蒙藥沙棘中沙棘黃酮對于放射性造血損傷防護作用的研究△

劉 偉 衛(wèi)守喆 劉佳佳

(內(nèi)蒙古自治區(qū)人民醫(yī)院，內(nèi)蒙古 呼和浩特 010170)

由于傳染性疾病的逐漸控制，人類平均壽命不斷延長，惡性腫瘤對人類的威脅日益顯著。隨著疾病譜的變化，惡性腫瘤已經(jīng)成為目前死亡的常見原因之一，是男性的第二位，女性的第三位死因。據(jù)世界衛(wèi)生組織數(shù)據(jù)表明，到2013年為止，全球每年新增腫瘤患者有1400 多萬例，死亡人數(shù)820 萬人。我國每年新增腫瘤人數(shù)約200 萬，死亡約140 萬。據(jù)Tubiana1999年報道，45% 的惡性腫瘤可以治愈。其中手術(shù)治愈22%，放射治療18%，化學(xué)藥物治療5%。同時，對于我國腫瘤患者情況的統(tǒng)計發(fā)現(xiàn)，其中65 ～75%的患者在治療的過程中接受過放射治療［1］。

但是，放射治療在有效殺滅腫瘤細胞，控制腫瘤進一步增值和擴散的同時也會對正常機體組織表現(xiàn)出一定的損傷作用：如骨髓抑制、造血系統(tǒng)破壞、皮膚黏膜破潰、多臟器系統(tǒng)損傷等。造血組織對電離輻射極為敏感，有研究表明0.5Gy 放射線全身照射后就會引起血液學(xué)改變(放療患者隨腫瘤性質(zhì)不同而接受的單次劑量總量也不同，一般為2.0～3.0Gy)。當(dāng)全身或大部分機體受到較大劑量射線照射后，造血組織的損傷是機體最早出現(xiàn)的基本損傷之一。放射性造血損傷主要表現(xiàn)為造血功能障礙，由此誘發(fā)機體感染、出血、免疫功能抑制、死亡等。因此，全身照射后造血系統(tǒng)損傷的輕重和恢復(fù)的快慢在很大程度上影響放療患者的生活質(zhì)量［2］。

因此輻射防護劑的研發(fā)已成為一個國內(nèi)外的熱點課題。無毒或是低毒性的生物制品的研究是現(xiàn)今的趨勢，而民族醫(yī)藥的獨特作用已經(jīng)愈發(fā)的引起科研工作者的重視［3，4］。在已有研究的基礎(chǔ)上，發(fā)揮民族醫(yī)藥成分豐富、毒性低等優(yōu)點，重視篩選和系統(tǒng)研究，開發(fā)出適合廣大群眾使用的抗輻射藥品或保健品是現(xiàn)今國內(nèi)對于防輻射保護制劑的研究方向［5］。我區(qū)具有豐富的沙棘資源，是國內(nèi)出產(chǎn)沙棘的主要省份，沙棘作為傳統(tǒng)的蒙藥有著悠久的藥用歷史，1977年被收入中國藥典，功能主治止咳祛痰、消食化滯、活血散瘀等，原多用于咳嗽痰多、消化不良、食積腹痛、跌撲瘀腫、瘀血經(jīng)閉等癥狀，現(xiàn)今研究發(fā)現(xiàn)其含有多種維生素、微量元素、氨基酸和其他活性成分，對于抗氧化、提高機體免疫力方面均表現(xiàn)出較明確的效果［6］，故而其在保護輻射損傷，尤其是對于放射性造血損傷的保護作用方面有著巨大的潛在研究價值［7］。但現(xiàn)今關(guān)于沙棘主要集中于其對于人體保健效果的研究，而缺乏對于其藥用價值的探討。本研究擬通過動物實驗和臨床病例觀察，探討沙棘黃酮對放射性造血損傷防護作用。

1 實驗材料

1.1 藥品與試劑：沙棘黃酮膠囊(宇航人集團、內(nèi)蒙古)、瑞氏染料(三明市貝真生物科技有限公司、福州)、磷酸二氫鉀(國華化學(xué)試劑廠，北京)、磷酸氫二鈉(國華化學(xué)試劑廠，北京)、新潔而滅溶液(華星化工、安徽)、血球計數(shù)儀(XS800I Sysmex 公司日本)、光學(xué)顯微鏡(萊卡、德國)、微量加樣器(Gilson、法國)、電子天平(Sartorius 德國)

1.2 動物及分組：清潔級昆明小鼠，15 ～20g，購自內(nèi)蒙古大學(xué)實驗動物中心。取小鼠45 只，雌雄不論(16.3 ±1.4)，隨機分為3 組，即正常對照組、低劑量治療組、高劑量治療組，每組15 只，適應(yīng)性飼養(yǎng)1 周。

2 方 法

2.1 實驗?zāi)Ｐ椭苽洌好恐恍∈笥枰?0Coγ4Gy 一次性全身照射，照射距離30cm。并于照射當(dāng)日起連續(xù)7d，低劑量治療組每只小鼠予以10ml/kg 沙棘黃酮灌服;高劑量治療組每只小鼠予以20ml/kg 沙棘黃酮灌服，對照組予以20ml/kg食用油灌服。連續(xù)7d。

2.2 標(biāo)本采集及處理：實驗7d 后行眼球摘除收取外周血通過血球計數(shù)儀進行血細胞計數(shù)。脫頸處死小鼠，無菌條件下剝離股骨，分別剪斷股骨頭及股骨遠端，暴露骨髓腔。抽取骨髓，用1ml 無菌注射器，吸取0.2ml 無菌生理鹽水，輕輕插入骨髓腔，沖出骨髓，推片，行瑞氏染色。

2.3 指標(biāo)觀察：同時觀察各組照射7d 內(nèi)的體重、進食、精神、活動等日常指標(biāo)。通過血球計數(shù)儀進行血細胞計數(shù)。觀察骨髓涂片的細胞增殖情況。

2.4 統(tǒng)計學(xué)方法：結(jié)果通過SPSS11.0 統(tǒng)計分析，采用率及x(_)±S 的形式表示，采用檢驗和t 檢驗進行，P＜0.05 具有統(tǒng)計學(xué)意義。

3 結(jié) 果

3.1 白細胞變化情況：取外周血行血細胞計數(shù)儀檢測白細胞數(shù)量。結(jié)果顯示高劑量(沙棘黃酮20ml/kg 灌服)組白細胞數(shù)量為1.799 ±0.228 ×109優(yōu)于低劑量(沙棘黃酮10ml/kg 灌服)組1.447 ±0.304 ×109(P＜0.05)及空白對照組對照組1.414 ±0.212 ×109(P＜0.05)，表示沙棘黃酮對于放射性造血系統(tǒng)的損傷具有防護作用。(圖1)

圖1 各組間白細胞變化情況(10⌒9 個/L)

3.2 骨髓涂片結(jié)果分析：如下圖所示，對照組中骨髓有核細胞數(shù)量減少，高劑量灌服組(圖2 -C)及低劑量灌服組(圖2 -B)較空白對照組(圖2 -A)骨髓細胞增殖明顯。提示沙棘黃酮灌服后對于小鼠自身造血系統(tǒng)的動員具有促進意義，使其可以較為有效的拮抗放射線對于小鼠造血系統(tǒng)所造成的損傷。

圖2 實驗7d 各組間骨髓涂片結(jié)果(100 ×)

3.3日常指標(biāo)觀測：實驗組與對照組相比較，小鼠進食有所恢復(fù)、精神狀態(tài)略有改觀、日?；顒由锌伞＞腕w重增加指標(biāo)而言(圖3)，對照組7d 體重累計增加0.71 ±1.23，低劑量實驗組7d 體重累計增加1.13 ±0.68，高劑量實驗組7d體重累計增加1.38 ±0.72，組間比較均有統(tǒng)計學(xué)差異(P＜0.05)，且各組未見死亡樣本。

圖3 7 天各組間體重增加情況(g/只)

4 討 論

就本實驗的結(jié)果而言，我們可以清晰的觀察到在對于放射線損傷的小鼠進行一定量的沙棘黃酮灌服后，對于造血功能的恢復(fù)具有一定的促進作用。通過對于外周血象白細胞數(shù)值的指標(biāo)觀察，我們發(fā)現(xiàn)，沙棘黃酮灌服較未行治療的對照組，白細胞明顯升高。同時具有一定的量效關(guān)系，較低劑量的沙棘黃酮灌服(10ml/kg)這一上升現(xiàn)象不明顯，而隨著劑量的進一步增加(20ml/kg)，白細胞的取得了明顯的上升。但我們也應(yīng)當(dāng)清晰的認(rèn)識到，雖然實驗組較對照組白細胞的數(shù)值增加，但是這一增加的數(shù)值并未使得實驗組小鼠的白細胞數(shù)值升為正常水平。但是這畢竟具備了上升的趨勢，也為我們進一步實驗提供了理論依據(jù)和可能。同時我們實驗選取的作用時間間隔較短，這也限制了我們的數(shù)據(jù)未能有較為突出的變化的可能。我們有理由相信如果進一步延長作用時間，后續(xù)會取得更為理想的效果。

對于骨髓涂片的結(jié)果觀察，我們發(fā)現(xiàn)，對照組的骨髓有核細胞數(shù)目較正常明顯減少，顯示其處于一種骨髓抑制的狀態(tài)，這與放射線照射后骨髓細胞活性抑制，各系細胞數(shù)目減少這一現(xiàn)象相吻合。而治療組(低、高劑量組)相對于對照組而言，骨髓細胞增殖明顯增加，且高劑量組更為明顯，骨髓增殖活性增加。提示造血系統(tǒng)予以動員，這也為治療組白細胞數(shù)量有增加的趨勢這一現(xiàn)象提供了理論依據(jù)。說明沙棘黃酮對于機體造血系統(tǒng)具有保護作用，其可以較為有效的拮抗放射線對于造血系統(tǒng)的損傷。

生命體征指標(biāo)的觀察中，我們也可以看到實驗組與對照組相比較，小鼠進食有所恢復(fù)、精神狀態(tài)略有改觀、日?；顒由锌伞＞腕w重增加指標(biāo)而言，治療組(低、高劑量組)相對于對照組體重有所增加。

4 結(jié) 論

4.1 沙棘黃酮可以較為有效的拮抗放射線對于小鼠造血系統(tǒng)的損傷，對機體具有較為明顯的抗輻射作用。

4.2 沙棘黃酮的抗輻射作用具有一定的量效關(guān)系。

［1］陳孝平，汪建平.外科學(xué)［M］.第8 版.北京：人民衛(wèi)生出版社，2013：201.

［2］殷蔚伯主編.腫瘤放射治療學(xué)［M］.第4 版.北京：中國協(xié)和醫(yī)科大學(xué)出版社，2008：231 -261.

［3］王曉波，侯新然，襲榮剛，等.中藥防輻射作用研究進展［J］.人民軍醫(yī)，2012，55(3)：262 -265.

［4］石童，王陳，蔣輝，等.抗輻射生物藥物的研究進展［J］.國際藥學(xué)研究雜志，2014，41(6)：54 -58.

［5］趙紅，黃黎明.抗輻射中藥的研究現(xiàn)狀及進展［J］.實用藥物與臨床，2008，11(4)：238 -240.

［6］吳斯琴，畢力格，包勒朝魯，等.沙棘藥理作用研究進展［J］.中國藥業(yè)，2015，24 (1)：101 -102.

［7］賽喜雅，拉圖，那音珠日噶.蒙藥材沙棘的研究現(xiàn)狀［J］.北方醫(yī)藥，2014，11(3)：70 -71.