阿司匹林抑制冠心病患者外周血單核細(xì)胞脂肪酸合酶表達(dá)

梁少蘭，杜作義，李自成，靳 文

(廣東省第二人民醫(yī)院 心血管內(nèi)二科，廣東 廣州 510371)

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阿司匹林抑制冠心病患者外周血單核細(xì)胞脂肪酸合酶表達(dá)

梁少蘭*，杜作義，李自成，靳 文

(廣東省第二人民醫(yī)院 心血管內(nèi)二科，廣東 廣州 510371)

脂肪酸合酶(fatty acid synthase，F(xiàn)ASN)是催化乙酰輔酶A和丙二酰輔酶A合成內(nèi)源性長(zhǎng)鏈脂肪酸的關(guān)鍵酶[1]，單核巨噬細(xì)胞通過(guò)表面的CD36受體攝取氧化型低密度脂蛋白，在FASN的作用下形成泡沫細(xì)胞，干擾FASN基因可以顯著減少泡沫細(xì)胞的生成。本研究探討了阿司匹林對(duì)單核細(xì)胞脂肪酸合酶的影響。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 臨床病例資料:收集2013年3月至2014年5月本院診治的冠心病患者46例，其中男23例，女23例，年齡56～82歲，平均(68.4±11.2)歲。排除各種急、慢性炎性反應(yīng)和服用維生素E等抗感染及抗氧化作用的藥物者。另取本院同期健康體檢者40例作為正常對(duì)照組，其中男20例，女20例，年齡54～80歲，平均(68.1±9.7)歲。本研究符合廣東省第二人民醫(yī)院倫理委員會(huì)的各項(xiàng)規(guī)定, 受試者簽署知情同意書。

1.1.2 實(shí)驗(yàn)試劑:Percoll單核細(xì)胞分離液(天津?yàn)笊镏破房萍加邢挢?zé)任公司)；熒光定量PCR檢測(cè)試劑盒(大連寶生物科技有限公司)；PCR引物(上海生工生物科技技術(shù)有限公司)；FASN、白介素- 6(IL- 6)和腫瘤壞死因子-α(TNF-α)檢測(cè)試劑盒(北京四正柏生物科技有限公司)。

1.2 方法

1.2.1 單核細(xì)胞的分離及處理:取受試者10 mL靜脈血加入到10 mL單個(gè)核細(xì)胞分離液中，1 500×g離心20 min，吸取中間單核細(xì)胞層，將單核細(xì)胞培養(yǎng)于5% CO2，3 7℃條件下。實(shí)驗(yàn)分為：陰性對(duì)照、1、2和4 μmol/L阿司匹林司4組(每組46例)，每組調(diào)整上述收集的單核細(xì)胞濃度為106個(gè)細(xì)胞/mL，加入不同濃度的阿司匹林作用細(xì)胞12 h，檢測(cè)相關(guān)指標(biāo)的變化，每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.2 熒光定量PCR檢測(cè)FASN基因的表達(dá):調(diào)整上述四組(每組46例)收集的單核細(xì)胞密度為106個(gè)細(xì)胞/mL，按試劑盒說(shuō)明書擴(kuò)增FASN基因，引物序列為5′-TGCGGTTATG GCAATTGCGAAGC-3′(sence)和5′-CTTCAAATTCGGATATG CTGGAAT-3′(antisence)，GAPDH基因作為內(nèi)對(duì)照，F(xiàn)ASN基因的表達(dá)量使用2-△△Ct評(píng)估。每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.2.3 FASN、IL- 6和TNF-α水平的測(cè)定:取單核細(xì)胞分離時(shí)的血漿400 μL，-70 ℃冰箱凍存待測(cè)。收集陰性對(duì)照、1、2和4 μmol/L阿司匹林4組(每組46例)處理單核細(xì)胞12 h后的培養(yǎng)液上清，使用試劑盒ELISA法檢測(cè)FASN、IL- 6和TNF-α表達(dá)水平。每個(gè)實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析:使用SPSS16.0進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，兩樣本均數(shù)比較采用t檢驗(yàn)，多組比較使用方差分析，連續(xù)性的變量之間的相關(guān)性使用pearson 相關(guān)分析。

2 結(jié)果

2.1 健康對(duì)照和冠心病患者單核細(xì)胞FASN表達(dá)及其與IL- 6和TNF-α表達(dá)水平的相關(guān)性分析:冠心病組FASNmRNA和蛋白表達(dá)量以及IL- 6和TNF-α表達(dá)水平均顯著高于健康對(duì)照組(P<0.01)。相關(guān)分析顯示冠心病組FASN表達(dá)與患者血漿中IL- 6和TNF-α水平呈顯著正相關(guān)(P<0.05)(表1)。

2.2 阿司匹林對(duì)單核細(xì)胞FASN表達(dá)的影響:4組之間FASNmRNA和蛋白表達(dá)量以及IL- 6、TNF-α水平均顯著性差異(P<0.05)(表2)。

表1 冠心病患者和對(duì)照組單核細(xì)胞FASN表達(dá)的比較Table 1 Comparision of FASN Expression between CHD and control group(±s)

*P<0.01 compared with control.

表2 阿司匹林對(duì)單核細(xì)胞FASN表達(dá)的影響Table 2 Effects of aspirin on FASN expression(±s, n=46)

*P<0.05;#P<0.01 compared with control；▲P<0.05，▲▲P<0.01 compared with 1 μmol/L aspirin；△P<0.05 compared with 2 μmol/L aspirin.

3 討論

脂肪酸合酶(FASN)可以促進(jìn)單核巨噬細(xì)胞對(duì)氧化型低密度脂蛋白的攝取，抑制膽固醇流出單核巨噬細(xì)胞，借此參與到粥樣斑塊的形成過(guò)程中[2]。本研究的觀察顯示了冠心病組單核細(xì)胞的FASN基因的表達(dá)量顯著高于健康對(duì)照組，說(shuō)明了冠心病患者單核細(xì)胞FASN處于高表達(dá)狀態(tài)。研究發(fā)現(xiàn)阿司匹林在動(dòng)脈粥樣硬化發(fā)生、發(fā)展的各個(gè)環(huán)節(jié)都有干預(yù)作用[3]，本研究的結(jié)果顯示阿司匹林可以顯著減低FASN的表達(dá)，同時(shí)IL- 6和TNF-α表達(dá)水平也相應(yīng)減低。說(shuō)明了以FASN為靶向的治療可以起到干預(yù)冠心病進(jìn)展的作用。

本研究為阿司匹林對(duì)冠心病的治療提供了一種可能的作用機(jī)制。但其具體的作用機(jī)制和臨床療效還有待進(jìn)一步研究。

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2015- 03- 27

2015- 06- 30

1001-6325(2015)11-1544-02

R541.4

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*通信作者(corresponding author)：shallen_liang@sohu.com