張書俊 (南陽市中心醫(yī)院普外科,河南 南陽 473000)
肝細胞癌病變進展快,轉移率高。近來相關研究認為肝細胞癌生物學行為與多種基因和蛋白的表達異常有關〔1〕。整合素連接激酶(ILK)能夠參與整合素、生長因子、WNT等信號傳導通路,與細胞的持續(xù)增殖、黏附性喪失、遷移及血管的生成可能有關〔2〕。NADPH:醌氧化還原酶1(NQO-1)是一種黃素酶,在不同腫瘤的表達不盡相同〔3,4〕,關于NQO-1在肝細胞癌中的表達及其與ILK和增殖細胞核抗原(PCNA)的關系尚未見報道。本研究關注肝細胞癌術后組織中ILK、NQO-1和PCNA的表達,探討其關系及臨床價值。
1.1 一般資料 2004年1月至2008年10月我院行肝細胞癌根治手術患者的術后蠟塊資料作為觀察組79例。納入均符合WHO中關于肝細胞癌的診斷標準。男40例,女39例;年齡50~79歲,平均65.4歲;高分化40例,中分化16例,低分化23例。術前均未進行放、化療。同時選取距離腫瘤邊緣>3 cm的正常肝組織55例作為對照組,其中男30例,女25例;年齡51~78歲,平均64.3歲。兩組一般資料差異無統(tǒng)計學意義。
1.2 ILK、NQO-1和PCNA蛋白表達的檢測方法 ILK、NQO-1和PCNA蛋白的濃縮液均購自美國Santa Cruz公司。枸櫞酸抗原修復液、DAB顯色試劑等相關試劑盒均購自北京中杉金橋公司。ILK、NQO-1和PCNA依不同比例稀釋后進行預實驗,并設陽性對照和陰性對照。選擇最理想的配比濃度進行正式實驗。蛋白的檢測應用免疫組化SP法。嚴格按實驗步驟進行操作。嚴格質量控制。
1.3 ILK、NQO-1和PCNA陽性的判讀方法 ILK、NQO-1的陽性表達均位于細胞質中,PCNA的陽性表達位于細胞核中,以出現(xiàn)棕黃色顆粒為陽性反應細胞。計數(shù)5個高倍視野,計數(shù)總和,以陽性率≥25%為陽性,以陽性率<25%為陰性。
1.4 統(tǒng)計學方法 應用SAS6.12軟件進行t檢驗、χ2檢驗。
2.1 ILK、NQO-1和PCNA在兩組中表達的比較 觀察組ILK、NQO-1和PCNA表達的陽性率中明顯高于對照組(P<0.000 1)。見表1。
表1 ILK、NQO-1和PCNA在兩組陽性表達的比較〔n(%)〕
2.2 ILK、NQO-1和PCNA的表達與肝細胞癌臨床病理特征的關系 觀察組中ILK、NQO-1和PCNA的表達與腫瘤的分化程度、TNM分期、腫瘤最大徑及Ki67的表達相關。見表2。
表2 ILK、NQO-1和PCNA的表達與肝細胞癌臨床病理特征的關系〔n(%)〕
2.3 肝細胞癌中ILK、NQO-1和PCNA表達的關系 ILK和PCNA(r=0.54,P=0.009 7)、NQO-1 和 PCNA(r=0.55,P=0.010 9)的表達均具有正相關性。
2.4 肝細胞癌中ILK、NQO-1和PCNA不同表達與患者生存時間的關系 觀察組中ILK、NQO-1和PCNA高表達患者的生存時間明顯短于低表達患者。見表3。
表3 肝細胞癌中ILK、NQO-1和PCNA不同表達與患者生存時間的關系(±s,個月)
表3 肝細胞癌中ILK、NQO-1和PCNA不同表達與患者生存時間的關系(±s,個月)
分組 n 生存時間 t值 P值ILK - 29 19.36±4.57 8.98 0.009 2+ 50 10.56±4.50 NQO-1 - 36 18.43±4.56 8.87 0.010 9+ 43 9.98±4.68 PCNA - 9 27.31±4.54 13.51 0.001 2+ 70 11.84±5.25
肝細胞癌的進展快,增殖指數(shù)高,轉移率高。近來人們關注ILK的表達與腫瘤的關系,并認為ILK對腫瘤的進展有一定促進作用。ILK基因定位于染色體11p5.5~11p15.4,是一種相對分子質量為59 kD的Ser/Thr蛋白激酶,通過介導細胞與細胞外基質的跨膜信號轉導,調控機體多條信號轉導,參與細胞的生長、增殖、分化及凋亡過程〔5,6〕。有研究認為ILK可以抑制蛋白激酶B的生物學活性,調控細胞周期及細胞的凋亡過程,影響腫瘤的生長〔7〕。NQO-1蛋白是一種胞質黃素酶,其基因定位于16q22染色體,在正常肝細胞中低表達,當其表達升高時,在一定程度上與腫瘤發(fā)生相關〔8〕。有研究認為不同NQO-1基因亞型編碼的酶類呈現(xiàn)不同的活性〔9〕。如由TT純合子誘導的NQO-1活性失調,可以引起肝細胞對外源性致腫瘤物質的解毒功能下降〔10〕。也有研究則認為NQO-1可以作為一個氧化應激反應調節(jié)因子,對惡性腫瘤的進展起一定的調節(jié)作用〔11〕。PCNA是一種非組核蛋白,作為一種細胞增殖的上調因子,通過與周期性蛋白激酶結合引起細胞的增殖過程〔12〕。有學者認為PCNA為DNA聚合酶的輔助因子,直接參與DNA的合成,尤其是DNA增殖及表達失調最明顯的腫瘤細胞〔13〕。有學者認為PCNA表達較Ki67要理想,可以囊括Ki67陽性表達的所有細胞,因此其標記增殖更加全面〔14〕。
本實驗結果提示ILK、NQO-1和PCNA表達增強對病變進展有明顯的促進作用,三種蛋白直接和間接作用均能誘導腫瘤惡變。ILK、NQO-1和PCNA對調節(jié)腫瘤的分化有重要價值,分化是細胞由幼稚到成熟的過程,也是細胞惡變的重要過程,調節(jié)細胞分化是機體內在的機制,由于蛋白表達失調的明顯影響,使腫瘤細胞停滯在低分化或未分化狀態(tài),使腫瘤細胞的成熟過程受到更多的影響,也使腫瘤的惡性程度增高〔15,16〕。由于腫瘤的體積與腫瘤的生長密切相關,尤其是生長速度快的惡性腫瘤,而本實驗結果顯示ILK、NQO-1和PCNA均與腫瘤最大徑和腫瘤的TNM分期相關,因此三者在一定程度上參與腫瘤的生長過程。由于以上因素均與腫瘤的預后相關,因此ILK、NQO-1和PCNA的表達可能對判斷腫瘤的預后有一定價值,同時ILK、NQO-1和PCNA不同表達患者的生存時間比較的結果直接證實了上述結論,即ILK、NQO-1和PCNA高表達患者的預后差。本實驗結果直接證實了ILK、NQO-1對增殖的促進作用,尤其是PCNA與Ki67表達更趨一致性,提示ILK、NQO-1在對腫瘤影響過程中,參與了細胞的增殖過程,尤其是失控性增殖反應過程。本文提示ILK和NQO-1高表達時可以明顯刺激細胞增殖,此時PCNA表達升高,腫瘤體積增大。也有觀點認為ILK、NQO-1激活后,凋亡信號傳導受到影響,正常細胞的不斷增殖,而凋亡受到阻滯,細胞逐漸惡變〔17,18〕。
綜上,肝細胞癌中ILK、NQO-1和PCNA高表達,對病變的進展有重要影響,術后聯(lián)合檢測ILK、NQO-1和PCNA的表達可能對判斷生物學行為和預后有一定價值。ILK、NQO-1對PCNA表達的增殖有直接作用,這可能是兩種蛋白的作用機制之一。
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