電針干預(yù)血管性癡呆大鼠海馬CA1 區(qū)AVP、Aβ1-40 蛋白表達(dá)的研究*

馮德琳，劉玉馳，劉 晨，邵 瑛

血管性癡呆( Vascular Dementia，VD) 是一種因腦血管病變，包括缺血性腦卒中、出血性腦卒中等原因，造成的腦部組織血流運(yùn)行障礙，引起記憶、認(rèn)知和行為等腦區(qū)低灌注的腦血管疾病，是一種嚴(yán)重的認(rèn)知功能障礙綜合征［1］。

針灸對(duì)癡呆大鼠腦內(nèi)AVP 的調(diào)整和抑制腦缺血后Aβ 含量高表達(dá)的效果已得到肯定［2-4］。本實(shí)驗(yàn)以通督調(diào)神為治療原則，選定督脈“百會(huì)”、“大椎”穴為電針組穴位，用電針療法對(duì)VD 模型大鼠進(jìn)行治療，對(duì)比西藥組( 吡拉西坦混懸液灌胃) 后，結(jié)合Morris 水迷宮對(duì)各組大鼠進(jìn)行行為學(xué)測(cè)試，運(yùn)用Western Blot 法對(duì)VD 大鼠海馬CA1 區(qū)中AVP、Aβ1-40 蛋白含量的表達(dá)進(jìn)行檢測(cè)，探尋電針療效與AVP 和Aβ1-40 蛋白含量的關(guān)系，為針灸治療血管性癡呆提供新的科學(xué)依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物及分組

本實(shí)驗(yàn)選擇雄性SPF 級(jí)SD 大鼠70 只，體重180 ～220 g，由廣州中醫(yī)藥大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供［合格證號(hào)： NO. 44005900000212，許可證號(hào)： SCXK( 粵)2013-0020］。分組見(jiàn)圖1。

圖1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組圖

假手術(shù)組：隨機(jī)抽取8 只，在相應(yīng)造模階段給予一致的手術(shù)創(chuàng)傷，但不阻斷椎動(dòng)脈，不夾閉頸總動(dòng)脈，其余手術(shù)過(guò)程同VD 模型組。

VD 模型組：采用改良4-VO 法。在阻斷大鼠雙側(cè)椎動(dòng)脈的基礎(chǔ)上，可逆性?shī)A閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈。

阻滯劑組：4-VO 法制備VD 模型成功后，VD 大鼠海馬CA1 區(qū)注射AVP 受體阻滯劑。

電針1 組：VD 模型組+電針治療。

電針2 組：阻滯劑組+電針治療。

西藥組：吡拉西坦混懸液灌胃。

1.2 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物隨機(jī)分組方法與過(guò)程

將實(shí)驗(yàn)大鼠按體重從輕到重，依次編號(hào)為1、2、3、……70 號(hào)，在隨機(jī)數(shù)目表上第2 橫行第1 縱列97開(kāi)始自左向右。連續(xù)抄取8 個(gè)數(shù)字，起代碼為假手術(shù)組。其余大鼠均作為血管性癡呆模型造模候選大鼠。進(jìn)行4-VO 造模7 天后，篩選符合實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的VD 模型。除去造模術(shù)后死亡12 只，剔除因術(shù)后肢體偏癱嚴(yán)重，不能進(jìn)行水迷宮測(cè)試的4 只；將余下46 只，隨機(jī)抽取22 只模型大鼠進(jìn)行AVP 受體阻滯劑注射，其余24只模型大鼠分成3 組，將動(dòng)物編號(hào)后，從隨機(jī)數(shù)字表抄錄24 個(gè)數(shù)字，將各數(shù)一律以3 除之，并以余數(shù)1、2、3代表A、B、C。注射阻滯劑后，模型大鼠死亡4 只，另2只因注射阻滯劑后出現(xiàn)嚴(yán)重并發(fā)癥，如腹水，均剔除。最后進(jìn)入實(shí)驗(yàn)的大鼠48 只，分別為：假手術(shù)組8 只，模型組8 只，阻滯劑組8 只，電針1 組8 只，電針2 組8只，西藥組8 只，造模死亡率為22.9%。

1.3 實(shí)驗(yàn)儀器與化學(xué)試劑

0.30 mm × 25 mm 華佗牌無(wú)菌針灸針，華佗牌SDZ-Ⅱ型電針機(jī)、Morris 水迷宮( 廣州中醫(yī)藥大學(xué)動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中心提供) ，雙臂數(shù)字式腦立體定位儀( 型號(hào)68015) 由深圳市瑞沃德生命科技有限公司提供。手術(shù)器械：止血鉗、有齒鑷、持針器、無(wú)齒鑷、眼科剪、手術(shù)刀片、組織剪、眼科鑷、止血彎鉗、巾鉗、4 號(hào)縫合線、無(wú)創(chuàng)動(dòng)脈夾等。常規(guī)手術(shù)材料： 一次性乳膠手套、棉球、紗布等。

托伐普坦片( 批號(hào)120405S，規(guī)格15 mg，批準(zhǔn)文號(hào)：國(guó)藥準(zhǔn)字H200110115，浙江大冢制藥有限公司生產(chǎn)) ，水合氯醛( 批號(hào)20121204，規(guī)格250 g，國(guó)家集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司) ，注射用青霉素鈉( 批號(hào)X1207619，規(guī)格160 萬(wàn)單位/瓶，華北制藥股份有限公司) ，吡拉西坦片( 腦復(fù)康片，批號(hào)130103，規(guī)格0.4 mg/片，廣東華南藥業(yè)集團(tuán)有限公司) ，0.9%氯化鈉注射液( 批號(hào)T12111903，規(guī)格500 ml，四川科倫藥業(yè)股份有限公司) ，過(guò)氧化氫溶液( 批號(hào)130403，規(guī)格100 ml，東恒健制藥有限公司) ，甲紫溶液( 批號(hào)120901，規(guī)格20 ml，廣東恒健制藥有限公司) ，安爾碘皮膚消毒劑( 批號(hào)20120823，規(guī)格60 ml，上海利康消毒高科技有限公司) 。

1.4 動(dòng)物模型的建立

1.4.1 血管性癡呆動(dòng)物模型的制備 SD 大鼠術(shù)前12 h 禁食，4 h 禁水。按體重以10%水合氯醛腹腔注射(0.35 g/kg) 麻醉。隨后將進(jìn)入麻醉狀態(tài)的大鼠俯臥位固定于特制的鼠臺(tái)上，手術(shù)刀行頸部背側(cè)正中切口，鈍性分離，可見(jiàn)雙側(cè)第1 頸椎旁的棘突旁翼小孔，隨后以直徑0.5 mm 的電凝針頭燒灼雙側(cè)翼小孔內(nèi)的椎動(dòng)脈，使之造成永久性閉塞。術(shù)后傷口處撒少量青霉素粉劑，避免傷口感染，手術(shù)線縫合傷口后，放回籠中，保溫飼養(yǎng)，注意觀察造摸大鼠的生理指征。24 h后，再次將大鼠麻醉，仰臥位固定于特制鼠臺(tái)上，常規(guī)備皮消毒，手術(shù)刀行腹側(cè)頸正中切口約1 cm，依次鈍性分離出大鼠雙側(cè)胸鎖乳突肌、胸骨舌肌之間的肌間隙，隨后用眼科彎鑷小心分離暴露出的頸總動(dòng)脈和迷走神經(jīng)，將分離出的頸總動(dòng)脈穿4 號(hào)手術(shù)線備用，以手術(shù)線穿線后牽拉雙側(cè)頸總動(dòng)脈，用無(wú)創(chuàng)動(dòng)脈夾夾閉雙側(cè)頸總動(dòng)脈15 min 后，再通10 min，反復(fù)夾閉3 次。術(shù)后以青霉素局部處理防止感染。常規(guī)皮膚縫合，碘酊消毒，放回籠中單獨(dú)飼養(yǎng)，密切觀測(cè)術(shù)后大鼠活動(dòng)情況。

1.4.2 血管性癡呆大鼠阻滯劑組動(dòng)物模型的制備術(shù)后3 天，待術(shù)口愈合及體力恢復(fù)后，隨機(jī)選取22 只VD 大鼠進(jìn)行海馬CA1 區(qū)阻滯劑注射。術(shù)前12 h 禁食禁水。按實(shí)驗(yàn)動(dòng)物體重，采用10%水合氯醛經(jīng)腹腔注射麻醉(0.35 g/kg) ，俯臥位固定于腦立體定位儀，剪毛，備皮后安爾碘常規(guī)消毒，從大鼠雙目銳眥連線中點(diǎn)，手術(shù)刀縱向垂直向后切開(kāi)大鼠頭頂部皮膚，長(zhǎng)約1.5 cm，深度以切至骨膜為度。分離皮下組織，暴露顱骨，用帶有過(guò)氧化氫溶液的消毒棉簽用力擦拭骨膜后，可見(jiàn)前囟。將前囟交叉點(diǎn)設(shè)為原點(diǎn)。參照《大鼠腦立體定位圖譜》［5］，選取右側(cè)海馬區(qū)為注射區(qū)。定位坐標(biāo)： 前 囟 后3. 0 mm，中 線 右 側(cè)2. 0 mm，硬 膜 下2.6 mm。坐標(biāo)點(diǎn)定位后，用注射器5 號(hào)針頭，以旋轉(zhuǎn)法小心鉆開(kāi)顱骨，以不穿透硬腦膜為度，有突破感時(shí)停止，緩慢拔出針頭，將裝有阻滯劑的微量進(jìn)樣器垂直腦表面，沿針孔緩慢垂直進(jìn)針至靶點(diǎn)，至硬腦膜下2.6 mm，準(zhǔn)備注射。阻滯劑選擇藥品混懸液為1 μl AVP 受體阻滯劑( 托伐普坦片Tolvaptan，100 μg/kg)緩慢注入，注射時(shí)間5 min(0.2 μlmin) ，留針2 min，以保證溶液充分彌散，再緩慢撤針。術(shù)口處撒少量青霉素粉劑消毒，手術(shù)線縫合術(shù)口。

1.5 動(dòng)物模型標(biāo)準(zhǔn)依據(jù)

術(shù)后7 天，對(duì)VD 模型大鼠進(jìn)行Morris 水迷宮試驗(yàn)，篩選模型大鼠，記錄每只大鼠的逃避潛伏期后，分別計(jì)算假手術(shù)組平均值( 記為X) 、標(biāo)準(zhǔn)差( 記為Y) ，以“X+2Y”的標(biāo)準(zhǔn)，剔除不合格大鼠［6］。除假手術(shù)組外的其余模型大鼠，如逃避潛伏期大于“X +2Y”則認(rèn)為符合實(shí)驗(yàn)標(biāo)準(zhǔn)的VD 模型。

1.6 處理及治療方法

假手術(shù)組、模型組、阻滯劑組：造模7 天后開(kāi)始，每日模擬抓取、固定、擦拭酒精等，不予施加任何干預(yù)措施。

電針1 組、電針2 組： 造模7 天后開(kāi)始，穴位以75%酒精棉球常規(guī)消毒后，以32 號(hào)針灸針?lè)謩e刺入百會(huì)穴( DU20) 、大椎穴( DU14) 。穴位的定位及針刺方法，參照《實(shí)驗(yàn)針灸學(xué)》［7］為準(zhǔn)。百會(huì)穴： 位于頂骨正中，向前或向后斜刺2 mm；大椎穴：位于第7 頸椎與第1 胸椎間，背部正中，直刺3 ～5 mm。電針參數(shù)選擇3 Hz的連續(xù)波，持續(xù)20 min，中等刺激，以VD 大鼠能耐受、頭部輕微抖動(dòng)為度( 電流強(qiáng)度在1 mA 左右) ，連續(xù)治療5 天，休息2 天為1 個(gè)療程，共治療2 個(gè)療程。

西藥組： 造模7 天后開(kāi)始，給予吡拉西坦片0.8 mg/kg混懸液灌胃。治療周期同電針組。

1.7 Morris 水迷宮試驗(yàn)

Morris 水迷宮試驗(yàn)共進(jìn)行6 天，包括定位航行試驗(yàn)及空間探索實(shí)驗(yàn)。為減少應(yīng)激反應(yīng)對(duì)正式試驗(yàn)的影響，第1 天為適應(yīng)性訓(xùn)練，大鼠面朝池壁放入水中，游泳60 s，擦干放回籠中結(jié)束訓(xùn)練。第2 天開(kāi)始，進(jìn)行定位航行試驗(yàn)，以各組實(shí)驗(yàn)大鼠的平均成績(jī)作為測(cè)試的最后成績(jī)。最后1 天進(jìn)行空間探索試驗(yàn)，記錄模型大鼠首次跨越平臺(tái)的時(shí)間，以及120 s 內(nèi)大鼠跨越平臺(tái)次數(shù)，計(jì)算每只大鼠的平均成績(jī)，檢測(cè)大鼠的空間學(xué)習(xí)以及記憶的情況。

1.8 Western Blot 法檢測(cè)AVP、Aβ1-40 蛋白含量

在水迷宮試驗(yàn)進(jìn)行完成以后，將實(shí)驗(yàn)大鼠以10%水合氯醛(0.35 g/kg) 麻醉后，迅速斷頭取腦，在冰盤(pán)上迅速?gòu)膬蓚?cè)大腦半球分離出的海馬組織，放入標(biāo)本瓶，進(jìn)行Western Blot 法檢測(cè)。

1.9 數(shù)據(jù)分析

用SPSS16.0 for windows 統(tǒng)計(jì)軟件分析，計(jì)量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差(±s) 記錄。各組間比較采取獨(dú)立樣本t 檢驗(yàn)，以P ＜0.05 認(rèn)為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 Morris 水迷宮結(jié)果

電針1 組、西藥組與模型組比較，電針2 組與阻滯劑組比較，平均逃避潛伏期減少、首次跨越時(shí)間縮短、120 s 內(nèi)跨越原平臺(tái)次數(shù)增加( P ＜0.05) ；阻滯劑組與模型組比較，逃避潛伏期、首次跨越時(shí)間延長(zhǎng)，120 s 內(nèi)跨越原平臺(tái)次數(shù)減少( P ＜0.05) ；電針1 組與西藥組比較，平均逃避潛伏期減少、首次跨越時(shí)間縮短、120 s 內(nèi)跨越原平臺(tái)次數(shù)增加( P ＜0.05) 。見(jiàn)表1、2 及圖2、3。

圖2 各組實(shí)驗(yàn)大鼠平均潛伏期對(duì)比圖

圖3 各組大鼠空間探索實(shí)驗(yàn)比較圖

2.2 Western Blot 法檢測(cè)結(jié)果

電針1 組、西藥組對(duì)比模型組、電針2 組對(duì)比阻滯劑組后，AVP 蛋白含量增多，Aβ1-40 蛋白含量減少( P ＜0.05) ；模型組與假手術(shù)組比較，AVP 蛋白含量減少，Aβ1-40 蛋白含量增多( P ＜0.05) ；電針1 組與西藥組比較，AVP 蛋白含量較多，Aβ1-40 蛋白含量較少( P ＜0.05) 。見(jiàn)表3、4 及圖4 ～6。

表1 各組大鼠平均逃避潛伏期( ±s)

表1 各組大鼠平均逃避潛伏期( ±s)

注：與假手術(shù)組比較，1) P ＜0.05； 與模型組比較，2) P ＜0.05； 與阻滯劑組比較，3) P ＜0.05。

組別 例數(shù) 逃避潛伏期假手術(shù)組31.93 ±5.37模型組 8 52.42 ±6.08 1)阻滯劑組 8 54.97 ±7.35 1)2)電針1 組 8 33.81 ±3.17 1)2)電針2 組 8 34.84 ±5.45 1)2)3)西藥組 8 35.99 ±3.04 1)2)8

表2 各組大鼠空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果( ±s)

表2 各組大鼠空間探索實(shí)驗(yàn)結(jié)果( ±s)

注：與假手術(shù)組比較，1) P ＜0.05； 與模型組比較，2) P ＜0.05； 與阻滯劑組比較，3) P ＜0.05。

組別 例數(shù) 首次跨越時(shí)間 120 s 內(nèi)跨越平臺(tái)次數(shù)假手術(shù)組8 19.79 ±3.45 17.00 ±2.34模型組 8 72.57 ±7.951) 7.37 ±0.76 1)阻滯劑組 8 69.83 ±8.951)2) 7.21 ±1.97 1)2)電針1 組 8 26.91 ±7.141)2) 15.17 ±1.95 1)2)電針2 組 8 30.59 ±6.291)2)3 ) 15.92 ±1.03 1)2)3)西藥組 8 34.86 ±7.751)2) 12.76 ±0.56 1)2)

圖4 Western Blot 法檢測(cè)大鼠海馬AVP、Aβ1-40 蛋白含量圖

圖5 Western Blot 法檢測(cè)大鼠海馬AVP 蛋白含量電泳圖

圖6 Western Blot 法檢測(cè)大鼠海馬Aβ1-40 蛋白含量電泳圖

表3 各組大鼠海馬CA1 區(qū)AVP 蛋白表達(dá)量( ±s)

表3 各組大鼠海馬CA1 區(qū)AVP 蛋白表達(dá)量( ±s)

注：與假手術(shù)組比較，1) P ＜0.05； 與模型組比較，2) P ＜0.05； 與阻滯劑組比較，3) P ＜0.05。

組別 例數(shù) AVP 含量假手術(shù)組0.450 ±0.012模型組 8 0.315 ±0.1071)阻滯劑組 8 0.220 ±0.2011)2)電針1 組 8 0.467 ±0.2591)2)電針2 組 8 0.499 ±0.1371)2)3)西藥組 8 0.415 ±0.0591)2)8

表4 各組大鼠海馬CA1 區(qū)Aβ1-40 蛋白表達(dá)量( ±s)

表4 各組大鼠海馬CA1 區(qū)Aβ1-40 蛋白表達(dá)量( ±s)

注：與假手術(shù)組比較，1) P ＜0.05； 與模型組比較，2) P ＜0.05； 與阻滯劑組比較，3) P ＜0.05。

組別 例數(shù) Aβ1-40含量假手術(shù)組0.063 ±0.021模型組 8 0.455 ±0.2751)阻滯劑組 8 0.544 ±0.2271)2)電針1 組 8 0.236 ±0.1931)2)電針2 組 8 0.199 ±0.1021)2)3)西藥組 8 0.289 ±0.0151)2)8

3 討論

血管性癡呆屬祖國(guó)醫(yī)學(xué)“呆病”范疇。其病位在腦，與五臟功能失調(diào)密切相關(guān)，病理性質(zhì)多表現(xiàn)為本虛標(biāo)實(shí)，五臟、氣血、精髓虧虛為本，以風(fēng)、火、痰、瘀為標(biāo)，最終導(dǎo)致腦絡(luò)瘀阻、腦府與諸臟腑之氣不能順接、腦失所養(yǎng)而漸至癡呆。本研究沿用賴(lài)新生教授的治療方法［8-9］，利用電針“百會(huì)”及“大椎”穴，通過(guò)通督調(diào)神的治療原則，改善VD 大鼠的學(xué)習(xí)記憶、日?；顒?dòng)能力。

本研究選擇督脈“百會(huì)”、“大椎”穴進(jìn)行電針治療。督脈為人體“陽(yáng)脈之?！?，是陽(yáng)脈之總綱，與任、沖二脈同起于胞中。督脈循行于腰背正中，上至頭面。手足三陽(yáng)經(jīng)經(jīng)脈循行均上到頭面，諸陰經(jīng)之正，合于相表里陽(yáng)經(jīng)經(jīng)別而上行頭面。百會(huì)穴位于巔頂中央，居人身之最高點(diǎn)，頭為諸陽(yáng)之會(huì)，《針灸聚英》謂手足三陽(yáng)皆會(huì)于此； 頭為元神之府，足厥陰肝經(jīng)與督脈會(huì)于巔，交百會(huì)，根據(jù)穴位的臨近作用和遠(yuǎn)道作用，百會(huì)穴具有醒腦開(kāi)竅、升陽(yáng)固脫之功。大椎穴為手足三陽(yáng)經(jīng)的陽(yáng)氣與督脈的陽(yáng)氣匯聚而成，《循經(jīng)考穴編》又稱(chēng)“上杼”穴，意指此穴位內(nèi)的陽(yáng)氣為堅(jiān)實(shí)飽滿(mǎn)之狀［10］。故針刺此二穴，能夠激發(fā)臟腑經(jīng)氣，促進(jìn)陽(yáng)氣的運(yùn)行，從而達(dá)到通督調(diào)神、醒腦開(kāi)竅的功效。有報(bào)道顯示，針刺督脈穴，可明顯降低VD 患者的全血低切比粘度、全血高切比粘度、血漿粘度、紅細(xì)胞聚集指數(shù)，從而改善微循環(huán)，加速大腦病灶及病灶周?chē)M織功能的恢復(fù)，進(jìn)而改善腦部的缺血、缺氧狀態(tài)，達(dá)到治療腦VD 的目的［11-13］。

AVP( 血管加壓素) 又稱(chēng)為加壓素或抗利尿激素( ADH) ，是由下丘腦視上核和室旁核細(xì)胞合成和分泌的神經(jīng)內(nèi)分泌激素，貯存于神經(jīng)垂體，廣泛分布于人體各個(gè)腦區(qū)、腦脊液和血液中。同許多激素或肽類(lèi)一樣，AVP 同樣是通過(guò)作用于不同類(lèi)型受體而發(fā)揮出其多種生物學(xué)效應(yīng)。在體內(nèi)許多組織中，廣泛存在著AVP的特異性受體，如心腦血管、泌尿生殖器官、肝臟、血小板、外周血淋巴細(xì)胞、單核細(xì)胞及腎上腺球狀帶等，AVP 通過(guò)與受體存在的不同靶點(diǎn)結(jié)合后，以激活第二信使系統(tǒng)而發(fā)揮其各自的生理效應(yīng)［14］。根據(jù)激活第二信使系統(tǒng)不同，可將其劃分為V1 和V2 兩種類(lèi)型，又根據(jù)V1 受體對(duì)不同靶細(xì)胞的藥理作用的差別將V1受體劃分為Vla 和V1b 兩種亞型［15］，前者主要分布于血管平滑肌細(xì)胞和肝細(xì)胞表面，后者主要分布于垂體前葉細(xì)胞表面。目前認(rèn)為AVP 在中樞通過(guò)V1 受體發(fā)揮作用，它通過(guò)AVP-V1 受體調(diào)節(jié)中樞水、Na+、K+、Cl-等代謝，作用于腦血管平滑肌細(xì)胞和毛細(xì)血管內(nèi)皮細(xì)胞，調(diào)節(jié)血腦屏障和腦血液循環(huán)［16］。故將中樞神經(jīng)系統(tǒng)中AVP 受體分為3 種不同類(lèi)型［17］，V1、V2 受體均有自己的特異性受體拮抗劑。

對(duì)AVP 與情緒調(diào)控機(jī)制的猜測(cè)，是基于已發(fā)現(xiàn)的隔核及海馬中AVP 受體的分布以及神經(jīng)元投射到邊緣系統(tǒng)的的生理因素相關(guān)。AVP 亦參與腦的認(rèn)知功能調(diào)節(jié)，尤其影響腦的記憶鞏固和回憶過(guò)程。AVP 已被證實(shí)是一種與學(xué)習(xí)、記憶密切相關(guān)的神經(jīng)肽［18］。Griebel［19］選用V1b 受體的特異性拮抗劑SSR-149415 在一系列小鼠和大鼠模型中都進(jìn)行了實(shí)驗(yàn)，結(jié)果證實(shí)，AVP 受體確實(shí)有很好的抗焦慮癥和抑郁癥的效果。腦內(nèi)V1b 受體開(kāi)始漸漸被認(rèn)為是防治應(yīng)激性相關(guān)疾病的重要中樞內(nèi)部靶點(diǎn)［20］。有研究報(bào)道腦脊液中AVP 的變化與血液中AVP 含量的變化是相對(duì)獨(dú)立的，因?yàn)锳VP 不能夠通過(guò)血腦屏障［21］。缺血缺氧時(shí)神經(jīng)元壞死主要發(fā)生在選擇性易損腦區(qū)，海馬CA1區(qū)是海馬結(jié)構(gòu)中與人類(lèi)學(xué)習(xí)記憶關(guān)系最為密切的功能區(qū)，具有對(duì)缺血的選擇易損傷性［22］。所以本研究采取受體阻滯劑直接注射到模型大鼠海馬CA1 區(qū)的方法。因尚無(wú)應(yīng)用AVP 阻滯劑注射模型大鼠CA1 區(qū)的先例，故本研究尚屬于探索性實(shí)驗(yàn)。

本實(shí)驗(yàn)所采用改良后的Pulsinelli 四血管阻斷(4-VO) 法制作VD 動(dòng)物模型［23］，可以較好模擬VD的發(fā)病機(jī)制，及模擬人類(lèi)腦缺血再灌注損傷的過(guò)程。

可以造成血管性癡呆大鼠行為學(xué)改變及記憶能力下降。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示大鼠海馬CA1 區(qū)注射AVP 受體阻滯劑后，減少了AVP 的蛋白含量；且腦內(nèi)Aβ1-40 的蛋白含量升高。結(jié)合治療后的行為學(xué)改變、AVP 蛋白含量較高的組別( 電針1 組、電針2 組、西藥組) 對(duì)比AVP 蛋白含量較少的組別( 模型組、阻滯劑組) ，平均逃避潛伏期均減少、首次跨越時(shí)間縮短、120 s 內(nèi)跨越原平臺(tái)次數(shù)增加( P ＜0.05) ；電針1 組與西藥組比較，前者在改善VD 大鼠行為學(xué)檢測(cè)的結(jié)果中明顯優(yōu)于西藥組。在實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)中，電針可有效干預(yù)VD 大鼠海馬CA1 區(qū)AVP 以及Aβ1-40 的蛋白含量表達(dá)，經(jīng)電針治療后，電針1、2 組比較其他各組別，AVP 蛋白含量均有升高，且Aβ1-40 含量減少。其機(jī)制可能與改善大鼠海馬區(qū)AVP、Aβ1-40 在突觸傳遞效率方面的神經(jīng)調(diào)制及神經(jīng)毒性作用有關(guān)，電針可促進(jìn)腦內(nèi)AVP的生成，從而減少Aβ1-40 的蛋白含量，從而降低老年斑的生成，減緩血管性癡呆的病變過(guò)程。

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