miR-128在胃癌中的表達(dá)及臨床意義的研究

夏靜 周淑平 陳富明 謝清云 柏艷萍 楊銘

miR-128在胃癌中的表達(dá)及臨床意義的研究

夏靜 周淑平 陳富明 謝清云 柏艷萍 楊銘

目的 研究miR-128在胃癌中的表達(dá)及臨床意義。方法 采用原位雜交法檢測112例胃癌組織及癌旁正常組織的表達(dá)，統(tǒng)計(jì)分析miR-128與胃癌患者臨床參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果 miR-128在胃癌中表達(dá)下調(diào)，在胃癌組織中陽性表達(dá)35例，陰性表達(dá)77例，而在癌旁正常組織中陽性表達(dá)89例，陰性表達(dá)23例；與患者的TNM分期相關(guān)，TNM I～I(xiàn)I期患者中miR-128低表達(dá)的42例，高表達(dá)28例，TNM III～I(xiàn)V期患者中miR-128低表達(dá)的35例，高表達(dá)的7例。結(jié)論 miR-128在胃癌組織中表達(dá)低于癌旁正常組織，與胃癌患者TNM分期，可作為胃癌分期預(yù)測的潛在分子標(biāo)志物。

胃癌；miR-128；TNM分期

胃癌是一個(gè)嚴(yán)重威脅人類健康的惡性腫瘤，其發(fā)病率居全球惡性腫瘤發(fā)病的第4位，死亡率居全球惡性腫瘤導(dǎo)致死亡的第2位[1]。胃癌的5年生存率在過去的10年有較大的提高，但是這個(gè)5年生存率的提高僅限于胃癌早期的患者[2]。胃癌晚期或有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移患者的5年生存率低于5%，中位總生存時(shí)間低于1年[3]。

miRNA是，約18～23 nt長的微小非編碼RNA，在腫瘤中表達(dá)失調(diào)，可發(fā)揮抑瘤基因或瘤基因的功能，并通過調(diào)控多個(gè)信號(hào)通路影響腫瘤細(xì)胞的功能。miRNA通過轉(zhuǎn)錄后抑制，調(diào)控靶基因的表達(dá)。成熟的miRNA通過識(shí)別靶基因3’非翻譯區(qū)（untranslated region，UTR），與3’UTR結(jié)合，降解mRNA或抑制mRNA翻譯[4]。miR-128在多種腫瘤中表達(dá)下降，具有抑制腫瘤的作用。

本研究擬通過免疫組化法檢測miR-128在胃癌組織及癌旁正常組織中的表達(dá)情況，統(tǒng)計(jì)分析miR-128在胃癌組織中表達(dá)與臨床參數(shù)的關(guān)系，從而確定miR-128在胃癌中的表達(dá)及與臨床參數(shù)的關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料 收集2011年1月～2013年12月在南華大學(xué)附屬永州市中心醫(yī)院就診的112例原發(fā)性胃癌患者的腫瘤組織及癌旁正常組織。男72例，女50例；年齡31～73歲，其中年齡≥54歲的患者69例，＜54歲的患者43例；高分化患者39例，中分化患者50例，低分化患者23例；腫塊大小≥3 cm的患者65例，＜3 cm的患者57例；TNM分期I～Ⅱ期患者70例，Ⅲ～Ⅳ期患者42例；有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者79例，無淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的患者33例。上述組織標(biāo)本的使用已由永州市中心醫(yī)院倫理委員會(huì)同意。

1.2 主要試劑 原位雜交試劑盒購自武漢博士德公司。

1.3 原位雜交法 根據(jù)試劑盒說明書進(jìn)行操作。

1.4 原位雜交檢測法結(jié)果分析 根據(jù)組織陽性染色程度計(jì)分：陰性，1分；++，2分；++，3分；+++，4分；根據(jù)組織中的染色陽性細(xì)胞數(shù)進(jìn)行計(jì)分：1分，0%～25%；2分，26%～50%；3分，51%～75%；4分，76%～100%。根據(jù)以上兩種方法得到的分?jǐn)?shù)相乘多得的數(shù)值判定表達(dá)情況，＜8為低表達(dá)，≥8為高表達(dá)。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS 17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件分析數(shù)據(jù)。計(jì)量資料2組或2組以上采用student t-test或One-way ANOVA分析；率的比較用χ2檢驗(yàn)和Fisher’s exact test分析。以P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 miR-128在胃癌組織及癌旁正常組織中的表達(dá)情況原位雜交檢測法結(jié)果顯示，miR-128在胃癌組織中的表達(dá)陽性率明顯低于同一患者對(duì)應(yīng)癌旁正常組織，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.001）。見表1。

表1 miR-128在胃癌及癌旁正常胃黏膜組織中的表達(dá)（n）

2.2 miR-128與胃癌患者臨床參數(shù)的關(guān)系 結(jié)果顯示，miR-128的表達(dá)與患者的性別、年齡、組織學(xué)分級(jí)、腫瘤大小及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無關(guān)，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。miR-128的表達(dá)與胃癌患者TNM分期相關(guān)，TNM I～Ⅱ期患者中miR-128高表達(dá)比例高于TNM Ⅲ～Ⅳ分期患者，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。見表2。

3 討論

研究表明，多個(gè)miRNA參與了胃癌耐藥機(jī)制的調(diào)控。miR-103/107在胃癌細(xì)胞中表達(dá)降低，當(dāng)增加miR-103/107的表達(dá)可促進(jìn)SGC 7901/ADR細(xì)胞對(duì)多柔比星的敏感性，并且可抑制耐藥蛋白P-gp的表達(dá)[5]。miR-503通過靶向IGF 1R和BCL-2，抑制胃癌SGC 7901/DDP增殖，增加SGC 7901/DDP對(duì)順鉑的敏感性[6]。miR-106 a通過促進(jìn)ADR外流，抑制化療藥物誘導(dǎo)的細(xì)胞凋亡，靶向抑制RUNX 3誘導(dǎo)胃癌細(xì)胞耐藥[7]。

miR-128在多種腫瘤中表達(dá)失調(diào)，并且miR-128在不同腫瘤中的表達(dá)差異非常大。miR-128可抑制腫瘤的生長。miR-128通過抑制其靶基因BMI-1、BAG-2、 BAX、H 3f 3b及Paip 2的表達(dá)抑制頭頸部鱗癌細(xì)胞JHU-13和JHU-22的體外生長及體內(nèi)成瘤[8]。miR-128可增加化療敏感性。高表達(dá)膠質(zhì)母細(xì)胞瘤細(xì)胞中miR-128，可靶向抑制RapB介導(dǎo)的細(xì)胞骨架形成，并增加膠質(zhì)瘤細(xì)胞對(duì)他莫昔芬的敏感性[9]。miR-128具有抑制腫瘤血管生成的功能。研究表明，miR-128通過抑制其靶基因血管內(nèi)皮生長因子C（vascular endothelial growth factor-C，VEGFC）的表達(dá)，抑制人非小細(xì)胞肺癌的腫瘤形成、血管生成及淋巴管生成[10]。miR-128與預(yù)后相關(guān)。在結(jié)直腸癌患者組織中，miR-128表達(dá)降低，而miR-128低表達(dá)的患者復(fù)發(fā)率低于miR-128高表達(dá)的患者[11]。過表達(dá)急性粒細(xì)胞性白血病細(xì)胞中的miR-128可促進(jìn)細(xì)胞程序性死亡及DNA損傷，但是不能引起細(xì)胞周期阻滯和自噬[12]。研究顯示，miR-128在肝細(xì)胞癌中表達(dá)下降，其在血清中的表達(dá)可作為肝細(xì)胞癌預(yù)后預(yù)測的標(biāo)記物[13]。有研究者利用miRNA芯片、norther blot及qRT-PCR的方法檢測了miR-128在多形性膠質(zhì)瘤和成神經(jīng)管細(xì)胞瘤中表達(dá)降低[14-15]。而另一項(xiàng)研究表明miR-128在膠質(zhì)瘤患者血清中升高[16]。有人檢測了57例乳腺癌患者腫瘤組織中miR-128的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-128在化療耐藥的組織中表達(dá)下降，而在化療敏感的組織中表達(dá)升高[17]。本研究首先檢測了miR-128在胃癌組織及癌旁正常組織中的表達(dá)，結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-128在胃癌組織中的表達(dá)顯著降低，陽性率僅為31.3%，而miR-128在癌旁正常組織中的陽性率為79.5%。說明miR-128在胃癌組織中的表達(dá)是降低的。隨后，本研究統(tǒng)計(jì)分析了miR-128與胃癌患者臨床參數(shù)的關(guān)系。結(jié)果發(fā)現(xiàn)，miR-128與胃癌患者的TNM分期密切相關(guān)，而與患者的性別、年齡、腫瘤大小、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等無關(guān)。說明，miR-128可作為胃癌患者TNM分期的潛在判定指標(biāo)。

表2 miR-128表達(dá)與胃腺癌患者臨床參數(shù)的關(guān)系(n)

過表達(dá)miR-128可增加卵巢癌細(xì)胞SKOV 3/CP對(duì)順鉑的敏感性[18]?？梢?，miR-128具有增加腫瘤化療敏感性的功能，參與了腫瘤耐藥機(jī)制的調(diào)控。盡管已經(jīng)有許多關(guān)于miR-128在腫瘤中表達(dá)及作用機(jī)制的研究報(bào)道，但是miR-128在胃癌中的表達(dá)及作用尚不清楚。這將是本文作者的研究方向。

通過本研究可以確定miR-128在胃癌組織中表達(dá)降低，并且與TNM分期負(fù)相關(guān)，miR-128胃癌中可作為TNM分期預(yù)測的潛在分子生物學(xué)靶點(diǎn)。

[1] Jemal A,Bray F,Center MM,et al.Global cancer statistics[J].CA Cancer J Clin，2011,61(2):69-90.

[2] Siegel R,Naishadham D,Jemal A.Cancer statistics for Hispanics/ Latinos,2012[J].CA Cancer J Clin，2012,62(5):283-298.

[3] Power DG,Kelsen DP,Shah MA.Advanced gastric cancer--slow but steady progress[J].Cancer Treat Rev,2010,36(5):384-392.

[4] Xue J,Niu J,Wu Jand,et al.MicroRNAs in cancer therapeutic response:Friend and foe[J].World J Clin Oncol,2014,5(4):730-743.

[5] Zhang Y,Qu X,Li C,et al.miR-103/107 modulates multidrug resistance in human gastric carcinoma by downregulating Cav-1[J].Tumour Biol,2014.

[6] Wang T,Ge G,Ding Y,et al.MiR-503 regulates cisplatin resistance of human gastric cancer cell lines by targeting IGF 1R and BCL 2[J].Chin Med J(Engl),2014,127(12):2357-2362.

[7] Zhang Y,Lu Q,Cai X.MicroRNA-106 a induces multidrug resistance in gastric cancer by targeting RUNX 3[J].FEBS Lett,2013,587(18):3069-3075.

[8] Hauser B,Zhao Y,Pang X,et al.Functions of MiRNA-128 on the Regulation of Head and Neck Squamous Cell Carcinoma Growth and Apoptosis[J].PLoS One,2015,10(3):e 0116321.

[9] She X,Yu Z,Cui Y,et al.miR-128 and miR-149 enhance the chemosensitivity of temozolomide by Rap 1B-mediated cytoskeletal remodeling in glioblastoma[J].Oncol Rep,2014,32(3):957-964.

[10] Hu J,Cheng Y,Li Y,et al.microRNA-128 plays a critical role in human non-small cell lung cancer tumourigenesis,angiogenesis and lymphangiogenesis by directly targeting vascular endothelial growth factor-C[J].Eur J Cancer,2014,50(13):2336-2350.

[11] Takahashi Y,Iwaya T,Sawada G,et al.Up-regulation of NEK 2 by microRNA-128 methylation is associated with poor prognosis in colorectal cancer[J].Ann Surg Oncol,2014,21(1):205-212.

[12] Seca H,Lima RT,Almeida GM,et al.Effect of miR-128 in DNA damage of HL-60 acute myeloid leukemia cells[J].Curr Pharm Biotechnol,2014,15(5):492-502.

[13] Zhuang L,Xu L,Wang P,et al.Serum miR-128-2 Serves as a Prognostic Marker for Patients with Hepatocellular Carcinoma[J].PLoS One,2015,10(2):e 0117274.

[14] Lages E,Guttin A,El Atifi M,et al.MicroRNA and target protein patterns reveal physiopathological features of glioma subtypes[J].PLoS One,2011,6(5):e 20600.

[15] Venkataraman S,Alimova I,Fan R,et al.MicroRNA 128 a increases intracellular ROS level by targeting Bmi-1 and inhibits medulloblastoma cancer cell growth by promoting senescence[J].PLoS One,2010,5(6):e 10748.

[16] Roth P,Wischhusen J,Happold C,et al.A specific miRNA signature in the peripheral blood of glioblastoma patients[J].J Neurochem, 2011,118(3):449-457.

[17] Zhu Y,Yu F,Jiao Y,et al.Reduced miR-128 in breast tumor-initiating cells induces chemotherapeutic resistance via Bmi-1 and ABCC 5[J].Clin Cancer Res,2011,17(22):7105-7115.

[18] Li B,Chen H,Wu N,et al.Deregulation of miR-128 in ovarian cancer promotes cisplatin resistance[J].Int J Gynecol Cancer, 2014,24(8):1381-1388.

Objective To identify the expression and clinical signif i cance of miR-128 in gastric cancer. Methods The expression of miR-128 in 112 gastric cancer samples was detected by ISH. The correlation between the expression of miR-128 and clinical parameters was analyzed. Results miR-128 was downregulated in gastric cancer tissues. It negatively correlated to the TNM stage. Conclusion The expression of miR-128 was downregulated in gastric cancer tissues, correlated to TNM stage. miR-128 could be a potential biomarker in evaluating TNM stage, sensitivity to target therapy.

Gastric cancer; miR-128; TNM stage

10.3969/j.issn.1009-4393.2015.14.001

湖南 425006湖南省永州市中心醫(yī)院 （夏靜 周淑平 陳富明謝清云） 永州市職業(yè)技術(shù)學(xué)院（柏艷萍 楊銘）

楊銘 E-mail：ym 74621123@sina.com