科學(xué)美白 安全有效

董銀卯　李麗

隨著化妝品科技的發(fā)展，眾多美白劑相繼被開(kāi)發(fā)應(yīng)用?，F(xiàn)如今，已有多種皮膚美白劑可用于預(yù)防和治療不規(guī)則的色素沉著，包括黃褐斑，雀斑等。例如：維生素C及其衍生物、曲酸、壬二酸，果酸、熊果苷、煙酰胺等，這些物質(zhì)雖具有一定的美白效果，但有些美白劑會(huì)對(duì)皮膚造成一定的損傷，存在一定的安全隱患，嚴(yán)重者會(huì)導(dǎo)致白斑病等。

很多美白劑主要是針對(duì)影響黑色素合成途徑中的關(guān)鍵物質(zhì)如酪氨酸酶，從而減少色素含量來(lái)發(fā)揮作用。隨著科技的發(fā)展，人們逐漸認(rèn)識(shí)到黑色素對(duì)人體皮膚的保護(hù)作用，如防御紫外線損傷，皮膚光老化等，如果過(guò)度干預(yù)黑色素形成，在美白的同時(shí)，降低了黑素對(duì)皮膚的保護(hù)作用，勢(shì)必影響皮膚健康。

因此在保證皮膚健康的基礎(chǔ)上，尋找新型的健康美白原料及相關(guān)產(chǎn)品，為國(guó)內(nèi)外化妝品領(lǐng)域的研究熱點(diǎn)與發(fā)展趨勢(shì)。本課題組以中醫(yī)理論為指導(dǎo)，以君臣佐使為組方原則，從影響皮膚色度的不同角度出發(fā)進(jìn)行組方，探索解決皮膚暗沉、灰黃及色素過(guò)度沉著和色素不均衡分布的途徑，達(dá)到使肌膚健康美白的目的。

1.黑色素的合成、代謝及影響因素

不同人種皮膚呈現(xiàn)出不同的顏色，但是皮膚的顏色都是由4種色素組成，即：氧合血紅蛋白（紅色），還原血紅蛋白（藍(lán)色），類胡蘿卜素（黃色）、黑色素（黑色或褐色）。

黑色素是在人體表皮基底層的黑素細(xì)胞內(nèi)，通過(guò)一系列氧化反應(yīng)形成的。酪氨酸酶是黑色素合成的關(guān)鍵酶，可催化體內(nèi)黑色素生物合成途徑中的3個(gè)不同的關(guān)鍵點(diǎn)，即：在酪氨酸酶（Tyrosinaae，TYR）催化下酪氦酸（Tyrosine，Tyr）轉(zhuǎn)換為多巴（DOPA），DOPA在酪氨酸酶的作用下轉(zhuǎn)換為多巴醌（DQ）。多巴醌通過(guò)自動(dòng)氧化轉(zhuǎn)換成多巴色素，最后生成5，6-二羥基吲哚羧酸（DHICA）以形成優(yōu)黑素。后者的反應(yīng)是在多巴色素互變異構(gòu)酶（Dopachrometautomerase）和DHICA氧化酶的催化下進(jìn)行的。同時(shí)，在以半胱氦酸或谷胱甘肽的催化下，多巴醌被轉(zhuǎn)換為半胱氨酰多巴或谷胱甘肽多巴最后生成褐黑素。

黑色素（Melanin），是不同類型的色素聚合物組成的混合物，是決定皮膚顏色的重要因素，其在黑素細(xì)胞內(nèi)的黑素小體內(nèi)合成，再通過(guò)樹(shù)突轉(zhuǎn)移至角質(zhì)形成細(xì)胞，在保護(hù)皮膚免受氧化損傷、細(xì)胞DNA損傷及紫外線損傷中發(fā)揮重要作用。黑色素主要是隨著角質(zhì)形成細(xì)胞的代謝而代謝，另外轉(zhuǎn)化為其他成分被人體吸收或排出體外。

黑色素含量受環(huán)境因素和生物因素影響較明顯，例如：UV曝露量、促黑素激素（α-MSH）、MC1R受體激動(dòng)劑、刺鼠相關(guān)蛋白（agoutl-related protein）等。隨著年齡的增長(zhǎng)，在炎癥因子，激素失衡等條件下，黑色素分布失衡的現(xiàn)象顯著增加，皮膚炎癥和損傷為導(dǎo)致色素沉著的一個(gè)重要原因。

2.度膚美白的作用途徑

目前常用的美白劑主要通過(guò)抑制黑色素細(xì)胞（melanocyte）增殖、抑制酪氨酸酶、加速角質(zhì)層脫落等方式最終起到干預(yù)黑色素的形成與代謝來(lái)發(fā)揮美白功效。這種途徑雖然能夠達(dá)到一定的美白效果，但在美白的同時(shí)也存在一定的風(fēng)險(xiǎn)。因?yàn)楹谏乜梢晕兆贤饩€，阻止紫外線對(duì)機(jī)體的損害，具有抗氧化、抗損傷、清除自由基等作用。由于傳統(tǒng)美白劑對(duì)黑色素的過(guò)度抑制，破壞了黑色素對(duì)人體的保護(hù)作用，在美白的同時(shí)對(duì)機(jī)體也造成了一定的損傷。本文對(duì)于皮膚美白機(jī)理的研究主要致力于在不改變黑色素含量及黑色素正常代謝的情況下，即在保證黑色素對(duì)皮膚的保護(hù)作用的條件下，尋找新型的、安全的美白活性物質(zhì)。通過(guò)改善皮膚膚色、增強(qiáng)色素分布均勻，促進(jìn)血液循環(huán)、清除及減少皮膚垃圾、抑制炎性因子釋放等多種途徑達(dá)到美白的效果。既能達(dá)到肌膚美白的功效，又可以保持皮膚健康。

2.1 促進(jìn)色素均勻化分布

MCH（melanin-concentratinghormone）黑色素聚集激素，最初是從大馬哈魚(yú)垂體腺體中分離出來(lái)的環(huán)形19個(gè)氨基酸的神經(jīng)肽，后來(lái)又從大鼠下丘腦分離出該肽。它調(diào)節(jié)硬骨魚(yú)（teleost）的膚色，使黑色素顆粒在黑色細(xì)胞中聚集。在哺乳動(dòng)物，MCH主要被定位于外側(cè)下丘腦（thelateral hypothalamus）和未定帶區(qū)（zonalncerta），并在大腦內(nèi)有著廣泛的神經(jīng)投射，包括神經(jīng)垂體。解剖分布表明MCH作為神經(jīng)遞質(zhì)或神經(jīng)調(diào)質(zhì)發(fā)揮著有目標(biāo)的行為（goal-directed behavior）調(diào)節(jié)的神經(jīng)功能，如覺(jué)醒，刺激食欲，減少新陳代謝率。MCH調(diào)節(jié)能量平衡，是體內(nèi)的關(guān)鍵能量調(diào)節(jié)器。MCH包括MCH1和MCH2，其中MCH1分布較廣泛，科學(xué)界對(duì)MCH1的研究較深入；而MCH2因其存在較少，已發(fā)現(xiàn)其在靈長(zhǎng)類動(dòng)物及狗、貓等動(dòng)物中存在，但不存在于嚙齒動(dòng)物。目前，MCHR1與其拮抗劑的作用機(jī)制還不太明確。神經(jīng)肽激素可在特定波長(zhǎng)下調(diào)節(jié)激素和褪黑激素的分泌從而影響膚色。

研究表明，MCH的mRNA表達(dá)與色素沉著息息相關(guān)。在色素沉著的個(gè)體中MCH的mRNA的表達(dá)水平明顯低于正常個(gè)體，MCH活性降低可引起色素沉著，同時(shí)MCH對(duì)α-MSH具有一定的拮抗作用。通過(guò)神經(jīng)系統(tǒng)調(diào)控的黑素細(xì)胞中MCH-R2受體，可以激活MCH，皮膚黑色素和黃色素均與MCH有關(guān)，通過(guò)調(diào)節(jié)MCH活力可以抑制黑色素聚集，提升色素分布的均勻性。

2.2 促進(jìn)血液循環(huán)、加速新陳代謝

從中醫(yī)的角度分析，黑色素的過(guò)度沉積是由于氣血阻滯、肝氣郁結(jié)，腎陰不足和勞神傷脾等原因造成。所以醫(yī)學(xué)上常采用具有補(bǔ)血、活血和理氣作用的植物中草藥，通過(guò)養(yǎng)血、活血和舒肝解郁來(lái)減少色素沉著。常用的活血化瘀類植物中紅花、當(dāng)歸和三七等具有顯著的美白功效。

血液循環(huán)不僅為皮膚中的成纖維細(xì)胞、膠原蛋白等提供充足的氧分和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，還可將細(xì)胞的代謝產(chǎn)物和各種有害物質(zhì)如超氧陰離子等及時(shí)清除，從而減少膠原纖維的氧化，維持皮膚中各種細(xì)胞良好的功能，保證皮膚中細(xì)胞的新陳代謝。皮膚微循環(huán)不暢，則血色素凝聚或者含量下降，導(dǎo)致膚色暗紅或蒼白。若皮膚微循環(huán)速度加快，則在單位時(shí)間內(nèi)通過(guò)皮膚血管的紅細(xì)胞數(shù)量增多，紅色的氧化血紅蛋白也隨之增多，從而增加皮膚的紅色素含量，從表觀上就會(huì)發(fā)現(xiàn)膚色變得紅潤(rùn)、有光澤。

2.3 抑制膠原蛋白降解

膠原是細(xì)胞外最重要的水不溶性纖維蛋白，是構(gòu)成細(xì)胞外基質(zhì)的骨架。膠原蛋白是人體內(nèi)含量最豐富的蛋白質(zhì)，占全身總蛋白質(zhì)的30%以上。膠原纖維主要含有膠原蛋白，氨基酸如甘氨酸，脯氨和羥脯氨酸等。皮膚的彈性及松弛度的影響因素主要為真皮層中的膠原纖維，其可賦予皮膚張力和韌性。科學(xué)界對(duì)膠原纖維的研究大多數(shù)集中在皮膚的抗衰老研究。

近幾年，有人提出膠原纖維也與皮膚色澤有很大關(guān)系。一方面，當(dāng)光線照射到人體皮膚時(shí)，一部分光線被皮膚吸收，一部分光線發(fā)生反射，其中評(píng)價(jià)人體膚色主要是通過(guò)進(jìn)入人眼的可見(jiàn)光線量決定的。當(dāng)皮膚內(nèi)膠原纖維分布不均勻或結(jié)構(gòu)變化時(shí)，將導(dǎo)致光線不能被均勻地反射，而使得膚色不均勻且沒(méi)有光澤。另一方面，紫外線、自由基、炎癥因子等刺激可以導(dǎo)致膠原蛋白變性，其顏色發(fā)生改變，導(dǎo)致皮膚暗沉、發(fā)黃、失去光澤。促進(jìn)膠原蛋白合成，可從一定程度上改善膠原蛋白降解及變性對(duì)膚色造成的影響。

基質(zhì)金屬蛋白酶（MMPs）家族是成纖維細(xì)胞分泌的，其主要生理作用為降解細(xì)胞基質(zhì)。MMPs幾乎能降解細(xì)胞基質(zhì)中的各種蛋白成分，是主要的蛋白水解酶。MMPs在發(fā)揮作用時(shí)需要Ca²⁺、Zn²⁺等金屬離子作為輔助因子。與此同時(shí)，在特定條件下，MMPs能夠消化細(xì)胞外基質(zhì)和基底膜成分的跨膜蛋白。MMPs在成纖維細(xì)胞中分泌，當(dāng)有外來(lái)特定信號(hào)刺激這些細(xì)胞時(shí)，MMPs合成增加并立即分泌到細(xì)胞基質(zhì)中去發(fā)揮降解作用。MMPs可以被多種刺激因素激活，如UV照射，生長(zhǎng)因子和細(xì)胞因子。同時(shí)UV照射或其他外部因素的刺激可以導(dǎo)致角質(zhì)形成細(xì)胞內(nèi)部炎癥因子及自由基的釋放，刺激成纖維細(xì)胞跨膜蛋白MMPs過(guò)度表達(dá)，從而引發(fā)膠原蛋白降解。MMPs家族已分離鑒別出26個(gè)成員，編號(hào)分別為MMP1～MMP26。其中，基質(zhì)金屬蛋白酶1（MMP1）主要降解Ⅰ和Ⅲ型膠原明膠及蛋白多糖。所以其過(guò)度表達(dá)會(huì)破壞細(xì)胞外基質(zhì)，破壞膠原纖維的結(jié)構(gòu)和分布，同時(shí)影響成纖維細(xì)胞的正常生長(zhǎng)。當(dāng)膠原纖維結(jié)構(gòu)遭受迫害分布不均時(shí)會(huì)導(dǎo)致照射在皮膚的光線不能被均勻地反射，從而使皮膚顏色呈現(xiàn)不均勻，皮膚粗糙，并且導(dǎo)致皮膚暗淡、無(wú)光澤、光老化。MMP-9和MMP-2與表皮基底膜和細(xì)胞外基質(zhì)降解、皺紋形成有關(guān)，它們可通過(guò)促進(jìn)type Ⅳ膠原蛋白降解，從而導(dǎo)致皮膚老化，皺紋增加，影響皮膚白皙度。

新型美白劑可以從MMPs產(chǎn)生的機(jī)制出發(fā)，通過(guò)抑制MMPs產(chǎn)生，提高膠原蛋白合成，從而改善膚色。

2.4 抗氧化損傷

皮膚中的光敏物質(zhì)或色基吸收UV能量后，通過(guò)電子傳遞可產(chǎn)生ROS。ROS的產(chǎn)生是紫外線破壞真皮層膠原纖維結(jié)構(gòu)的一個(gè)主要原因。一方面ROS通過(guò)引起脂類過(guò)氧化反應(yīng)，生成具有兩個(gè)或多個(gè)官能團(tuán)的羰基化合物（DMCs）。DMCs的活性很強(qiáng)，可以和真皮層中膠原蛋白的氦基交聯(lián)，聚合重疊，生成結(jié)構(gòu)復(fù)雜的物質(zhì)——棕黃色的生物垃圾。丙二醛（MDA）是脂質(zhì)過(guò)氧化過(guò)程中的一個(gè)主要羰基化合物，可評(píng)判脂質(zhì)過(guò)氧化的程度。另一方面，ROS可作為第二信使，參與啟動(dòng)UV輻射后的細(xì)胞內(nèi)信號(hào)傳導(dǎo)，激活絲裂原活化蛋白激酶（MAPK）信號(hào)傳導(dǎo)通路，包括細(xì)胞外信號(hào)調(diào)節(jié)激酶（ERK）、cJun氨基末端激酶（JNK）和p38的活化。MAPK活化進(jìn)一步使原來(lái)在細(xì)胞內(nèi)低表達(dá)的cJun蛋白表達(dá)升高，它與cfos結(jié)合成異二聚體，與其他蛋白質(zhì)一起形成活化的轉(zhuǎn)錄因子AP-1，上調(diào)彈力蛋白基質(zhì)金屬蛋白酶（MMP）等基因的表達(dá)，下調(diào)膠原蛋白的表達(dá)。

2.5 增加角質(zhì)層含水量

角質(zhì)層含水量多少是皮膚健康與否的重要標(biāo)志之一。一般角質(zhì)層含水量占表皮的20%～35%，低于10%皮膚就會(huì)干燥、粗糙。當(dāng)角質(zhì)層過(guò)厚或含水量低時(shí)，皮膚反射光線的能力降低而呈現(xiàn)黯淡的膚色。角質(zhì)層皮膚含水量充分，則使皮膚具有光澤。

2.6 抑制炎癥因子釋放

角質(zhì)形成細(xì)胞釋放的炎癥因子IL-1可刺激ACTH和α-MSH，從而激活角質(zhì)形成細(xì)胞表面PAR2蛋白受體，通過(guò)細(xì)胞外ASP受體，激活黑素細(xì)胞表面的MC1R，進(jìn)而激活黑素合成途徑關(guān)鍵酶及蛋白，使黑素表達(dá)量在炎癥部位增加。對(duì)角質(zhì)形成細(xì)胞炎癥因子釋放的抑制，可以有效緩解由于皮膚組織損傷導(dǎo)致的黑素過(guò)度沉積造成的黑斑、曬斑等。

在黑素細(xì)胞中，Akt磷酸化和ERK或p38磷酸化抑制可以導(dǎo)致炎癥因子的高表達(dá)，研究表明，通過(guò)對(duì)Akt磷酸化的抑制和ERK或p38磷酸化的激活，可以有效抑制炎癥因子釋放，抑制黑素合成。

2.7 阻止黑素轉(zhuǎn)運(yùn)

由黑素細(xì)胞生成的黑色素會(huì)轉(zhuǎn)移至周邊的表皮細(xì)胞（角化細(xì)胞）。以28天作為1個(gè)皮膚周期，吞入了黑色素的角化細(xì)胞經(jīng)過(guò)這個(gè)周期后，將顯現(xiàn)在皮膚表面，從而很大程度上左右了膚色。在轉(zhuǎn)移的過(guò)程中，其中一個(gè)重要的步驟就是角化細(xì)胞的吞噬作用。所謂的吞噬作用是指細(xì)胞將異物吞入細(xì)胞內(nèi)，也可以說(shuō)這是細(xì)胞本身所具有的“食欲”，這種反應(yīng)是本能的防御反應(yīng)。例如與免疫系統(tǒng)有關(guān)的巨噬細(xì)胞和白血球細(xì)胞也會(huì)經(jīng)常發(fā)生。角化細(xì)胞也存在這種吞噬作用，會(huì)出現(xiàn)將黑色素吞入細(xì)胞內(nèi)部的情況。因?yàn)榇嬖谟谠撝苓叺慕腔?xì)胞會(huì)持續(xù)地吞噬由黑素細(xì)胞生成的黑色素，所以角化細(xì)胞在黑色素的作用下呈現(xiàn)黑色化。研究發(fā)現(xiàn)，一旦控制了這種角化細(xì)胞的“食欲”，就可以防止皮膚變黑。

黑素轉(zhuǎn)移至角化細(xì)胞的路徑有很多個(gè)，一般情況下，如果在黑素細(xì)胞內(nèi)合成黑素，黑素細(xì)胞呈樹(shù)狀凸起延伸，受到角化細(xì)胞的吞噬作用，黑素被轉(zhuǎn)移。一旦黑素細(xì)胞內(nèi)蓄積的黑素量過(guò)剩，黑素將排放至細(xì)胞外，排放的黑素在角化細(xì)胞的吞噬作用下被吞噬，即角化細(xì)胞受到吞噬作用，從多個(gè)路徑積極地吞入黑素。另外，還需要關(guān)注的問(wèn)題是，在各個(gè)角化細(xì)胞中，吞入黑素的能力有差別時(shí)，就會(huì)造成角化細(xì)胞的顏色不均勻。而正是因?yàn)檫@種顏色的偏差，造成膚色的不均甚至色斑。事實(shí)上，色斑和實(shí)際年齡存在關(guān)聯(lián)性，隨著年齡的增長(zhǎng)，色斑會(huì)惡化。

通過(guò)熒光微粒的角化細(xì)胞的吞噬作用抑制試驗(yàn)，可以篩選對(duì)角化細(xì)胞吞噬黑色素具有抑制作用的活性物質(zhì)。通過(guò)對(duì)角化細(xì)胞對(duì)黑素吞噬的抑制，實(shí)現(xiàn)黑素細(xì)胞的不表達(dá)，不傳遞到皮膚表面，從而不會(huì)造成肌膚變黑，為新的阻止黑素轉(zhuǎn)運(yùn)的途徑。

2.8 防紫外線

UV照射到皮膚表面，通過(guò)CAMP和PKA介導(dǎo)信號(hào)系統(tǒng)及蛋白激酶C（PKC），可能增加MITF表達(dá)，導(dǎo)致酪氨酸酶活化。通過(guò)特異性PKC抑制劑可減少皮膚的曬黑反應(yīng)，使其毛發(fā)顏色變淡。UV可通過(guò)降低p53表達(dá)和上調(diào)MMP2和MMP9的表達(dá)，從而激活A(yù)K蛋白，導(dǎo)致皮膚色素增加，對(duì)UV的防護(hù)可降低MMP2和MMP9對(duì)黑素生成的影響及對(duì)膠原蛋白分解的影響，從而改變膚色。同時(shí)UVN以刺激皮膚表面自由基的產(chǎn)生，從而在皮膚表面形成脂褐素，可以通過(guò)清除自由基及過(guò)氧化產(chǎn)物發(fā)揮祛斑，防曬及抗皮膚色素沉著的功效。

3.復(fù)方植物美白劑

中醫(yī)認(rèn)為，氣血乃潤(rùn)養(yǎng)肌膚之本，理氣活血，以血養(yǎng)白乃中醫(yī)美白之精髓?，F(xiàn)代研究表明，植物中的有效成分可通過(guò)改善皮膚的微循環(huán)，從而增加皮膚微血管血流量，促進(jìn)身體的營(yíng)養(yǎng)和微量元素的吸收，加快新陳代謝，加速黑色素代謝。同時(shí)可以使皮膚的角質(zhì)形成細(xì)胞和成纖維細(xì)胞等，能夠得到充足的氧分和營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)，使肌膚的細(xì)胞變得飽滿充盈，皮膚更加健康和白皙。

以傳統(tǒng)中藥牡丹皮、甘草，白蒺藜，黃精為主要原料的復(fù)方植物美白劑，是根據(jù)宮廷美容古方演繹而來(lái)。按照“君臣佐使”組方思想進(jìn)行組方，分別從促進(jìn)血液微循環(huán)、促進(jìn)黑素在皮膚表面均勻分布、抗皮膚膠原蛋白降解，抗氧化損傷及提升皮膚水合度幾個(gè)方面發(fā)揮提亮膚色、改善皮膚暗沉、增加皮膚紅潤(rùn)度的作用。

君藥：牡丹皮，中醫(yī)有“諸花皆散”之說(shuō)，即花類藥物具有散瘀，散郁以美白消斑之效。現(xiàn)代機(jī)理研究，其中所含丹皮酚具有促進(jìn)局部血液微循環(huán)的作用。臣藥：白蒺藜，具有祛風(fēng)消斑之效，風(fēng)邪入侵，頭面先傷，邪科腠理，營(yíng)衛(wèi)不和，致氣血不調(diào)，日久生瘀，故與君藥相輔，驅(qū)逐風(fēng)源?，F(xiàn)代科學(xué)研究表明，白蒺藜中的主要活性成分可以抑制炎癥因子及自由基代謝產(chǎn)物，刺激膠原蛋白降解導(dǎo)致的膚色改變。佐藥：甘草，甘溫除熱，清熱祛斑，解肌膚之毒火，火燥結(jié)滯淤于面部，致使顏面氣血不和，致氣滯血瘀，甘草雖為佐使之品，卻有襄贊之功?，F(xiàn)代科學(xué)研究表明甘草中的活性成分可以促進(jìn)色素均勻化分布，改善色素沉積對(duì)膚色造成的影響。使藥：黃精，滋陰養(yǎng)血，潤(rùn)澤肌膚之效。其加入組方中主要通過(guò)增加角質(zhì)層皮膚含水量，使皮膚光澤，改善膚色。

中藥組方的根本思想是在不影響皮膚黑色素合成及代謝的情況下，從不同角度和途徑達(dá)到健康美白肌膚的目的。其具有多成分、多靶點(diǎn)的作用優(yōu)勢(shì)。可以分別從促進(jìn)血液微循環(huán)、促進(jìn)黑色素在皮膚表面均勻分布、抗皮膚膠原蛋白降解，抗氧化損傷及提升皮膚水合度幾個(gè)方面發(fā)揮提亮膚色、改善皮膚暗沉，增加皮膚紅潤(rùn)度的作用。

4.美白效果詮釋

根據(jù)美白作用通路，其美白功效評(píng)價(jià)方法主要包括生化水平評(píng)價(jià)、細(xì)胞水平評(píng)價(jià)和人體評(píng)價(jià)。其中生化水平評(píng)價(jià)試驗(yàn)主要包括功效物質(zhì)的抗氧化損傷測(cè)試；細(xì)胞水平評(píng)價(jià)方法主要包括對(duì)相應(yīng)細(xì)胞中炎性因子，基質(zhì)金屬蛋白酶、黑色素聚集激素、蛋白激酶含量的測(cè)試以及熒光微粒的角化細(xì)胞的吞噬作用抑制試驗(yàn)；人體評(píng)價(jià)試驗(yàn)主要包括對(duì)皮膚顏色的分析以及對(duì)角質(zhì)層含水量的測(cè)試、皮膚血液微循環(huán)的改善性測(cè)試。

復(fù)方植物美白劑是通過(guò)大量的體外生化實(shí)驗(yàn)（酪氦酸酶抑制實(shí)驗(yàn)、抗氧化實(shí)驗(yàn)）篩選出活性較好的植物組合物。通過(guò)成纖維細(xì)胞實(shí)驗(yàn)及黑色素細(xì)胞實(shí)驗(yàn)闡明發(fā)揮美白作用的機(jī)理，同時(shí)通過(guò)人體實(shí)驗(yàn)，分別采用皮膚氧分壓測(cè)試儀及激光多普勒測(cè)試，所得到的提取物配方對(duì)人體皮膚血液微循環(huán)的改變，對(duì)其進(jìn)行人體功效評(píng)價(jià)。

4.1 生化水平評(píng)價(jià)方法

DPPH是一種穩(wěn)定的有機(jī)自由基，在可見(jiàn)光區(qū)最大吸收峰為517nm。在乙醇溶液中，每個(gè)DPPH分子在溶液中可生成一個(gè)穩(wěn)定的含氮自由基，具有典型紫色。當(dāng)它與提供1個(gè)電子的自由基清除劑作用時(shí)，生成無(wú)色產(chǎn)物，使溶液的典型紫色變淺。其褪色程度與配對(duì)電子數(shù)成化學(xué)計(jì)量關(guān)系；因而可用分光光度法進(jìn)行定量分析，來(lái)檢測(cè)自由基清除情況，從而評(píng)價(jià)樣品清除自由基的能力。其能力用清除率來(lái)表示，清除率越大，則表明其清除自由基、抗氧化能力越強(qiáng)。

羥基自由基是活性氧中化學(xué)性質(zhì)最活潑的自由基，它幾乎能與活細(xì)胞中任何生物大分子發(fā)生反應(yīng)，且反應(yīng)速度極快，是對(duì)機(jī)體危害最大的自由基。但在反應(yīng)體系中加入水楊酸，能有效地捕獲OH·，并產(chǎn)生有色產(chǎn)物2.3-二羥基苯甲酸。該有色產(chǎn)物在510nm處有強(qiáng)吸收峰，若在體系中加入具有清除OH·功能的待測(cè)物，且待測(cè)物捕捉OH·的作用大于水楊酸時(shí)，便能及時(shí)清除OH·，從而使有色產(chǎn)物的生成量減少，導(dǎo)致吸光度減小。所以采用固定反應(yīng)時(shí)間法，在510nm處測(cè)量含待測(cè)物反應(yīng)液的吸光度，并與空白液比較，便能測(cè)定待測(cè)物對(duì)OH·的清除作用。

亞鐵離子螯合能力測(cè)定、抗氧化劑可以作為活性氧的淬滅劑、自由基受體或金屬離子螯合劑等多種方式阻止自由基鏈?zhǔn)椒磻?yīng)，消除脂質(zhì)過(guò)氧化等其他物質(zhì)的氧化對(duì)生物體的傷害。因此測(cè)定金屬離子如亞鐵離子螯合能力的大小也是評(píng)價(jià)氧化劑抗氧化性能常用的方法。

4.2 細(xì)胞水平評(píng)價(jià)方法

根據(jù)上述美白機(jī)理新途徑可知：細(xì)胞中產(chǎn)生的炎性因子、基質(zhì)金屬蛋白酶、黑色素聚集激素、蛋白激酶含量都會(huì)直接或間接地對(duì)皮膚的顏色、光澤等產(chǎn)生重要影響。

選擇皮膚真皮成纖維細(xì)胞為實(shí)驗(yàn)材料，研究功效物質(zhì)對(duì)皮膚暗沉老化的保護(hù)作用。分別測(cè)定功效物質(zhì)對(duì)人皮膚成纖維細(xì)胞增殖率、膠原蛋白含量，SOD的活性，脂質(zhì)過(guò)氧化程度的影響，以及對(duì)成纖維細(xì)胞MMP1，2，9的表達(dá)影響，闡明樣品對(duì)膠原蛋白合成的促進(jìn)及抗氧化損傷的作用機(jī)制。

黑素是影響人皮膚顏色的重要因素，功效物質(zhì)對(duì)黑素的分布均勻度也會(huì)產(chǎn)生一定的影響。故可通過(guò)培養(yǎng)人黑素細(xì)胞后加入功效物質(zhì)，利用共聚焦顯微鏡觀察功效物質(zhì)對(duì)黑素分布均勻度的影響。同時(shí)通過(guò)測(cè)定MCH活性及mRNA表達(dá)可以測(cè)定樣品對(duì)黑素均勻分布影響的作用機(jī)制。

4.3 人體評(píng)價(jià)方法

可以通過(guò)Lab色度分析，考察樣品對(duì)膚色的整體改變。激光多普勒法檢測(cè)皮膚血液微循環(huán)，利用氦氖激光管發(fā)出激光束經(jīng)探頭照射至被測(cè)組織，觀察被測(cè)組織血管中的紅細(xì)胞數(shù)差以判斷血流量大小。經(jīng)皮氧分壓監(jiān)測(cè)儀利用電化學(xué)原理通過(guò)電極經(jīng)皮對(duì)血液中的血氧進(jìn)行測(cè)量，間接測(cè)定皮膚局部的血液微循環(huán)。角質(zhì)層含水量測(cè)試儀測(cè)定角質(zhì)層的含水量，從而比較不同樣品作用于皮膚后皮膚水分含量的變化。

結(jié)果表明，組方提取物可以從整體上改善提亮膚色、加速血液微循環(huán)，促進(jìn)黑素代謝及提高角質(zhì)層含水量以達(dá)到健康美白肌膚的目的。

5.結(jié)語(yǔ)

隨著美白產(chǎn)品研究的深入，現(xiàn)代人對(duì)美白化妝品有了更高、更新的追求，美白和健康肌膚并進(jìn)。崇尚自然之美，追求美白的同時(shí)又得到了肌膚的營(yíng)養(yǎng)，使皮膚從內(nèi)到外真正達(dá)到白皙和充盈。應(yīng)用可以達(dá)到活血化瘀、疏通瘀阻，具備充足營(yíng)養(yǎng)的中草藥植物成分作為美白劑，添加到美白產(chǎn)品中，開(kāi)發(fā)出健康、環(huán)保，綠色和高效的美白產(chǎn)品。健康科學(xué)美白才是美白化妝品發(fā)展的新趨勢(shì)。

參考文獻(xiàn)：（略）