替米考星緩釋顆粒對豬傳染性胸膜肺炎病的臨床療效研究

葉盛恒

（廣州市白云區(qū)人和鎮(zhèn)畜牧獸醫(yī)站，廣東廣州510470）

1 材料與方法

1.1 試驗動物及基礎(chǔ)日糧 豬傳染性胸膜肺炎病豬150頭，體重25～30kg，70日齡，未使用過胸膜肺炎放線桿菌疫苗，公母兼有，選自廣東省廣州市白云區(qū)豬場。經(jīng)鼻黏膜采樣分離細菌，并從前腔靜脈采血3mL分離血清，采用ELISA法進行血清學(xué)確診。胸膜肺炎放線桿菌（APP） 及血清學(xué)檢測呈陽性方可參與試驗分組。按常規(guī)飼養(yǎng)，自由飲水和采食，飼料參照家畜營養(yǎng)需求標(biāo)準(zhǔn)配制的不含任何抗菌藥物的仔豬全價日糧。

1.2 供試藥品和菌種 供試藥物：替米考星緩釋顆粒，含量10%，批號201201101，由華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)藥理研究室提供，試驗前由廣東省獸藥飼料監(jiān)察所檢測含量合格。

對照藥物：替米考星預(yù)混劑，市售，有正規(guī)廠家和批號、含量信息。

豬胸膜肺炎放線桿菌（APP259） 購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。血清1型，生物Ⅰ型。凍干保存，－20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

豬胸膜肺炎放線桿菌（APP260） 購自中國獸醫(yī)藥品監(jiān)察所。血清2型，生物Ⅰ型。凍干保存，－20℃保存?zhèn)溆谩?/p>

1.3 試驗試劑 MH肉湯培養(yǎng)基、MH瓊脂培養(yǎng)基均購自環(huán)凱生物科技有限公司。

脫纖維綿羊血購自廣州蕊特生物技術(shù)有限公司。

新生小牛血清、輔酶Ⅰ（NADⅠ） 均購自普博欣生物技術(shù)有限公司。

胰蛋白大豆瓊脂培養(yǎng)基（TSA）、胰蛋白大豆肉湯培養(yǎng)基（TSB） (OXIDE)。

上述培養(yǎng)基在使用前，121℃高壓20分鐘，冷卻至50～60°C后，加入新生牛血清（或者脫纖維綿羊血） 和NADⅠ，使其終濃度分別為8%和100μg/mL。

血細胞分析儀溶血劑、血細胞分析儀清洗液DH-520、血細胞分析儀稀釋液DH-640均購自廣州市貝立醫(yī)學(xué)科技有限公司。

豬傳染性胸膜肺炎ApxⅣ-ELISA抗體檢測試劑盒購自武漢科前動物生物制品有限責(zé)任公司。

1.4 病原菌的分離、培養(yǎng)及鑒定

1.4.1 病原菌的分離與培養(yǎng) 無菌取肺臟、氣管、脾臟等病料組織，經(jīng)分離純化及生化PCR鑒定后，接種于含終濃度為8%的脫纖維綿羊血和100μg/mLNADⅠ的TSA平板上備用。

1.4.2 病原菌的鑒定 剖檢病死豬，取肺臟、肝臟涂TSA培養(yǎng)基進行病原菌分離并采用ELISA法進行血清學(xué)鑒定。

1.5 試驗豬分組及給藥方案 從2013年1月10日開始安排實驗事宜。在廣州人和橫瀝、廣東佛山、肇慶廣寧和廣州從化太平等地區(qū)共4個豬場（均為1～3萬頭規(guī)?；i場） 于2013/1/10～2013/3/20期間共收集了4批疑似豬傳染性胸膜肺炎的自然感染病例豬190頭，長白、大白、杜洛克等品種及公母均有，大多數(shù)豬在40～90日齡間。經(jīng)以下豬傳染性胸膜肺炎診斷方法進行確診后，選擇150頭病豬為試驗用豬，所有被選的試驗豬的發(fā)病程度基本一致，即在確診后表現(xiàn)為輕至中度臨床癥狀，已發(fā)病約為2～4天。另選相同日齡或體重的健康豬30頭作為健康對照組。

所有試驗豬均分成5組（保證每批試驗均包含有各個試驗組），每組30頭：

第1組：供試藥物高劑量組（替米考星緩釋顆粒2倍推薦劑量）；

第2組：供試藥物中劑量組（替米考星緩釋顆粒推薦劑量）；

第3組：供試藥物低劑量組（替米考星緩釋顆粒1/2倍推薦劑量）；

第4組：對照藥物組（替米考星預(yù)混劑推薦劑量）；

第5組：發(fā)病不給藥對照組（感染對照組）。

1.6 傳染性胸膜肺炎病豬的確診 接種前和接種14天后，從前腔靜脈采血3mL，分離血清，采用ELISA法進行胸膜肺炎放線桿菌ApxIV毒素抗體血清學(xué)檢測。

在酶標(biāo)儀上測各孔OD630nm值。試驗成立的條件是陽性對照孔平均OD630nm值大于或等于0.6，陰性對照孔平均OD630nm值小于0.2。根據(jù)公式：S：樣品孔OD630nm值?P:陽性對照孔平均OD630nm值。如果S≥P×0.29，判為陽性，S＜P×0.29判為陰性。

1.7 實驗性治療 經(jīng)過確診后，立即選擇豬傳染性胸膜肺炎病豬共150頭（均表現(xiàn)有典型癥狀），按表1分別對各組豬給藥。停藥后對豬的臨床情況進行跟蹤觀察，觀察期持續(xù)15天。

2 數(shù)據(jù)處理

試驗數(shù)據(jù)用EXCEL軟件進行處理后，采用SPSS17.0統(tǒng)計軟件進行 Means、χ2檢驗及One-Way ANOVA分析，然后橫向進行Duncan氏法和LSD法多重比較。試驗數(shù)據(jù)的結(jié)果以平均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示（P>0.05表示差異不顯著；P<0.05表示差異顯著）。

3 結(jié)果與分析

3.1 傳染性胸膜肺炎病豬指標(biāo)

3.1.1 臨床癥狀 傳染性胸膜肺炎病豬呼吸有濕羅音、精神沉郁、喜靜、喜歡呆在暗角落、體溫升高，部分豬出現(xiàn)短暫性嘔吐。接種后4～6h，豬直腸體溫達到最高值、呼吸困難，腹式呼吸嚴重、不吃料、毛發(fā)豎立、成犬坐狀等臨床癥狀。感染組感染12～24 h，精神極度沉郁、口吐白沫、呼吸困難，全身淺表部位發(fā)紺。病程發(fā)展嚴重，最后死亡時口鼻流血樣泡沫狀液體。

3.1.2 病理剖檢 從對分離菌的生化及PCR鑒定可以得出，從病死豬的肺部分離的細菌為攻毒菌株，再根據(jù)豬的發(fā)病臨床癥狀可以初步判定試驗豬感染了豬傳染性胸膜肺炎放線桿菌。

3.1.3 血清學(xué)診斷 根據(jù)試劑盒結(jié)果判定標(biāo)準(zhǔn)：樣品孔OD630nm值大于等于0.29倍陽性孔的OD630nm值，可判為陽性 表7中突出顯示為黃色的樣品孔的豬傳染性胸膜肺炎ApxⅣ-ELISA抗體檢測呈陽性。

3.2 治療試驗療效評價指標(biāo)

3.2.1 X光診斷 經(jīng)X光檢查確診，給藥前豬肺部出現(xiàn)明顯的纖維素性滲出特征。與治療豬肺部X光對照，感染豬的左側(cè)肺臟出現(xiàn)了白色高密度物質(zhì)，這表明感染組的左側(cè)肺部出現(xiàn)了實質(zhì)性病變。

3.2.2 病例剖檢 從切片中可以看出，感染死亡豬肺泡內(nèi)、各級支氣管內(nèi)出現(xiàn)了紅細胞，充血。炎性細胞滲出，有的甚至填滿整個肺泡腔、肺泡間隔、各級支氣管。

3.2.3 治療結(jié)果 本試驗治療效果統(tǒng)計顯示，替米考星緩釋顆粒高、中、低三個劑量組及藥物對照組均能治療豬傳染性胸膜肺炎，治愈率分別為86.7%、76.7%、66.7%、70%，差異不顯著（p>0.05，X2=0.42～3.27）。當(dāng)與患病不給藥組（自愈有效率為26.7%） 進行比較，差異均極顯著（p<0.01，X2=15.02～27.78）。其中高、中、低劑量治療組、藥物對照組與健康對照組14天增重（5.51kg） 之比分別為96.5%、93.5%、97.7%、94.3%，無顯著差異（P>0.05）。

4 討論

治療效果 各試驗組與感染不給藥組比較：以有效率為主要評價指標(biāo)時，替米考星緩釋顆粒高、中、低劑量組和替米考星預(yù)混劑的有效率分別為93.3%、83.3%、73.3%和76.7%，當(dāng)與患病不給藥組（自愈有效率為26.7%） 進行比較，差異均極顯著（p<0.01，X2=15.02～27.78）。

各試驗組與藥物對照組比較：替米考星緩釋顆粒高、中劑量組的有效率均高于替米考星預(yù)混劑組，但差異不顯著（p>0.05，X2=0.42～3.27）。替米考星緩釋顆粒低劑量組的有效率稍低于替米考星緩釋顆粒預(yù)混劑組。

本試驗結(jié)果顯示，替米考星緩釋顆粒高、中劑量組每天給藥2次，連續(xù)給藥15天的治療效果高于替米考星預(yù)混劑的治療效果，但差異不顯著（P>0.05）。根據(jù)試驗結(jié)果，臨床應(yīng)用替米考星緩釋顆粒治療豬傳染性胸膜肺炎更有效，有利于臨床推廣使用。