老年骨肉瘤患者術(shù)后組織中Kindlin－2、furin和人第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源基因的表達(dá)及意義

劉書(shū)華 王 路 趙嘉懿 (浙江省舟山醫(yī)院骨科，浙江 舟山 316000)

骨肉瘤流行病學(xué)的統(tǒng)計(jì)中常呈雙峰狀，常見(jiàn)于青年人，在老年人少見(jiàn)，但是在老年人的發(fā)病過(guò)程中常伴有自身特征，以蛋白的失調(diào)和異常增殖過(guò)程為主。Kindlin－2蛋白(Kindlin－2)是黏著斑蛋白家族的重要成員，可以調(diào)節(jié)多種生物學(xué)過(guò)程，如增殖、黏附和遷移過(guò)程〔1，2〕。弗林蛋白酶(Furin)是一種常見(jiàn)的前體蛋白加工酶，與其依附的底物多，其功能較為復(fù)雜，近期人們關(guān)注Furin的異常表達(dá)時(shí)對(duì)腫瘤的作用〔3，4〕。抑癌基因人第10號(hào)染色體缺失的磷酸酶及張力蛋白同源基因(PTEN)是一種明確的腫瘤抑制基因，可以對(duì)細(xì)胞周期及凋亡有明顯的影響，進(jìn)而抑制腫瘤的生長(zhǎng)及進(jìn)展〔5，6〕。本文關(guān)注老年骨肉瘤患者術(shù)后組織中Kindlin－2、Furin和PTEN的表達(dá)，探討三者的關(guān)系及臨床價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2009年1月至2013年6月我院確診為骨肉瘤、同時(shí)行手術(shù)切除的老年患者作為觀察組，共78例，均符合WHO中關(guān)于骨肉瘤的診斷標(biāo)準(zhǔn)，同時(shí)經(jīng)病理醫(yī)師確診。年齡60～87歲，平均(69.8±5.4)歲。男43例，女35例。60例骨樣骨瘤組織作為對(duì)照組，年齡60～78歲，平均(65.6±5.7)歲。男30例，女30例。兩組常規(guī)資料無(wú)明顯差別，具有可比性。

1.2 Kindlin－2、Furin 和 PTEN 蛋白的檢測(cè)方法 Kindlin－2、Furin和PTEN試劑均為濃縮液，均購(gòu)自武漢博士德生物工程公司。在正式檢測(cè)前，三種蛋白均依不同比例進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，并應(yīng)用染色最理想的濃度進(jìn)行正式實(shí)驗(yàn)。Kindlin－2、Furin和PTEN蛋白檢測(cè)采用免疫組化SP法，應(yīng)用DAB顯色，完全按說(shuō)明書(shū)的要求進(jìn)行操作，嚴(yán)格質(zhì)量控制，減少人為誤差。

1.3 Kindlin－2、Furin 和 PTEN 結(jié)果的判讀 Kindlin－2、Furin 和PTEN均以細(xì)胞質(zhì)中顯現(xiàn)中－強(qiáng)的棕黃色顆粒認(rèn)定為陽(yáng)性細(xì)胞(弱陽(yáng)性細(xì)胞不計(jì)為陽(yáng)性細(xì)胞)，選擇10個(gè)染色密集的陽(yáng)性細(xì)胞區(qū)域，計(jì)數(shù)10個(gè)高倍(400倍)視野，計(jì)算陽(yáng)性細(xì)胞的百分率，取平均值。均以陽(yáng)性率≥5%計(jì)為陽(yáng)性，以陽(yáng)性率＜5%計(jì)為陰性。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SAS6.12統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行χ2檢驗(yàn)、線性相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 兩組中Kindlin－2、Furin和PTEN蛋白表達(dá)陽(yáng)性率的比較觀察組中Kindlin－2、Furin陽(yáng)性表達(dá)明顯高于對(duì)照組，PTEN陽(yáng)性表達(dá)明顯低于對(duì)照組(均P＜0.000 1)，見(jiàn)表1。

2.2 觀察組不同臨床特征中Kindlin－2、Furin和PTEN表達(dá)陽(yáng)性率的比較 觀察組中3種蛋白表達(dá)的陽(yáng)性率均于腫瘤的最大徑線、有無(wú)軟組織浸潤(rùn)及不同Ennecking分期的比較中差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。見(jiàn)表2。

表1 兩組Kindlin-2、Furin和PTEN蛋白表達(dá)陽(yáng)性率的比較〔n(%)〕

表2 觀察組不同臨床特征中Kindlin-2、Furin和PTEN表達(dá)陽(yáng)性率的比較〔n(%)〕

2.3 觀察組中Kindlin-2、Furin和PTEN表達(dá)的相關(guān)性分析觀察組中Kindlin-2與PTEN(r= －0.45，P=0.041 5)、Furin和PTEN(r=－0.49，P=0.035 4)的表達(dá)均呈負(fù)相關(guān)性。其他指標(biāo)間未見(jiàn)明顯的相關(guān)性(P＞0.05)。

3 討論

老年人常會(huì)有退行性改變，骨組織常伴有骨質(zhì)疏松，在此過(guò)程中有蛋白的失調(diào)。而老年人的骨肉瘤是原發(fā)于髓內(nèi)的高級(jí)別惡性腫瘤，其腫瘤性細(xì)胞產(chǎn)生骨樣基質(zhì)〔7，8〕。老年人的骨肉瘤鏡下表現(xiàn)一般是高度間變、多形性的腫瘤，形成可以是上皮樣、漿細(xì)胞樣、紡錘形、橢圓形、小圓細(xì)胞、透明細(xì)胞、單核或多核巨細(xì)胞樣。腫瘤局部浸潤(rùn)性生長(zhǎng)和迅速的全身血行擴(kuò)散是重要的生物學(xué)行為。一般來(lái)說(shuō)年齡、性別、腫瘤大小、分期均可以用于預(yù)后的判斷。相關(guān)研究認(rèn)為老年人骨肉瘤的生物學(xué)行為程度更高〔9〕。目前基因和蛋白表達(dá)失調(diào)用于腫瘤發(fā)生和研究生物學(xué)行為的判斷上。Kindlin是個(gè)多功能的家族，其不僅介導(dǎo)腫瘤細(xì)胞質(zhì)惡變，同時(shí)對(duì)細(xì)胞內(nèi)信號(hào)的轉(zhuǎn)導(dǎo)和細(xì)胞增殖有重要的作用〔10，11〕。Kindlin-2是家族中的重要成員，常于細(xì)胞質(zhì)中表達(dá)，尤其是黏著斑的位置，高表達(dá)后引起轉(zhuǎn)錄的進(jìn)行，同時(shí)將細(xì)胞與細(xì)胞間的信號(hào)進(jìn)行傳遞，引起黏附和遷移功能的改變〔12，13〕。Furin可以調(diào)節(jié)腫瘤的生物學(xué)功能，對(duì)多肽的合成和分泌、細(xì)胞膜相關(guān)受體的成熟過(guò)程、相關(guān)級(jí)聯(lián)蛋白的激活有重要作用〔14，15〕。PTEN在正常黏膜和骨組織中高表達(dá)，被認(rèn)為是腫瘤抑制基因，其特點(diǎn)是減少細(xì)胞增殖過(guò)程，誘導(dǎo)細(xì)胞的凋亡，減少腫瘤失控性增生的發(fā)生〔16〕。當(dāng)其表達(dá)下調(diào)或丟失后，腫瘤細(xì)胞的增殖活性提高，侵襲能力增加，轉(zhuǎn)移潛能升高〔17〕。

本實(shí)驗(yàn)結(jié)果提示Kindlin-2和Furin高表達(dá)、PTEN低表達(dá)是老年人骨肉瘤發(fā)生的重要促進(jìn)因素。Kindlin-2、Furin和PTEN參與腫瘤的生長(zhǎng)及浸潤(rùn)過(guò)程，也提示Kindlin-2和Furin高表達(dá)、PTEN低表達(dá)可以有效地促進(jìn)腫瘤進(jìn)展過(guò)程。有學(xué)者認(rèn)為轉(zhuǎn)化生長(zhǎng)因子β可以影響Kindlin蛋白的表達(dá)，加速細(xì)胞的分化，引起細(xì)胞的增殖過(guò)程增強(qiáng)，提高腫瘤細(xì)胞的惡性潛能〔18〕。也有研究認(rèn)為Kindlin和血管的關(guān)系密切，即Kindlin-2可以促進(jìn)腫瘤間質(zhì)的血管新生和血管形成，并可以血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子作為橋梁，促進(jìn)腫瘤的生長(zhǎng)〔12〕。本文提示Kindlin-2和Furin的作用過(guò)程均與PTEN的表達(dá)相關(guān)，也提示Kindlin-2和Furin表達(dá)上調(diào)后可以引起下游蛋白PTEN的表達(dá)下降，對(duì)腫瘤性生長(zhǎng)和進(jìn)展的抑制作用減弱，腫瘤加速生長(zhǎng)和侵襲。也有觀點(diǎn)認(rèn)為PTEN對(duì)腫瘤抑制作用減弱后，促腫瘤生長(zhǎng)的基因相對(duì)激活，從而引起細(xì)胞增殖分化失控、凋亡障礙以及血管生成通路異常，加速腫瘤的進(jìn)展〔6〕。

綜上，老年骨肉瘤患者術(shù)后組織Kindlin-2和Furin高表達(dá)，PTEN低表達(dá)，不僅促進(jìn)腫瘤發(fā)生，還促進(jìn)腫瘤進(jìn)展。Kindlin-2和Furin對(duì)骨肉瘤的作用可能與其下調(diào)PTEN表達(dá)有關(guān)。

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