇珂，等.青蒿琥酯對高糖誘導(dǎo)的腎小管上皮細(xì)胞凋亡及TNF-α、IL-8表達(dá)的影響［J］.天津醫(yī)藥，2015，43（1）:20-24］.

［5］Huang FJ，Zhang GJ，Zhang H.Effects of artesunate on the expression level of TLR4 and TGF-βwith asthma rats［J］.Chin Med Biotechnol，2011，6（4）:266-269.［黃發(fā)軍，詹光杰，張宏.青蒿琥酯對哮喘大鼠肺組織TLR4及TGF-β表達(dá)的影響［J］.中國醫(yī)藥生物技術(shù)，2011，6（4）：266-269］.doi:10.3969/cmba，j.issn.1673-713x.2011.04.006.

［6］Ma XY，Wu WH，Zeng Y，et al.The anti-inflammatory effect and its mechanism of artemisia on the renal of UUO rats［J］.Chongqing Med，2010，39（12）:1514-1516.［馬行一，昊蔚樺，曾燕，等.青蒿琥酯對UUO模型大鼠腎臟的抗炎作用及其機(jī)制研究［J］.重慶醫(yī)學(xué)，2010，39（12）：1514-1516］.doi:10.3969/j.issn.1671-8348.2010.12.013.

［7］Fan YF，Xu RX，Xiang JJ，et al.Study of the method used to induce the model of type 2 diabetic mellitus rat and the characteristic of the nephropathy［J］.Journal of Chinese Physician，2012，14（1）:16-19.［范巖峰，許榕仙，向建軍，等.2型糖尿病腎病大鼠模型的建立及腎病特點(diǎn)［J］.中國醫(yī)師雜志，2012，14（1）：16-19］.doi:10.3760/cma.j.issn.1008-1372.2012.01.006.

［8］Nelson KF，Tsung WC，Hwai LL，et al.Negative regulatory resposes to metabolliccaly triggered inflammtion impair renal epithelial immu?nity in diabetes mellitus［J］.J Mol Med，2013，91（12）:587-598.doi: 10.1007/s00109-012-0969-x.

［9］Ma J，Wu H，Zhao CY，et al.Requirement for TLR2 in the develop?ment of albuminuria，inflammation and fibrosis in experimental dia?betic nephropathy［J］.Int J Clin Exp Pathol，2014，7（2）:481-495.

［10］Zhang XD，F(xiàn)ang JA，Li XX，et al.Effect of Yishen capsule on thbuloin?terstitial expression of TLR and NF-κB in experimental diabetic ne?phropathy［J］.Chin J Kidney Dis Invest（Electronic Editor），2013，2 （4）:28-31.［張曉東，方敬愛，李秀秀，等.益盛膠囊對糖尿病腎病模型腎小管間質(zhì)TLR4及NF-κB表達(dá)的研究［J］.中華腎病研究，2013，2（4）：28-31］.doi:10.3877/cma.j.issn.2095-3216.04.007.

［11］Liu P，Li F，Qiu M，et al.Expression and cellular distribution of TLR4，MyD88，and NF-κB in diabetic renal tubulointerstitial fibro?sis，in vitro and in vivo［J］.Diabetes Res Clini Pract，2014，10（10）：1016-1024.doi:10.1016/j.diabres.2014.04.020.

［12］Wang ZG，Wei M，Wang M，et al.Inhibition of macrophage inhibito?ry factor reduces diabetic nephrpathyin typeⅡdiabetes in mice［J］.Inflammation，2014，37（6）:2020-2029.doi:10.1007/s10753-014-9934-x.

［13］Yang MX，Gang H，Shen Q.Effect of LPS on the level of TLR4 and on theexpression of NF-κB，Notch1 in monocytes from patients with type 2 diabetic nephropathy［J］.J Cent South Univ（Med sci），2012，37（6）:578-585.［楊孟雪，甘華，沈清.脂多糖對2型糖尿病腎病患者單核細(xì)胞TLR4水平及NF-κB，Notch1表達(dá)的影響［J］.中南大學(xué)學(xué)報(bào)（醫(yī)學(xué)版），2012，37（6）：578-585］.doi:10.3969/j.jssn.1672-7347.2012.06.007.

［14］Lorenz G，Darisipudi MN，Anders HJ.Canonical and non-canonical effects of the NLRP3 inflammasome in kidney inflammation and fi?brosis［J］.Nephrology Dialysis Transplantation，2014，29（1）:41-48.doi:10.1093/ndt/gft332.

［15］Lyu JL，Xu JH，F(xiàn)u ZH，et al.Angiotensin II up?regulates the release of inflammation factors via Toll?like receptor 4 signal in rat mesan?gial cells under high glucose［J］.Chin J Nephrol，2013，29（12）：908-913.［呂金雷，徐金華，付志暉，等.血管緊張素Ⅱ正向調(diào)節(jié)高糖環(huán)境下大鼠腎小球系膜細(xì)胞TLR4信號(hào)及炎性因子的表達(dá)［J］.中華腎臟病雜志，2013，29（12）：908-913］.doi:10.3760/cma.j.issn.1001?7097.2013.12.007.

［16］Nzila A，Al-Zahrani I.Drugs for the treatment of malaria in the Kingdom of Saudi Arabia［J］.Saudi Med J，2013，34（6）:569-578.

（2014-06-11收稿 2014-12-19修回）

（本文編輯 陳麗潔）

Effect of artesunate on expressions of Toll-like receptor 4 and interleukin-8 in renal tissues of diabetic nephropathy rats

NIE Han，SU Ke△，LONG Yan△，JIANG Shanshan，SUN Qing
Department of endcrinology，Affiliated Hospital of Guilin Medical College，Guilin 541001，China
△Corresponding Author E-mail：su13978316336@163.com，ly136988@163.com

Objective To investigate effect of artesunate on expressions of Toll-like receotor-4（TLR4）and interleu?kin-8（IL-8）in renal tissue of diabetic nephropathy rats.Methods Male SD rats of over 200 g in body weight（n=45）were injected with low dosage streptozotocin and fed with high fat and sucrose diets to establish diabetes nephropathy（DN）model.Among all rats of successful model，thirty-two were randomly selected and divided into four groups（n=8 in each group），Mod?el group（Group B），Artesunate at high dose treatment group［30 mg/（kg·d）］（Group C），Artesunate at low dose treatment group［10 mg/（kg·d）］（Group D），Enalapril treatment group［10 mg/（kg·d）］（Group E）.Another eight rats without STZ injec?tion whose body weight is under 200 g were assigned as Normal group（Group A）.Then，rats in Group A and B were given the same volume of normal saline［10 mg/（kg·d）］while rats in Group C，D and E were given 30 mg/（kg·d）Artesunate，10 mg/（kg·d）Artesunate and 10 mg/（kg·d）Enalapril respectively intragastrically for consecutive 12 weeks.Fasting blood glucose，body weight，kidney index，24-hours proteinuria，serum creatinine（Cr）and blood urea nitrogen（BUN）were measured.Expression level of TLR4 in renal tissue of rats were examined by Western blot；ELISA was used to quantify the concentration of IL-8 in serum and renal tissue of rats.Results Compared with rats in Group A，the levels of Fasting blood glucose，kidney index，24-hours proteinuria，Cr and BUN as well as the level of TLR4 in kidney，levels of IL-8 in serum and kidney all significant?ly increased in rats in Group B，C，D and E（P＜0.05）.On the other hand，body weight were decreased in rats of Group B，C，D and E compared to rats in Group A（P＜0.05）.The level of TLR4 in kidney，levels of IL-8 in serum and kidney，24-hours proteinuria，Cr and BUN in rats of Group C，D and E were significantly lower than those in rats of Group B（P＜0.05）.Furthermore，compared with rats in Group D，the levels of TLR4 in kidney，IL-8 in serum and kidney，24-hours proteinuria，Cr and BUN were decreased in rats in Group C and E（P＜0.05）.Pearson correlation analysis showed that the expression lev?el of TLR4 positively correlated with IL-8 level in serum（r=0.969，P＜0.05），IL-8 level in kidney（r=0.972，P＜0.05），24-hours proteinuria（r=0.965，P＜0.05），Cr（r=0.944，P＜0.05）and BUN（r=0.903，P＜0.05）.IL-8 level in kidney positively correlated with 24-hours proteinuria（r=0.962，P＜0.05），Cr（r=0.929，P＜0.05）and BUN（r=0.940，P＜0.05）.Conclu?sion Artesunate decreases expression of TLR4 and IL-8，reduce 24-hours proteinuria，inhibits the inflammation of the DN，relives the pathological lesions of nephron rats with diabetic nephropathy.

ARTEMISININ；diabetic nephropathies；Toll-like receptor 4；interleukin-8；inflammatory reaction；ARTE?SUNATE

R587.1

A

10.11958/j.issn.0253-9896.2015.04.006

廣西醫(yī)療衛(wèi)生適宜技術(shù)研究與開發(fā)項(xiàng)目（S201316-07）；廣西自然科學(xué)基金項(xiàng)目（2012GXNSFAA053085）

桂林醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院內(nèi)分泌科（郵編541001）

聶寒（1987），女，碩士在讀，主要從事糖尿病及慢性并發(fā)癥的診治研究

△E-mail：su13978316336@163.com，ly136988@163.com