基于UPLC-Triple TOF-MS/MS技術(shù)的不同產(chǎn)地太子參水提物化學(xué)組成分析

侯 婭,馬 陽(yáng),鄒立思,劉訓(xùn)紅，*,羅益遠(yuǎn),劉娟秀,蘭才武,袁濟(jì)端

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué),江蘇南京 210023;2.貴州昌昊中藥發(fā)展有限公司,貴州凱里 556000;3.柘榮縣藥業(yè)發(fā)展局,福建柘榮 355300)

基于UPLC-Triple TOF-MS/MS技術(shù)的不同產(chǎn)地太子參水提物化學(xué)組成分析

侯 婭1,馬 陽(yáng)1,鄒立思1,劉訓(xùn)紅1，*,羅益遠(yuǎn)1,劉娟秀1,蘭才武2,袁濟(jì)端3

(1.南京中醫(yī)藥大學(xué),江蘇南京 210023;2.貴州昌昊中藥發(fā)展有限公司,貴州凱里 556000;3.柘榮縣藥業(yè)發(fā)展局,福建柘榮 355300)

基于超高效液相色譜-串聯(lián)四極桿飛行時(shí)間高分辨質(zhì)譜(UPLC-Triple TOF-MS/MS)結(jié)合多元統(tǒng)計(jì)分析技術(shù)對(duì)不同產(chǎn)地太子參水提物化學(xué)組成進(jìn)行比較分析。通過(guò)多級(jí)串聯(lián)質(zhì)譜分析,對(duì)其質(zhì)譜數(shù)據(jù)進(jìn)行峰匹配、峰對(duì)齊、濾噪處理等進(jìn)行特征峰提取;根據(jù)一級(jí)質(zhì)譜精確質(zhì)荷比和二級(jí)質(zhì)譜碎片信息,結(jié)合軟件數(shù)據(jù)庫(kù)搜索及相關(guān)文獻(xiàn)進(jìn)行成分鑒別;用PCA和PLS-DA進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,找出不同產(chǎn)地太子參水提物的差異化學(xué)成分。結(jié)果顯示,太子參水提物中主要含有氨基酸、核苷、糖、有機(jī)酸等17種化學(xué)成分,其主成分為精氨酸;4個(gè)不同產(chǎn)地太子參水提物中化學(xué)成分差異明顯,福建柘榮太子參水提物中異丁?；拾彼?、鳥(niǎo)嘌呤、腺苷含量較高,貴州施秉太子參水提物中含有較多的尿苷-5′-單磷酸、異麥芽糖,安徽宣城太子參水提物中精氨酸、月桂酸、5-甲基胞苷、谷氨酸、組氨酸和苯丙氨酸含量較高,江蘇句容太子參水提物中含有較多的N-乙酰-5-甲氧基色胺。

太子參,UPLC-Triple TOF-MS/MS,水溶性化學(xué)成分

太子參為大宗常用中藥材,系石竹科植物孩兒參Pseudostellariaheterophylla(Miq.)Pax ex Pax et Hoffm的塊根[1],具益氣健脾、潤(rùn)肺生津之傳統(tǒng)功效及保護(hù)心肌功能、促進(jìn)免疫、止咳等藥理作用,臨床上用于脾虛體倦、食欲不振、病后虛弱等癥,是治療小兒脾虛而食欲不佳之要藥,療效確切,臨床用量大[2]。太子參又為藥食兩用中藥,國(guó)內(nèi)已有太子參保健食品開(kāi)發(fā)問(wèn)世。由于太子參野生資源日漸減少,而原藥材市場(chǎng)需求量又逐年加大,除江蘇傳統(tǒng)產(chǎn)區(qū)栽培外,全國(guó)現(xiàn)已在福建、貴州、安徽等地建立了大規(guī)模種植基地。土壤方面,江蘇、安徽等產(chǎn)地以輕壤土為主,而福建以砂壤土為主;氣候方面福建、貴州以亞熱帶氣候?yàn)橹?而江蘇、安徽以溫帶氣候?yàn)橹?。由于各地生態(tài)環(huán)境的不同,造成太子參有效成分的積累差異較大,藥材質(zhì)量參差不齊,難以實(shí)現(xiàn)商品藥材標(biāo)準(zhǔn)化及保證其臨床使用有效性和食用保健功能。

水溶性成分是太子參質(zhì)量評(píng)價(jià)的重要指標(biāo),2010年版《中國(guó)藥典》規(guī)定了太子參水溶性浸出物測(cè)定。然而,在目前的太子參藥材質(zhì)量評(píng)價(jià)中大多對(duì)環(huán)肽類(lèi)成分[3-6]、多糖[7]及皂苷類(lèi)成分[8-9]等進(jìn)行鑒定及含量測(cè)定,或?qū)μ訁⑺锏牧窟M(jìn)行測(cè)定,鮮有報(bào)道對(duì)藥材水提物的化學(xué)組成進(jìn)行系統(tǒng)分析研究。近年來(lái)液相色譜質(zhì)譜聯(lián)用技術(shù)發(fā)展迅速,與四極桿質(zhì)譜和離子阱質(zhì)譜相比,超高效液相-串聯(lián)四極桿飛行時(shí)間高分辨質(zhì)譜能夠測(cè)得化合物的精確分子質(zhì)量,進(jìn)而獲得化合物的分子式,且多級(jí)質(zhì)譜給出化合物的裂解碎片結(jié)合相關(guān)的文獻(xiàn)資料能夠快速鑒定其中大部分化合物的結(jié)構(gòu)[10]。代謝組學(xué)是一種整體分析技術(shù),可對(duì)多種小分子代謝產(chǎn)物同時(shí)進(jìn)行定性和定量分析,特別適合于中藥這種多成分復(fù)雜體系的分析[11,12]。本研究根據(jù)中藥傳統(tǒng)湯劑的應(yīng)用特點(diǎn),借鑒植物代謝組學(xué)的研究思路和方法,采用超高效液相-串聯(lián)四極桿飛行時(shí)間高分辨質(zhì)譜(UPLC-Triple TOF-MS/MS)技術(shù)對(duì)不同產(chǎn)地太子參水提物化學(xué)組成進(jìn)行比較分析,并通過(guò)多元統(tǒng)計(jì)分析找出差異變化顯著的化學(xué)成分及其變化規(guī)律,從而為揭示生態(tài)環(huán)境對(duì)太子參水溶性化學(xué)成分合成積累的影響規(guī)律及探討太子參藥材的品質(zhì)形成機(jī)制提供基礎(chǔ)資料。

1 材料與方法

1.1 材料與儀器

太子參樣品分別于2013年7月下旬采于江蘇句容(JSJR)、福建柘榮(FJZR)、貴州施秉(GZSB)和安徽宣城(AHXC),每個(gè)產(chǎn)地采集樣品3份,經(jīng)鑒定為石竹科太子參Pseudostellariaheterophylla(Miq.)Pax ex Pax et Hoffm.的塊根。留樣保存于中藥鑒定實(shí)驗(yàn)室。甲酸、甲醇為色譜級(jí)(Merck 公司);水實(shí)驗(yàn)室自制雙蒸水。

Aquity UPLCTM超高效液相色譜儀 美國(guó)WATERS公司;Triple TOFTM5600 System-MS/MS電噴霧飛行時(shí)間高分辯質(zhì)譜儀 美國(guó)AB Sciex公司;Peakview 1.2數(shù)據(jù)處理工作站 美國(guó)AB Sciex公司;Anke TGL-16B離心機(jī) 上海安亭科學(xué)儀器廠;BSA224S電子天平 德國(guó)賽多利斯公司;R-210旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀 瑞士步琦公司;HH-S型水浴鍋 鞏義市英峪予華儀器廠;KQ-500B型超聲波清洗器 昆山市超聲儀器有限公司,超聲功率500 W、40 kHz。

1.2 實(shí)驗(yàn)方法

1.2.1 供試品溶液的制備 取太子參樣品粉碎,過(guò)二號(hào)篩,精密稱(chēng)取2.0 g干燥粉末置于100 mL錐形瓶中,加60 mL雙蒸水,回流提取3次,每次提取時(shí)間為70 min,過(guò)濾,合并濾液,用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀濃縮至干,殘?jiān)与p蒸水溶解并轉(zhuǎn)移至100 mL容量瓶中,加雙蒸水稀釋至刻度,搖勻即得。

1.2.2 色譜和質(zhì)譜條件色譜條件 Agilent ZORBAX SB-C18色譜柱(250 mm×4.6 mm×5 μm);流動(dòng)相為含0.1%甲酸的水(A)和甲醇(B)。梯度洗脫程序:0～12 min、2%～5% B,12～15 min、5%～10% B。流速1.0 mL/min;柱溫30 ℃;進(jìn)樣量10 μL;檢測(cè)波長(zhǎng)260 nm。

質(zhì)譜條件電噴霧離子源(ESI)正離子模式;質(zhì)量掃描范圍m/z 100～1500;噴霧電壓5 kV;氣簾氣30 L/min;霧化氣55 L/min;輔助氣55 L/min;離子源溫度500 ℃;碰撞室射出電壓(CXP)9 V,去簇電壓(DP)100 V。

1.2.3 化學(xué)成分的鑒定 通過(guò)一級(jí)質(zhì)譜確定精確相對(duì)分子質(zhì)量,二級(jí)質(zhì)譜獲得裂解信息,結(jié)合HMDB(http://www. hmdb. ca/)和METLIN(http://metlin. Scripps. edu/)數(shù)據(jù)庫(kù)搜索及已報(bào)道文獻(xiàn)推測(cè)化合物的結(jié)構(gòu)式信息。

1.2.4 色譜圖處理與統(tǒng)計(jì) 分析將原始質(zhì)譜數(shù)據(jù)和色譜圖導(dǎo)入Peakview 1.2進(jìn)行峰匹配、峰對(duì)齊、濾噪處理等,得到提取離子流圖。結(jié)果保存為文本格式。將文本文件(調(diào)整格式后)導(dǎo)入SIMCA-P 11.5(Umetrics,umea,Sweden)進(jìn)行主成分分析(principal component analysis,PCA)及偏最小二乘法分析(partial least squares discriminant analysis,PLS-DA)找出差異化學(xué)成分。根據(jù)分析結(jié)果,對(duì)其貢獻(xiàn)較大的差異成分進(jìn)行半定量分析(Origin 9.0,Origin Lab,USA),其水溶性化學(xué)成分的相對(duì)含量的高低用平均峰面積作比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 色譜條件的優(yōu)選

植物提取物成分復(fù)雜,為了有效地進(jìn)行組分分離,應(yīng)當(dāng)選擇較長(zhǎng)的色譜柱[13],實(shí)驗(yàn)中采用柱長(zhǎng)為250 mm的色譜柱,可使各組分得到較好分離,如圖1所示。流動(dòng)相的選擇分別考察了甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.1%甲酸水、乙腈-0.1%甲酸水,結(jié)果表明甲醇-0.1%甲酸水體系峰型較好,最終確定了最佳的色譜條件。

表1 太子參水提物中主要化學(xué)成分的質(zhì)譜參數(shù)

圖1 不同產(chǎn)地太子參的UPLC-Triple TOF-MS/MS基峰強(qiáng)度離子流色譜圖(BPIC)Fig.1 UPLC-Triple TOF-MS/MSbase peak intensity chromatogram ofPseudostellariae Radix samples collected from different habitats注:各圖譜中太子參產(chǎn)地為:A. 福建柘榮；B.貴州施秉；C. 安徽宣城；D. 江蘇句容。

2.2 太子參水提物中化學(xué)成分的鑒定

一級(jí)質(zhì)譜獲得分子量信息,二級(jí)質(zhì)譜獲得裂解信息,通過(guò)HMDB和METLIN數(shù)據(jù)庫(kù)搜索及相關(guān)文獻(xiàn)報(bào)道推測(cè)化合物的結(jié)構(gòu)式信息,共鑒定了17種成分,包括氨基酸5個(gè)、核苷及核苷酸8個(gè)、有機(jī)酸1個(gè)、糖類(lèi)1個(gè)、其它類(lèi)2個(gè)?；衔飳?duì)應(yīng)峰的相關(guān)信息見(jiàn)表1。

2.3 多元統(tǒng)計(jì)分析

UPLC-Triple TOF-MS/MS基峰強(qiáng)度離子流色譜圖可以提供大量的信息,但都較為復(fù)雜,直觀分析很難確定不同產(chǎn)地太子參水提物中化學(xué)成分之間的差異。因此需要進(jìn)一步采用多元統(tǒng)計(jì)分析對(duì)其化學(xué)成分差異進(jìn)行準(zhǔn)確描述。

圖2 不同產(chǎn)地太子參水提物的PCA得分圖Fig.2 PCA scores of Pseudostellariae Radixwater extracts in different habitats注:4組樣品的產(chǎn)地分別為:A.福建柘榮；B.貴州施秉；C.安徽宣城；D.江蘇句容。

圖3 不同產(chǎn)地太子參水提物的PLS-DA得分圖和載荷圖Fig. 3 PLS-DA scores plot and loading plot of samples from different habitats of Pseudostellariae Radix注:得分圖(A、C、E、G、I、K);載荷圖(B、D、F、H、J、L)。A(B).福建柘榮與貴州施秉；C(D).福建柘榮與安徽宣城；E(F).福建柘榮與江蘇句容；G(H).貴州施秉與安徽宣城；I(J).貴州施秉與江蘇句容；K(L).安徽宣城與江蘇句容。

2.3.1 PCA分析主成分分析(PCA)旨在用降維的思想,將原本大量的具有一定相關(guān)性的指標(biāo)重新組合成一組新的互相無(wú)關(guān)的綜合指標(biāo)來(lái)代替原來(lái)的指標(biāo),是考察多個(gè)變量間相關(guān)性的一種多元統(tǒng)計(jì)方法[14-15]。對(duì)不同產(chǎn)地太子參樣品UPLC-Triple TOF-MS/MS色譜圖進(jìn)行數(shù)據(jù)處理,得到914個(gè)變量,樣品組有4組,對(duì)其進(jìn)行PCA分析(圖2)。從前兩個(gè)主成分(PC1:34.3%;PC2:24.6%)組成的得分圖中可以直觀地看出4個(gè)不同產(chǎn)地太子參可明顯分開(kāi),表明其在代謝組成上有明顯不同,化學(xué)組成差異較大。不同產(chǎn)地太子參組內(nèi)均一性較好,即說(shuō)明化學(xué)物質(zhì)組成接近。

圖4 不同產(chǎn)地太子參水提物中差異化學(xué)成分相對(duì)峰面積比較結(jié)果Fig. 4 The comparison of relative contents of different metabolites from different habitats of Pseudostellariae Radix注:A.福建柘榮與貴州施秉；B.福建柘榮與安徽宣城；C.福建柘榮與江蘇句容；D.貴州施秉與安徽宣城；E.貴州施秉與江蘇句容；F.安徽宣城與江蘇句容。

2.3.2 PLS-DA分析 為進(jìn)一步確定不同產(chǎn)地太子參水提物中差異化學(xué)成分,采用有監(jiān)督的偏最小二乘法-顯著性分析(PLS-DA)分別對(duì)4個(gè)產(chǎn)區(qū)兩兩之間作進(jìn)一步分析[16]。福建柘榮太子參與貴州施秉太子參的PLS-DA得分圖顯示兩者可以明顯分開(kāi)(圖3A);模型驗(yàn)證結(jié)果(R2=64.1%,Q2=52.3%)說(shuō)明其模型可靠有效相應(yīng)的載荷圖(圖3B)顯示,對(duì)兩組分類(lèi)貢獻(xiàn)較大的差異性成分為精氨酸、5-甲基胞苷、異麥芽糖、異丁?；拾彼帷⑾汆堰?、鳥(niǎo)嘌呤、組氨酸和腺苷。福建柘榮與安徽宣城太子參的PLS-DA得分圖顯示兩產(chǎn)地間太子參可明顯區(qū)分(圖3C);模型驗(yàn)證結(jié)果(R2=70.1%,Q2=56.3%)顯示模型可靠有效;載荷圖(圖3D)顯示,月桂酸、5-甲基胞苷、組氨酸、尿苷-5′-單磷酸、異麥芽糖、腺嘌呤、Diphenhydramine、腺苷和肌苷為影響兩組分類(lèi)差異較大的差異性成分。福建柘榮與江蘇句容太子參的PLS-DA得分圖(圖3E)可以明顯將兩組區(qū)分;模型結(jié)果(R2=73.7%,Q2=63%)也證明其模型有效;載荷圖中(圖3F)顯示,影響兩組間差異的化學(xué)成分有5-甲基胞苷、N-乙酰-5-甲氧基色胺、月桂酸、尿苷-5′-單磷酸、異麥芽糖、異丁?；拾彼?、腺嘌呤和組氨酸。貴州施秉與安徽宣城太子參的PLS-DA得分圖(圖3G)可以看出兩組明顯分開(kāi);且模型結(jié)果(R2=74.3%,Q2=55.8%)也證明其模型有效;載荷圖中(圖3H)顯示,對(duì)兩組分類(lèi)貢獻(xiàn)較大的差異性成分為異麥芽糖、腺嘌呤、鳥(niǎo)嘌呤、腺苷、月桂酸、5-甲基胞苷和三磷酸鳥(niǎo)苷。貴州施秉與江蘇句容太子參PLS-DA散點(diǎn)圖(圖3I)顯示兩產(chǎn)地明顯分開(kāi);模型結(jié)果(R2=74.8%,Q2=66.2%)也證明其模型有效;載荷圖表明對(duì)兩組分類(lèi)貢獻(xiàn)較大的差異性成分為月桂酸、尿苷-5′-單磷酸、異丁?；拾彼帷⒔M氨酸、腺苷、鳥(niǎo)苷、5-甲基胞苷、谷氨酸、N-乙酰-5-甲氧基色胺和苯丙氨酸(圖3J)。安徽宣城和江蘇句容產(chǎn)太子參的PLS-DA得分圖(圖3K)可知兩產(chǎn)地的太子參樣品得到明顯區(qū)別;其模型結(jié)果(R2=73.1%,Q2=44.9%)也證明其可靠有效;圖3L的載荷圖表示對(duì)兩組分類(lèi)貢獻(xiàn)較大的差異化學(xué)成分為N-乙酰-5-甲氧基色胺、Diphenhydramine、月桂酸、精氨酸、谷氨酸、尿苷-5′-單磷酸、異麥芽糖、腺嘌呤、肌苷和苯丙氨酸。

2.4 差異性化學(xué)成分相對(duì)含量的變化

提取差異成分在各組間對(duì)應(yīng)的峰強(qiáng)度數(shù)值以代表其量,對(duì)各產(chǎn)地太子參樣品間同一物質(zhì)峰強(qiáng)度的平均值和標(biāo)準(zhǔn)差進(jìn)行計(jì)算和作圖,能夠得到各差異成分在不同組間的變化[17],如圖4?？傮w趨勢(shì)為:與福建柘榮太子參相比,貴州施秉太子參中精氨酸、異麥芽糖、腺嘌呤的含量較高(圖4A);安徽宣城太子參中月桂酸、5-甲基胞苷、組氨酸的含量較高(圖4B);江蘇句容太子參樣品中5-甲基胞苷、N-乙酰-5-甲氧基色胺的含量相對(duì)于福建柘榮太子參較高(圖4C)。與貴州施秉太子參相比,安徽宣城太子參中的異麥芽糖、腺嘌呤、鳥(niǎo)嘌呤、腺苷的含量相對(duì)較低(圖4D);江蘇句容太子參中月桂酸、尿苷-5′-單磷酸、異丁?；拾彼?、組氨酸、腺苷、鳥(niǎo)苷和苯丙氨酸的含量相對(duì)較低(圖4E)。最后將安徽宣城與江蘇句容太子參中差異性成分進(jìn)行比較,除N-乙酰-5-甲氧基色胺和Diphenhydramine外,其余的月桂酸、精氨酸、谷氨酸、尿苷-5′-單磷酸、異麥芽糖、腺嘌呤、肌苷和苯丙氨酸8個(gè)差異化學(xué)成分的含量在安徽宣城太子參中相對(duì)較高(圖4F)。

3 結(jié)論

本實(shí)驗(yàn)采用基于UPLC-Triple TOF-MS/MS結(jié)合PCA、PLS-DA分析對(duì)國(guó)內(nèi)4個(gè)主產(chǎn)區(qū)太子參的水提物化學(xué)組成進(jìn)行了比較。結(jié)果表明,太子參水提物中主要含有氨基酸、核苷、糖、有機(jī)酸等17種化學(xué)成分,其主成分為精氨酸;4個(gè)不同產(chǎn)地太子參水提物中化學(xué)成分差異明顯,福建柘榮太子參水提物中異丁酰基甘氨酸、鳥(niǎo)嘌呤、腺苷含量較高,貴州施秉太子參水提物中含有較多的尿苷-5′-單磷酸、異麥芽糖,安徽宣城太子參水提物中精氨酸、月桂酸、5-甲基胞苷、谷氨酸、組氨酸和苯丙氨酸含量較高,江蘇句容太子參水提物中含有較多的N-乙酰-5-甲氧基色胺?；瘜W(xué)成分是中藥材的表型之一,其生物合成與所處的生長(zhǎng)環(huán)境密切相關(guān),福建柘榮、貴州施秉、安徽宣城、江蘇句容4個(gè)產(chǎn)區(qū)的生態(tài)環(huán)境不同,導(dǎo)致所產(chǎn)太子參水提物化學(xué)組成呈現(xiàn)出不同程度的差異,這種環(huán)境因素對(duì)藥材化學(xué)成分的影響作用值得進(jìn)一步深入研究。

本實(shí)驗(yàn)借鑒植物代謝組學(xué)的研究方法,對(duì)不同產(chǎn)地太子參水提物中化學(xué)組成進(jìn)行了分析,為揭示生態(tài)環(huán)境對(duì)太子參水溶性化學(xué)成分積累的影響規(guī)律及探討太子參藥材的品質(zhì)形成機(jī)制提供基礎(chǔ)資料,同時(shí)也為適合于中藥傳統(tǒng)湯劑應(yīng)用特點(diǎn)的藥材水提物化學(xué)組成比較提供了一種新的研究思路。然而,中藥材的水提物化學(xué)組成非常復(fù)雜,本研究鑒定出的太子參代謝產(chǎn)物有限,尤其是未檢測(cè)到環(huán)肽、皂苷等特征性成分,后續(xù)研究將探索聯(lián)用多種分析技術(shù)以全面表征水提物復(fù)雜的化學(xué)組成。

[1]國(guó)家藥典委員會(huì). 中華人民共和國(guó)藥典2010年版·一部[S].北京:中國(guó)醫(yī)藥科技出版社,2010:62.

[2]傅興圣,劉訓(xùn)紅,許虎,等.太子參研究現(xiàn)狀與研發(fā)趨勢(shì)[J]. 中國(guó)新藥雜志,2012,21(7):757-760.

[3]鄒立思,傅興圣,劉訓(xùn)紅,等. 太子參藥材中環(huán)肽A、B含量分析及其動(dòng)態(tài)研究[J]. 南京中醫(yī)藥大學(xué)學(xué)報(bào),2013,29(2):

175-178.

[4]Tan NH,Zhou J,Chen CX,et al. Cyclopeptides from the roots of Pseudostellariaheterophylla[J]. Phytochemistry,1993,32(5):1327-1330.

[5]Morita H,Kayashita T,Kobata H,et al.Pseudostellarins A-C,new tyrosinase inhibitory cyclic peptides from Pseudostellariaheterophylla[J]. Tetrahedron,1994,50(23):6797-6804.

[6]Morita H,Kayashita T,Kobata H,et al. Pseudostellarins D-F,new tyrosinase inhibitory cyclic peptides from Pseudostellariaheterophylla[J]. Tetrahedron,1994,50(33):9975-9982.

[7]宋建平,曾艷萍,劉訓(xùn)紅,等. HPLC-ELSD測(cè)定不同產(chǎn)地太子參中多糖的含量[J]. 上海中醫(yī)藥雜志,2008,42(10):77-79.

[8]彭愛(ài)紅,熊何建,顏宇航. 太子參總皂苷的含量測(cè)定方法研究[J]. 四川師范大學(xué)學(xué)報(bào),2006,29(6):743-746.

[9]彭華勝,劉文哲,胡正海,等. 栽培太子參塊根中皂苷的組織化學(xué)定位及其含量變化[J]. 分子細(xì)胞生物學(xué)報(bào),2009,42(1):1-10.

[10]李坤平,高崇凱,李衛(wèi)民. UPLC/ESI-TOF-MS/MS分析蛇床子提取物中香豆素類(lèi)化合物[J]. 中成藥,2009,31(4):584-587.

[11]賈偉,蔣健,劉平,等. 系統(tǒng)生物學(xué)方法在中醫(yī)藥研究中的應(yīng)用[J]. 中國(guó)中藥雜志,2006,31(8):621-624.

[12]趙燕,丁立建. 核磁共振技術(shù)在植物代謝研究中的應(yīng)用[J]. 現(xiàn)代儀器與醫(yī)療,2013,19(1):21-24.

[13]張維冰,王智聰,張凌怡. 超高效液相色譜-二極管陣列檢測(cè)-串聯(lián)質(zhì)譜法測(cè)定菊花中的10種咖啡?；鼘幩岷?2種黃酮類(lèi)化合物[J]. 分析化學(xué),2013,44(12):1851-1861.

[14]何盼,李震宇,范圣此,等. 基于代謝組學(xué)技術(shù)和ITS2序列的恒山黃芪與川黃芪差異性研究[J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào),2013,48(10):1595-1601.

[15]梁逸曾,易倫朝. 化學(xué)計(jì)量學(xué)基礎(chǔ)[M]. 上海：華東理工大學(xué)出版社. 2010,154-159.

[16]米霞,李震宇,秦雪梅,等. 基于NMR代謝組學(xué)技術(shù)的不同性狀款冬花藥材的化學(xué)比較[J]. 藥學(xué)學(xué)報(bào),2013,48(11):1692-1697.

[17]李飛,王宇光,楊亮,等. UPLC-Q-TOF/MS分析不同比例丹參配伍藜蘆毒性生物堿變化規(guī)律[J]. 化學(xué)學(xué)報(bào),2012,70(21):2257-2264.

Composition analysis of the chemical composition of water extract in Radix Pseudostellariae from different habitats by UPLC-Triple TOF-MS/MS

HOU Ya1,MA Yang1,ZOU Li-si1,LIU Xun-hong1，*,LUO Yi-yuan1,LIU Juan-xiu1,LAN Cai-wu2,YUAN Ji-duan3

(1.Nanjing University of Chinese Medicine,Nanjing,210023,China;2.Guizhou Chang Hao Chinese Medicine Co.,Ltd.,Kaili 556000,China;3.Zherong Pharmaceutical Development Bureau,Zherong 355300,China)

Objective:To compare the chemical composition of water extract in Radix Pseudostellariae from different areas with multivariate staticstical based on UPLC-Triple TOF-MS/MS. Peak matching,peak alignment and noise filtering were used in analyzing mass spectrometry data. Accurate m/z value analysis of MS data based on software of database search and MS/MS fragment analysis were applied to constituents identification. Data processing using PCA and PLS-DA to investigate the difference of chemical composition in the water extract of Radix Pseudostellariae from different habitats. The results showed that material mainly contains amino acids,nucleosides,sugar,organic acids and other 17 kinds of chemical constituents in Radix Pseudostellariae water extracts,the main component wasarginine. The differences of chemical components in water extract of Radix Pseudostellariae from 4 different habitatswere distinct.Isobutyrylglycine,Guanine and Adenosinewere greater in Radix Pseudostellariae from Zherong,Fujian;the sample fromShibing,Guizhou contained more material in Uridine-5 ′-monophosphate and Isomaltose;the sample fromXuancheng,Anhui contained more material in Arginine,Dodecanoic acid,5-methyl cytosine,L-glutamic acid,L-Histidine and Phenylalanine,and the water extract of Radix Pseudostellariae from JurongJiangsu contained more Melatonin.

Radix Pseudostellariae;UPLC-Triple TOF-MS/MS;water-soluble constituents

2014-10-21

侯婭(1989-)，女，在讀碩士研究生，研究方向：中藥品質(zhì)評(píng)價(jià)研究,E-mail:YP0317@163.com。

*通訊作者:劉訓(xùn)紅(1959-)，男，碩士，教授，主要從事中藥資源化學(xué)與品質(zhì)評(píng)價(jià)研究,E-mail:liuxunh1959@sohu.com。

國(guó)家自然科學(xué)基金項(xiàng)目(81274016；81473312)；國(guó)家科技支撐計(jì)劃項(xiàng)目(2011BAI13B04)；江蘇高校優(yōu)勢(shì)學(xué)科建設(shè)工程資助項(xiàng)目(ysxk-2014)。

TS201.2

A

1002-0306(2015)15-0275-06

10.13386/j.issn1002-0306.2015.15.049