CA125、HE4和ATM蛋白聯(lián)合檢測(cè)對(duì)卵巢癌的診斷價(jià)值

樊 衛(wèi)，祁金友，韓 笑

（淮安市腫瘤醫(yī)院，江蘇223200）

CA125、HE4和ATM蛋白聯(lián)合檢測(cè)對(duì)卵巢癌的診斷價(jià)值

樊 衛(wèi)，祁金友，韓 笑

（淮安市腫瘤醫(yī)院，江蘇223200）

目的 探討人癌抗原125（CA125）、人類附睪蛋白4（HE4）和ATM蛋白聯(lián)合檢測(cè)對(duì)卵巢癌的診斷價(jià)值。方法 選取該院2013年6月至2015年1月病理確診的卵巢癌患者20例（卵巢癌患者組）及健康體檢者20例（健康對(duì)照組），比較CA125、HE4和ATM蛋白陽性率、靈敏度、特異性和受試者工作特征曲線下面積（AUC）。結(jié)果 卵巢癌患者組血清CA125、HE4水平明顯高于健康對(duì)照組，但卵巢癌患者組CA125檢測(cè)陽性率[75.00%（15/20）]與HE4檢測(cè)陽性率[80.0%（16/20）]比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.356）；卵巢癌患者癌變組織ATM蛋白表達(dá)陽性率[60.00%（12/20）]低于癌旁正常卵巢組織[95.0%（19/20）]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.025，P=0.020）。3項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)的AUC為0.925、靈敏度為90.0%。結(jié)論 ATM蛋白檢測(cè)在一定程度上可提高卵巢癌的診斷效能和靈敏度。

CA-125抗原； 卵巢腫瘤； ROC曲線； 人附睪蛋白4； ATM蛋白

根據(jù)《2012年中國腫瘤登記年報(bào)》報(bào)道，女性癌癥分布較分散，子宮癌、宮頸癌、卵巢癌等發(fā)病率較高。卵巢癌早期癥狀不明顯，不易被患者和醫(yī)生發(fā)現(xiàn)，因此，尋找篩查早期卵巢癌的有效方法意義重大。癌抗原125（cancer antigen 125，CA125）在卵巢癌檢測(cè)中應(yīng)用普遍且較早，但其升高在早期卵巢癌患者中僅占50.0%，檢測(cè)特異性低于12.0%，且CA125在其他惡性腫瘤，甚至非惡性疾病患者中也可見升高，因此，僅以CA125作為初篩指標(biāo)容易造成漏、誤診。近年來，人類附睪蛋白4（hu man epididymis protein 4，HE4）作為一種新的腫瘤標(biāo)志物，在卵巢癌組織中特異性高而被普遍應(yīng)用。ATM蛋白由共濟(jì)失調(diào)毛細(xì)血管擴(kuò)張征突變基因（ataxia-telangiectasia mutated gene，ATM gene）編碼，屬于一種自動(dòng)磷酸化蛋白激酶，在DNA損傷修復(fù)、細(xì)胞周期阻滯和細(xì)胞凋亡過程中發(fā)揮關(guān)鍵的調(diào)控作用[1]。本研究對(duì)20例卵巢癌患者和20例健康體檢者進(jìn)行CA125、HE4、ATM蛋白檢測(cè)，旨在探討三者聯(lián)合檢測(cè)對(duì)卵巢癌的診斷價(jià)值。

1 資料與方法

1.1 資料

1.1.1 一般資料 選取本院2013年6月至2015年1月病理確診的卵巢癌患者20例（卵巢癌患者組），年齡45～65歲，均為絕經(jīng)患者。另選取同期健康體檢者20例（健康對(duì)照組），年齡49～75歲，也均為絕經(jīng)者，且均無肝、腎等重要器官功能異常。標(biāo)本采集前研究對(duì)象均簽署臨床科研知情同意書，且本研究經(jīng)過了醫(yī)院倫理委員會(huì)批準(zhǔn)。

1.1.2 試劑與儀器 ATM蛋白試劑購于上海生工有限公司，CA125、HE4檢測(cè)采用ARCHITECT i2000SR儀及其配套試劑。

1.2 方法

1.2.1 標(biāo)本采集

1.2.1.1 CA125和HE4 采集研究對(duì)象清晨空腹靜脈血，置于肝素鈉或分離膠真空采血管中，室溫靜置30min，3 000 r/min離心3 min，取上清液。CA125、HE4檢測(cè)采用化學(xué)發(fā)光微粒子免疫分析法。

1.2.1.2 ATM蛋白 收集卵巢癌患者手術(shù)切除標(biāo)本，取相應(yīng)患者術(shù)后切除標(biāo)本的癌旁正常卵巢組織作為正常對(duì)照。收集標(biāo)本前均未給予化療和（或）放療。ATM蛋白檢測(cè)采用經(jīng)典免疫組織化學(xué)SP法。陰性對(duì)照用磷酸鹽緩沖液代替一抗，其余實(shí)驗(yàn)條件、步驟均與樣品操作相同；采用上海申工公司提供的已知陽性切片作為陽性對(duì)照，嚴(yán)格按照試劑盒說明書操作。

1.2.2 檢測(cè)結(jié)果判定

1.2.2.1 CA125和HE4 CA125＞35 U/mL、HE4＞76 pmol/L為陽性。

1.2.2.2 ATM蛋白 ATM蛋白主要表達(dá)于細(xì)胞核，部分表達(dá)于細(xì)胞質(zhì)，呈棕黃色顆粒，根據(jù)著色程度分別記0、1、2、3分。陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)：＜10.0%記0分，10.0%～＜25.0%記1分，25.0%～50.0%記2分，＞50.0%記3分。綜合判定取著色強(qiáng)度和陽性細(xì)胞百分?jǐn)?shù)分值之積：0分為陰性，記為（-）；1分以上為陽性，其中1～2分記為（1+），3～4分記為（2+），5～9分記為（3+）。臨床分期根據(jù)國際抗癌聯(lián)盟TNM分期標(biāo)準(zhǔn)。由本院2名病理科醫(yī)生在相同條件下對(duì)結(jié)果進(jìn)行判定。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 應(yīng)用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)軟件進(jìn)行數(shù)據(jù)分析。計(jì)數(shù)資料以率或構(gòu)成比表示，采用χ2檢驗(yàn)；計(jì)量資料采用中位數(shù)及四分位數(shù)描述，采用受試者工作特征曲線下面積（area under the cerve，AUC）分析CA125、HE4、ATM蛋白陽性率對(duì)卵巢癌的診斷價(jià)值。P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 兩組研究對(duì)象血清CA125、HE4檢測(cè)結(jié)果比較 卵巢癌患者組血清CA125、HE4水平明顯高于健康對(duì)照組，見表1。但卵巢癌患者組CA125檢測(cè)陽性率[75.0%（15/20）]與HE4檢測(cè)陽性率[80.0%（16/20）]比較，差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P=0.356）。

表1 兩組研究對(duì)象血清CA125、HE4檢測(cè)結(jié)果比較[中位數(shù)（四分位數(shù)）]

2.2 ATM蛋白在卵巢癌患者癌變組織和癌旁正常卵巢組織表達(dá)陽性率比較 卵巢癌患者癌變組織ATM蛋白表達(dá)陽性率[60.0%（12/20）]低于癌旁正常卵巢組織[95.0%（19/20）]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2=7.025，P=0.020）。

2.3 CA125、HE4、ATM蛋白檢測(cè)的AUC、靈敏度和特異性比較 CA125、HE4檢測(cè)的AUC分別為0.948、0.983，診斷效率較高；ATM蛋白檢測(cè)的AUC僅為0.650。單項(xiàng)檢測(cè)中HE4靈敏度最高（80.0%），ATM蛋白最低（40.0%）；3項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)的AUC為0.925、靈敏度為90.0%，見表2。

表2 CA125、HE4、ATM蛋白檢測(cè)的AUC、靈敏度和特異性比較

3 討 論

ATM蛋白是一種自動(dòng)磷酸化蛋白，含3 056個(gè)氨基酸，分布于細(xì)胞核和細(xì)胞質(zhì)中，以細(xì)胞核為主，廣泛分布于人體組織中[1]。當(dāng)DNA受損傷ATM被激活，通過磷酸化P53及其下游靶蛋白，參與細(xì)胞周期檢測(cè)點(diǎn)的監(jiān)管，使細(xì)胞周期阻滯于G1/S期、S期和G2/M期3個(gè)檢測(cè)點(diǎn)，從而完成受損DNA的修復(fù)[2]。但當(dāng)ATM發(fā)生突變而功能受損時(shí)細(xì)胞內(nèi)缺乏正常ATM蛋白，不能對(duì)受損DNA進(jìn)行修復(fù)，受損DNA隨分裂傳入子細(xì)胞中，細(xì)胞就容易發(fā)生癌變。作者已經(jīng)對(duì)ATM蛋白在食管癌組織中的表達(dá)進(jìn)行了研究，結(jié)果顯示，食管鱗癌患者癌變組織ATM蛋白表達(dá)陽性率與癌旁正常組織比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）[3-4]。本研究結(jié)果顯示，卵巢癌患者癌變組織ATM蛋白表達(dá)陽性率[60.0%（12/20）]低于癌旁正常卵巢組織[95.0%（19/20）]，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（χ2= 7.025，P=0.02）。ATM蛋白在靈敏度方面雖然不如CA125、HE4，但3項(xiàng)指標(biāo)聯(lián)合檢測(cè)的AUC、靈敏度均較理想，ATM蛋白檢測(cè)在一定程度上可提高診斷效能和靈敏度。

大量研究發(fā)現(xiàn)，許多腫瘤的發(fā)生和治療過程涉及ATM蛋白表達(dá)或活性改變，且ATM蛋白表達(dá)或活性改變影響腫瘤的治療及預(yù)后[5-7]，提示ATM基因或許能成為腫瘤治療中一個(gè)新的潛在作用靶點(diǎn)[8]。

本研究未對(duì)卵巢癌進(jìn)行病理分期和統(tǒng)計(jì)處理，主要是因?yàn)闃?biāo)本例數(shù)較少。賈曉娟等[9]分期研究結(jié)果顯示，Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期卵巢癌患者CA125檢測(cè)陽性率分別為0、62.5%、84.6%、100.0%；Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ期卵巢癌患者HE4檢測(cè)陽性率分別為0、25.0%、61.5%、100.0%，不同分期卵巢癌患者血清CA125、HE4水平有差異。

本研究結(jié)果顯示，卵巢癌患者CA125、HE4檢測(cè)陽性率、AUC、靈敏度和特異性比較，差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。不過黎明鸞等[10]和尚陳宇等[11]研究證實(shí)，卵巢癌患者手術(shù)前后血清CA125、HE4水平比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。

[1]Shiloh Y.ATM and related protein kinases：safeguarding genome integrity[J]. Nat Rev Cancer，2003，3（3）：155-168.

[2]Vodicka P，Stetina R，Polakova V，et al.Association of DNA repair polymorphisms with DNA repair functional outcomes inhealthy human subjects[J].Carcinogenesis，2007，28（3）：657-664.

[3]樊衛(wèi)，韓笑，祁金友.ATM蛋白在早期食管鱗癌組織中的表達(dá)及意義[J].國際檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志，2014，35（18）：2430-2431.

[4]韓笑，樊衛(wèi).ATM蛋白在淋巴結(jié)陰性的進(jìn)展型食管癌中的表達(dá)及臨床意義[J].現(xiàn)代腫瘤醫(yī)學(xué)，2014，22（12）：2873-2874.

[5]Grabsch H，Dattani M，Barker L，et al.Expression of DNA double-strand break repair proteins ATM and BRCA1 predicts survival in colorectal cancer[J].Clin Cancer Res，2006，12（5）：1494-1500.

[6]Truman JP，Gueven N，Lavin M，et al.Down-regulation of ATM protein sensitizes human prostate cancer cells to radiation-induced apoptosis[J]. J Biol Chem，2005，280（24）：23262-23272.

[7]Otterbein LE，Hedblom A，Harris C，et al.Heme oxygenase-1and carbon monoxide modulate DNA repair through ataxia-telangiectasia mutated（ATM）protein[J].Proc Natl Acad Sci USA，2011，108（35）：14491-14496.

[8]劉小群，喬田奎.ATM與腫瘤的關(guān)系研究進(jìn)展[J].中國癌癥雜志，2011，21（12）：973-977.

[9]賈曉娟，韓軍，文倩，等.血清CA125和HE4在不同分期的卵巢癌中的表達(dá)[J].中國衛(wèi)生檢驗(yàn)雜志，2012，22（12）：2931-2932.

[10]黎明鸞，陳蔚，林葉飛，等.CA125及HE4蛋白在卵巢癌組織及血清中的表達(dá)及其臨床意義[J].中國婦幼保健，2013，28（24）：4023-4026.

[11]尚陳宇，劉冬冬，徐建華，等.HE4和CA125聯(lián)合檢測(cè)在卵巢癌診斷及預(yù)后評(píng)估中的價(jià)值研究[J].中國婦幼保健，2014，29（33）：5492-5494.

Diagnostic value of serum CA125，HE4 and ATM protein joint detection in ovarian cancer

Fan Wei，Qi Jinyou，Han Xiao
（Department of Clinical Laboratory，Huai′an Municipal Tumor Hospital，Huai′an，Jiangsu 223200，China）

ObjectiveTo investigate the diagnostic value of the joint detection of serum human carcinoma antigen 125（CA125），epididymis protein 4（HE4）and ATMprotein in ovarian cancer.MethodsA total of 20 patients with pathologically diagnosed ovarian cancer in our hospital from June 2013 to January 2015 were selected as the ovarian cancer group and 20 women undergoing the physical examination were selected as the control group.The levels of CA125，HE4 and ATM in the 2 groups were detected and their positive rate，sensitivity，specificity and the area under the curve（AUC）were compared between the two groups.ResultsThe levels of serum HE4 and CA125 in the ovarian cancer group were significantly higher than those in the control group，but the positive rate of CA125 detection and HE4 detection had no statistical difference[75.00%（15/20）vs.80.00%（16/20），P=0.356]；the ATM protein expression positive rate of cancerous tissues in the ovarian cancer group was 60.00%（12/20），which was lower than 95.00%（19/20）of paracancerous normal tissues，the difference was statistically significant（χ2=7.025，P=0.020）. AUC of 3-indicator combined detection was 0.925 and the sensitivity was 90.0%.ConclusionThe ATM protein detection can improve the diagnostic efficiency and sensitivity of ovarian cancer in a certain extent.

CA-125 antigen； Ovarian neoplasms； ROC curve； Human epididymis protein 4； ATM protein

10.3969/j.issn.1009-5519.2015.24.011

A

1009-5519（2015）24-3717-02

2015-10-09）

樊衛(wèi)（1983-），女，湖南長(zhǎng)沙人，碩士研究生，主管檢驗(yàn)師，主要從事腫瘤分子生物學(xué)的研究；E-mail：fch141@163.com。