過敏性鼻炎患者外周血CD4+T細(xì)胞表面信號(hào)淋巴細(xì)胞激活分子的表達(dá)

楊珺，耿麗娜，彭輝勇，馬永明，許化溪，王勝軍

（1.江蘇大學(xué)附屬人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇鎮(zhèn)江212002；2.江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)研究所，江蘇鎮(zhèn)江212013）

過敏性鼻炎患者外周血CD4+T細(xì)胞表面信號(hào)淋巴細(xì)胞激活分子的表達(dá)

楊珺1，2，耿麗娜1，2，彭輝勇1，2，馬永明1，許化溪2，王勝軍1，2

（1.江蘇大學(xué)附屬人民醫(yī)院檢驗(yàn)科，江蘇鎮(zhèn)江212002；2.江蘇大學(xué)醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)研究所，江蘇鎮(zhèn)江212013）

目的：探討信號(hào)淋巴細(xì)胞激活分子（signaling lymphocytic activation molecule，SLAM）在過敏性鼻炎患者外周血CD4+T細(xì)胞表面的表達(dá)及意義。方法：選擇18例過敏性鼻炎患者和16例健康體檢者，淋巴細(xì)胞分離液分離提取外周血單個(gè)核細(xì)胞，流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD4+T細(xì)胞表面SLAM的表達(dá)；同時(shí)，采用ELISA法檢測(cè)血漿中IgE的表達(dá)；分析CD4+T細(xì)胞表面SLAM表達(dá)與血漿中IgE表達(dá)的相關(guān)性。結(jié)果：過敏性鼻炎患者外周血CD4+T細(xì)胞表面SLAM的表達(dá)水平明顯低于健康體檢者（t=2.29，P＜0.05），而IgE水平明顯高于健康體檢者（t=2.740，P＜0.01）；過敏性鼻炎患者血漿中IgE的表達(dá)與CD4+T表面SLAM的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.484 8，P＜0.05）。結(jié)論：過敏性鼻炎患者外周血CD4+T細(xì)胞表面SLAM表達(dá)降低，在一定程度上可反映疾病的嚴(yán)重程度。

過敏性鼻炎；CD4+T細(xì)胞；信號(hào)淋巴細(xì)胞激活分子

過敏性鼻炎患者機(jī)體接觸過敏原后，產(chǎn)生特異性IgE并介導(dǎo)Ⅰ型超敏反應(yīng)引起一系列鼻炎癥狀，包括鼻塞、鼻癢、噴嚏、清涕，鼻黏膜蒼白等［1］，其外周血中CD4+T細(xì)胞亞群比例發(fā)生變化，細(xì)胞因子的產(chǎn)生發(fā)生紊亂，即Th1/Th2免疫失衡，Th2免疫反應(yīng)占優(yōu)勢(shì)，Th2類細(xì)胞因子IL-4、IL-5、IL-13等分泌增加，從而促進(jìn)B細(xì)胞分泌IgE［2］。信號(hào)淋巴細(xì)胞激活分子（signaling lymphocytic activation molecule，SLAM）是一種細(xì)胞膜表面糖蛋白，屬SLAM家族的第1個(gè)成員，又稱CD150，表達(dá)于B細(xì)胞、T細(xì)胞、單核細(xì)胞等表面，參與免疫突觸形成，傳遞TCR共刺激信號(hào)［3］。體外SLAM單克隆抗體刺激可誘導(dǎo)外周血T細(xì)胞產(chǎn)生IFN-γ，進(jìn)而使Th2克隆向以產(chǎn)生IFN-γ為特征的Th1克隆轉(zhuǎn)變［4］，不利于IgE的產(chǎn)生。因此，我們猜測(cè)過敏性鼻炎患者體內(nèi)SLAM表達(dá)可能發(fā)生改變，從而影響Th1/Th2平衡及IgE的表達(dá)。本實(shí)驗(yàn)擬采用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)SLAM在過敏性鼻炎患者體內(nèi)CD4+T細(xì)胞表面的表達(dá)變化并分析其與疾病狀態(tài)間的關(guān)系。

1 對(duì)象與方法

1.1 研究對(duì)象

選擇2014年4月至7月江蘇大學(xué)附屬人民醫(yī)院確診的過敏性鼻炎患者18例，表現(xiàn)有鼻癢、噴嚏、大量清涕等過敏癥狀，可見鼻黏膜蒼白；年齡18～52歲，其中，男6例，女12例。另選健康體檢者16例作為對(duì)照組，無過敏性疾病史及癥狀。

1.2 材料與方法

1.2.1 外周血單個(gè)核細(xì)胞提取 采集肘靜脈血2 mL，K2EDTA抗凝，離心后移去上層血漿，PBS 1∶1稀釋血細(xì)胞，緩慢加入人淋巴細(xì)胞分離液（Ficoll分離液，天津?yàn)笊锛夹g(shù)有限公司），400×g離心20 min，吸取中間白膜層分離出外周血單個(gè)核細(xì)胞（PBMC），1 mL PBS洗滌2遍，棄上清液，加入100 μL PBS重懸細(xì)胞。

1.2.2 流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)CD4+T細(xì)胞表面SLAM的表達(dá) 表面染色采用PE-Cy5標(biāo)記的抗人CD3抗體（eBioscience公司），APC標(biāo)記的抗人CD4抗體（BioLegend公司），PE標(biāo)記的抗人SLAM（CD150）抗體（eBioscience公司），同型抗體采用小鼠IgG1，κIso對(duì)照（eBioscience公司）。將抗體加入細(xì)胞懸液，4℃避光孵育30 min。1mL PBS洗滌2遍，棄上清液，加入300μL PBS重懸細(xì)胞。用流式細(xì)胞儀（FACSCalibur，BD公司）進(jìn)行檢測(cè)分析。

1.2.3 ELISA檢測(cè)血漿IgE 采用IgE檢測(cè)試劑盒（eBioscience公司），按照說明書操作進(jìn)行檢測(cè)。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)分析

采用GraphPad Prism 5軟件分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)，數(shù)據(jù)用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示，兩組間均數(shù)比較采用獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)，相關(guān)性分析采用Pearson相關(guān)分析，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 外周血中CD4+T細(xì)胞表面SLAM的表達(dá)

流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)結(jié)果顯示，與健康體檢者比較，過敏性鼻炎患者CD4+T表面SLAM的表達(dá)明顯降低（t=2.29，P＜0.05）。見圖1。

圖1 過敏性鼻炎患者CD4+T細(xì)胞表面SLAM的表達(dá)

2.2 血漿中總IgE的表達(dá)

ELISA檢測(cè)結(jié)果顯示，與健康體檢者比較，過敏性鼻炎患者血漿中總IgE的表達(dá)水平明顯上升（t= 2.740，P＜0.01）。見圖2。

2.3 血漿中IgE表達(dá)與CD4+T細(xì)胞表面SLAM表達(dá)的相關(guān)性

相關(guān)性分析結(jié)果顯示，過敏性鼻炎患者血漿中IgE的表達(dá)與外周血CD4+T細(xì)胞表面SLAM的表達(dá)呈負(fù)相關(guān)（r=-0.484 8，P＜0.05）。見圖3。

圖2 血漿總IgE的表達(dá)

圖3 過敏性鼻炎患者血漿IgE與SLAM表達(dá)的相關(guān)性

3 討論

SLAM是屬于免疫球蛋白超家族CD2亞型的一類表面受體［5］，通過SH2區(qū)域與銜接蛋白SAP相結(jié)合，招募活化PKC-θ和BCL10，從而增強(qiáng)NF-κB的活化并影響下游分子的表達(dá)；SLAM可通過共刺激信號(hào)引起T細(xì)胞增殖，并根據(jù)不同的刺激調(diào)節(jié)CD4+T淋巴細(xì)胞、巨噬細(xì)胞、樹突狀細(xì)胞相關(guān)的細(xì)胞因子的分泌；此外，SLAM還與生發(fā)中心的形成和免疫球蛋白的產(chǎn)生有關(guān)［6］。研究發(fā)現(xiàn)，在一些自身免疫性疾病中SLAM表達(dá)升高，如實(shí)驗(yàn)性狼瘡小鼠以及人多發(fā)性硬化癥［7］。在類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎患者的滑膜液中也發(fā)現(xiàn)表達(dá)升高的可溶性SLAM［8］。上述研究提示SLAM分子在免疫失調(diào)性疾病的發(fā)生發(fā)展中起重要作用。

本研究結(jié)果表明，與健康體檢者相比，過敏性鼻炎患者外周血CD4+T細(xì)胞表面SLAM的表達(dá)明顯降低。研究表明，初始T細(xì)胞、TCRγδ+T細(xì)胞和B細(xì)胞經(jīng)激活后，細(xì)胞表面SLAM表達(dá)迅速增加；采用SLAM單克隆抗體體外刺激可引起T細(xì)胞增殖，并促進(jìn)活化的T細(xì)胞分泌IFN-γ，且在SLAM特異性單克隆抗體刺激下，即使是抗原特異的Th2也會(huì)發(fā)生該改變［4］。研究發(fā)現(xiàn)，從特應(yīng)性皮炎患者皮損組織中分離出的呈高度極化狀態(tài)的抗原特異性Th2細(xì)胞在接受體外SLAM刺激后可轉(zhuǎn)變成高表達(dá)IFN-γ的細(xì)胞群，并且該細(xì)胞群在與純化的B細(xì)胞進(jìn)行共培養(yǎng)時(shí)無法誘導(dǎo)B細(xì)胞分泌IgE［9］。以上研究提示SLAM刺激可使Th2向Th1發(fā)生轉(zhuǎn)變，從而抑制IgE的產(chǎn)生。由此我們猜測(cè)，過敏性鼻炎患者外周血CD4+T細(xì)胞表面SLAM表達(dá)降低導(dǎo)致IFN-γ產(chǎn)生減少，從而使CD4+T細(xì)胞向Th1細(xì)胞分化的能力降低，而向Th2細(xì)胞分化增強(qiáng)，最終促進(jìn)IgE產(chǎn)生。本研究ELISA結(jié)果表明，過敏性鼻炎患者血漿中IgE呈高表達(dá)，且IgE表達(dá)與CD4+T細(xì)胞表面SLAM表達(dá)呈負(fù)相關(guān)。這一結(jié)論支持了上述CD4+T細(xì)胞表面SLAM表達(dá)降低可促進(jìn)IgE產(chǎn)生的猜測(cè)；同時(shí)IgE作為評(píng)價(jià)過敏性疾病的指標(biāo)之一，可反映疾病的嚴(yán)重程度，SLAM與IgE之間明顯的相關(guān)性提示SLAM在一定程度上反映過敏性疾病的狀態(tài)。

但目前關(guān)于SLAM的研究仍然存在大量爭(zhēng)議。有研究發(fā)現(xiàn)，在SLAM基因缺陷的小鼠中，其CD4+T細(xì)胞分泌IL-4和IL-13水平下降，IFN-γ水平上升［10］，在其下游信號(hào)SAP、Fyn基因缺陷的小鼠中也發(fā)現(xiàn)了類似現(xiàn)象，說明SLAM及其相關(guān)信號(hào)通路與Th2細(xì)胞釋放因子有關(guān)。我們猜測(cè)這一差異可能是由于動(dòng)物與人類之間種屬不同或基因缺陷小鼠并不能完全模擬人體內(nèi)SLAM降低的內(nèi)環(huán)境引起。

本研究證實(shí)過敏性鼻炎患者外周血CD4+T細(xì)胞表面SLAM表達(dá)降低，SLAM是否通過調(diào)節(jié)IFN-γ的表達(dá)來發(fā)揮作用以及具體機(jī)制尚待進(jìn)一步研究與證實(shí)。

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Signaling lym phocytic activation molecule expression on CD4+T cells surface in patients w ith allergic rhinitis

YANG Jun1，2，GENG Li-na1，2，PENG Hui-yong1，2，MA Yong-ming1，XU Hua-xi2，WANG Sheng-jun1，2
（1.Department of Clinical Laboratory，the Affiliated People′s Hospital of Jiangsu University，Zhenjiang Jiangsu 212002；2.Institute of Laboratory Medcine，School of Medicine，Jiangsu University，Zhenjiang Jiangsu 212013，China）

Objective：To explore the changes of signaling lymphocytic activationmolecule（SLAM）expression on CD4+T cells surface in patientswith allergic rhinitis and the relationship between SLAM expression and the disease state.M ethods：Eighteen patients with allergic rhinitis and sixteen healthy controls were enrolled in the study.PBMCwere isolated from the whole blood by Ficoll gradient centrifugation.The expression of SLAM on CD4+T cell surfacewas assessed by using flow cytometry，the expression of plasma IgE was tested by ELISA.Then we analyzed the correlation between SLAM expression and plasma IgE level.Results：Compared with the healthy controls，the expression of SLAM on CD4+T cell surface was significantly decreased in allergic rhinitis patients（t=2.29，P＜0.05），but the plasma IgE level was significantly increased（t=2.740，P＜0.01）；and therewas a negative correlation between SLAM expression and plasma IgE level（r=-0.484 8，P＜0.05）.Conclusion：Patientswith allergic rhinitis showed low expression of SLAM in CD4+T cells in peripheral blood，which might reflect the disease severity to some extent.

allergic rhinitis；CD4+T cells；signaling lymphocytic activation molecule

R392.8

A

1671-7783（2015）04-0346-03

10.13312/j.issn.1671-7783.y150120

國(guó)家自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目（31470881）；教育部高等學(xué)校博士學(xué)科點(diǎn)專項(xiàng)科研基金資助項(xiàng)目（20133227110008）

楊珺（1988—），女，碩士研究生；王勝軍（通訊作者），教授，博士生導(dǎo)師，E-mail：sjwjsu@aliyun.com

2015-06-01 ［編輯］ 劉星星