左歸丸和巴氯芬聯(lián)用對(duì)腦癱鼠運(yùn)動(dòng)認(rèn)知的影響

李 玲，焦銀香，張 菡，李 靜，李紅霞

(1.陜西省康復(fù)醫(yī)院，陜西 西安710061；2.未央?yún)^(qū)張家堡社區(qū)健康服務(wù)中心，陜西 西安710021；3.西安交通大學(xué)藥學(xué)院，陜西 西安710061)

左歸丸和巴氯芬聯(lián)用對(duì)腦癱鼠運(yùn)動(dòng)認(rèn)知的影響

李 玲1，焦銀香2，張 菡3，李 靜3，李紅霞1

(1.陜西省康復(fù)醫(yī)院，陜西 西安710061；2.未央?yún)^(qū)張家堡社區(qū)健康服務(wù)中心，陜西 西安710021；3.西安交通大學(xué)藥學(xué)院，陜西 西安710061)

目的 探討左歸丸和巴氯芬聯(lián)用對(duì)新生腦癱大鼠運(yùn)動(dòng)協(xié)調(diào)能力和認(rèn)知能力的影響，并研究其可能的機(jī)制。方法 隨機(jī)將SD大鼠分為假手術(shù)組、腦癱(CP)模型未給藥組、CP模型左歸丸組、CP模型巴氯芬組以及CP模型左歸丸+巴氯芬聯(lián)用組。分別于藥物處理前，處理7、14、21、28天及治療結(jié)束后7天時(shí)分別測(cè)定各組大鼠神經(jīng)行為學(xué)指標(biāo)，治療結(jié)束后7天后測(cè)定血清中腫瘤壞死因子(TNF-α)，一氧化氮合酶(NOS)和腦組織中丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)的變化。結(jié)果 巴氯芬治療組和聯(lián)用組在服藥14天后與同期CP模型未給藥組比較肌張力顯著降低(t值分別為4.603、5.590，均P<0.05)，通過(guò)平衡木時(shí)間縮短(t值分別為6.337、5.575，均P<0.05)；而左歸丸組于治療28天后，大鼠通過(guò)平衡木時(shí)間才顯著縮短(t=6.124，P<0.05)。左歸丸治療組和聯(lián)用組大鼠服藥28天后學(xué)習(xí)記憶能力較CP模型未給藥組明顯改善(t值分別為-4.314、-5.314，均P<0.05)；聯(lián)用組效果優(yōu)于左歸丸組(t=-2346，P<0.05)；而巴氯芬處理組大鼠則無(wú)明顯變化(t=-2.025，P>0.05)。與CP模型未給藥組相比，左歸丸組以及聯(lián)用組大鼠的TNF-α、NOS和MDA顯著降低，SOD顯著升高，同時(shí)神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)和腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)mRNA和蛋白水平升高(左歸丸組：t值分別為2.456、4.898、5.803、-6.144，-4.224、-5.124、-3.272、-4.166；聯(lián)用組：t值分別為2.833、5.009、9.078、-6.056，-7.439、-7.142、-5.812、-4.301；均P<0.05)，聯(lián)用組的作用比左歸丸組更強(qiáng)(t值分別為2.613、3.241、2.624、-3.194、-3.275、-4.002、-3.986、-2.881，均P<0.05)，而巴氯芬組上述指標(biāo)無(wú)明顯變化(P>0.05)。結(jié)論 左歸丸和巴氯芬聯(lián)用與單獨(dú)用藥相比能明顯改善大鼠運(yùn)動(dòng)，且有可能通過(guò)保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞，促進(jìn)神經(jīng)元的修復(fù)來(lái)改善其認(rèn)知功能。

左歸丸；巴氯芬；聯(lián)用；小兒腦癱；動(dòng)物模型

小兒腦性癱瘓(簡(jiǎn)稱(chēng)腦癱，cerebral palsy，CP)是指發(fā)生于受孕期至嬰兒期的一種非進(jìn)行性腦損傷和發(fā)育缺陷所導(dǎo)致的綜合征，主要表現(xiàn)為姿勢(shì)異常與運(yùn)動(dòng)障礙，并發(fā)不同程度智力障礙、癲癇、感知和交流障礙以及其他異常。據(jù)報(bào)道，我國(guó)小兒腦癱的患病率約為1.8～6.0‰，因此腦癱是當(dāng)今導(dǎo)致兒童殘疾的主要原因之一。腦癱的發(fā)病機(jī)制復(fù)雜，是多因素綜合作用的結(jié)果，高危因素中以早產(chǎn)、窒息、核黃疸為主[1]。

腦癱常用的治療方法主要是中西醫(yī)藥物、手術(shù)治療、中醫(yī)針灸按摩和康復(fù)訓(xùn)練等多種手段相結(jié)合的綜合治療方法[2]。盡管腦癱的治療已取得很大的進(jìn)步，但目前的治療僅限于對(duì)癥支持，缺乏特效治療。巴氯芬為氨基丁酸激動(dòng)劑，可抑制異常的單突觸伸肌活動(dòng)和多突觸的屈肌活動(dòng)，降低肌張力，還可抑制興奮神經(jīng)遞質(zhì)的釋放，弱化疼痛感受，從而改善腦癱癥狀，但臨床上巴氯芬口服吸收效率差，而鞘內(nèi)注射則會(huì)導(dǎo)致腦脊液漏和感染等并發(fā)癥發(fā)生率升高，且停藥后易反彈[3]。左歸丸方源自《景岳全書(shū)》，為真陰不足精髓內(nèi)虧所致諸證而設(shè)，具有補(bǔ)腎益髓之功效。研究表明左歸丸可能通過(guò)調(diào)節(jié)氨基酸類(lèi)神經(jīng)遞質(zhì)受體表達(dá)，改善神經(jīng)內(nèi)分泌穩(wěn)態(tài)[4]。本文將應(yīng)用單側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎結(jié)合缺氧的方法建立新生腦癱大鼠動(dòng)物模型，研究左歸丸、巴氯芬以及二者聯(lián)用對(duì)腦癱大鼠神經(jīng)運(yùn)動(dòng)學(xué)行為以及學(xué)習(xí)記憶能力的影響，并進(jìn)一步探討其作用機(jī)制。

1 實(shí)驗(yàn)材料和方法

1.1 實(shí)驗(yàn)動(dòng)物和藥品及試劑

7日齡新生清潔級(jí)SD大鼠(12～15g)，由第四軍醫(yī)大學(xué)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供。

巴氯芬，10mg/片。左歸丸(組成：熟地黃、菟絲子、牛膝、龜甲膠、鹿角膠、山藥、山茱萸、枸杞子)國(guó)藥準(zhǔn)字：Z41020696，使用前用生理鹽水配制成相應(yīng)濃度的溶液。腫瘤壞死因子(TNF-α)、一氧化氮合酶(NOS)、丙二醛(MDA)和超氧化物歧化酶(SOD)，ELISA試劑盒(南京建成生物研究所)；神經(jīng)生長(zhǎng)因子(NGF)和腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子(BDNF)抗體(美國(guó)Santa Cruz)。

1.2 腦癱大鼠模型建立

7日齡SD新生鼠注射三氟溴氯乙烷麻醉后取仰臥位固定在木板上，75%酒精消毒皮膚，行頸部正中切口，分離皮下脂肪，血管鉗分離出左頸總動(dòng)脈，并用7號(hào)滅菌絲線(xiàn)雙線(xiàn)結(jié)扎并剪斷血管，術(shù)中用明膠海綿止血，縫合傷口并再次消毒皮膚，整個(gè)手術(shù)過(guò)程在10分鐘內(nèi)完成。而后37℃水浴箱復(fù)溫，回籠休息2～4小時(shí)，放入37℃恒溫的密閉缺氧箱內(nèi)，向缺氧箱內(nèi)通含8%氧氣和92%氮?dú)獾幕旌蠚怏w(氣流量0.5L/min，溫度為37℃，濕度為70%±5%)，低氧處理2h后取出，繼續(xù)保溫1h。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，放回鼠籠由母鼠行母乳喂養(yǎng)。

實(shí)驗(yàn)動(dòng)物分組及給藥：將實(shí)驗(yàn)大鼠隨機(jī)分為5組，即假手術(shù)組、CP模型未給藥組、巴氯芬組、左歸丸組以及巴氯芬和左歸丸聯(lián)用組，每組動(dòng)物10只。假手術(shù)組大鼠僅予以分離左頸總動(dòng)脈，不予結(jié)扎和缺氧處理，其他組大鼠均行單側(cè)頸總動(dòng)脈結(jié)扎手術(shù)并結(jié)合缺氧處理。假手術(shù)組和CP模型未給藥組：正常喂養(yǎng)，灌胃同體積生理鹽水；左歸丸組：左歸丸3g·kg-1·d-1灌胃；巴氯芬組：10mg·kg-1·d-1灌胃；左歸丸+巴氯芬組：左歸丸3g·kg-1·d-1+巴氯芬10mg·kg-1·d-1灌胃。造模成功后第1天起連續(xù)灌胃4周。

1.3 肌張力測(cè)定

各組大鼠分別于治療前、治療7、14、21和28天后對(duì)后肢肌張力進(jìn)行測(cè)定。將電刺激針插入后肢股四頭肌內(nèi)，一端連接于WQ9E痛閾測(cè)量?jī)x。在大鼠后肢下端系一絲線(xiàn)，絲線(xiàn)經(jīng)傳感器與LMS-2A 型生理記錄儀相連接，定時(shí)對(duì)股四頭肌進(jìn)行刺激通過(guò)記錄儀記錄后肢伸直的幅度，并均以雙側(cè)后肢分別進(jìn)行評(píng)定分級(jí)，每只大鼠的肌張力分級(jí)為雙側(cè)分級(jí)的均值。

1.4 平衡木行走試驗(yàn)

分別于治療前、服藥7，14，21，28天分別應(yīng)用平衡木行走實(shí)驗(yàn)對(duì)大鼠運(yùn)動(dòng)整合及協(xié)調(diào)能力進(jìn)行評(píng)價(jià)[5]。平衡木寬1.5cm，長(zhǎng)100cm，平放在距離地面50cm高處，兩端分別連接長(zhǎng)12.5cm方形平臺(tái)，其中一端放置25cm×25cm×20.5cm開(kāi)口向平衡木的黑色箱子。大鼠向箱子處行走以逃避外界噪音干擾，用秒表記錄大鼠通過(guò)100cm平衡木所需的時(shí)間。

1.5 Y迷宮試驗(yàn)

Y迷宮試驗(yàn)參照徐秉炬的方法進(jìn)行[6]。結(jié)果記錄20次反應(yīng)中的正確反應(yīng)次數(shù)。測(cè)試分別于治療前、服藥14、21和28天時(shí)以及停藥后7天進(jìn)行。

1.6 逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)

末次給藥處理后第7天，每組任取5只小鼠腹腔注射戊巴比妥鈉(50mg/kg)進(jìn)行麻醉，中性福爾馬林溶液心臟灌流犧牲動(dòng)物，取腦組織勻漿低溫離心。采用RNA iso plus kit試劑盒提取組織總RNA，按照試劑盒要求操作。引物序列：NGF：5'-CTG GAC CCA AGC TCA CCT CA-3'(sense)，5'-GTG GAT GAG CGC TTG CTC G -3' (antisense)；BDNFL：5'-CTG ACC AGT TTG ATG ACG TC-3' (sense)，5'-TCT AAA AAC GAC AGG TCG TC-3'(antisense)；β-actin，5'-CTT AGT TGC GTT ACA CCC TTT CTT G-3'(sense)，5'-CTG TCA CCT TCA CCG TTC CAG TTT-3' (antisense)。按實(shí)驗(yàn)室常規(guī)方法進(jìn)行聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)擴(kuò)增。反應(yīng)條件為：94℃預(yù)變性10分鐘，94℃變性30秒，60℃退火1分鐘，72℃延伸3分鐘，30個(gè)循環(huán)后，72℃延伸5分鐘。以β-actin為內(nèi)參，計(jì)算各樣本NGF和BDNF的mRNA的相對(duì)表達(dá)量。

1.7 蛋白質(zhì)印跡法

末次給藥處理后第7天，取各組大鼠腦組織加裂解液進(jìn)行勻漿，離心后取上清，采用BCA試劑盒測(cè)定蛋白濃度。制備10%聚丙烯酰胺凝膠，冰浴進(jìn)行電泳，電泳后轉(zhuǎn)移至PVDF膜，5%脫脂奶粉4℃封閉2小時(shí)后加5%脫脂奶粉稀釋好的一抗，室溫反應(yīng)60分鐘；用TBST緩沖液洗膜10分鐘×3次；加入辣根過(guò)氧化物酶標(biāo)記的NGF、BDNF二抗室溫孵育2小時(shí)。洗膜后ECL發(fā)光，X-光片顯影、定影、掃描儀掃描膠片。采用Image-ProPlus 6.0軟件對(duì)NGF和BDNF蛋白條帶進(jìn)行定量分析，以β-actin作為內(nèi)參。

1.8 酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)

末次給藥處理后第7天，分別取各組大鼠血清和腦組織，利用酶聯(lián)免疫吸附反應(yīng)(ELISA)法測(cè)定各組大鼠血清中TNF-α，NOS以及腦組織中MDA、SOD的含量，具體步驟按說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。

1.9 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法

以SPSS 12.0統(tǒng)計(jì)分析軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)，采用t檢驗(yàn)分析，組間比較采用方差分析，P<0.05為差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 左歸丸與巴氯芬聯(lián)用對(duì)腦癱大鼠肌張力及后肢運(yùn)動(dòng)功能的影響

為了評(píng)價(jià)左歸丸與巴氯芬聯(lián)用對(duì)腦癱大鼠運(yùn)動(dòng)能力的改善作用，本研究分別測(cè)定了治療前以及治療28天內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)各組大鼠后肢肌張力等級(jí)與運(yùn)動(dòng)能力，結(jié)果顯示，與假手術(shù)組大鼠相比，CP模型未給藥組大鼠肌張力等級(jí)顯著升高(t=-26.67，P<0.05)。與治療前和同期CP模型未給藥組相比，左歸丸治療組大鼠在灌胃服藥28天之后肌張力明顯降低(t值分別為4.365和3.825，均P<0.05)。而巴氯芬治療組以及聯(lián)用組大鼠在藥物處理14天后肌張力均顯著下降(與治療前比，t值分別為4.563和3.986；與同期CP模型比，t值分別為4.603和5.590；均P<0.05),見(jiàn)表1。另外，在平衡木行走試驗(yàn)中，CP模型未給藥組大鼠通過(guò)平衡木的時(shí)間顯著增加(t=-11.997，P<0.05)，而巴氯芬單用組以及聯(lián)用組可在14天后顯著縮短大鼠通過(guò)平衡木的時(shí)間(t值分別為6.337和5.575，P<0.05)，且聯(lián)用組效果優(yōu)于巴氯芬單用組，而左歸丸組于治療28天后，大鼠通過(guò)平衡木時(shí)間顯著縮短(t=6.124，P<0.05)，見(jiàn)圖1。

表1 各組大鼠治療前和治療后肌張力評(píng)級(jí)

注：與治療前相比*P<0.05；與同期模型組比較#P<0.05。

圖1 各組大鼠不同時(shí)間點(diǎn)通過(guò)平衡木所用時(shí)間

Fig.1 The time used to get through the balance for rats of different groups at different time point

2.2 左歸丸與巴氯芬聯(lián)用對(duì)大鼠學(xué)習(xí)記憶能力的影響

分別于治療前、服藥28天內(nèi)不同時(shí)間點(diǎn)以及停藥后7天測(cè)定各組大鼠Y迷宮試驗(yàn)正確反應(yīng)次數(shù)，結(jié)果顯示，模型未給藥組大鼠反應(yīng)次數(shù)于同期假手術(shù)組相比顯著下降(t=9.375，P<0.05)。左歸丸治療組大鼠在服藥21天后，反應(yīng)次數(shù)較治療前顯著升高(t=-3.652，P<0.05)；28天后顯著高于同期CP模型未給藥組(t=-4.314，P<0.05)；且停藥7天后，療效仍可維持。巴氯芬治療組大鼠則在治療前后反應(yīng)次數(shù)無(wú)明顯變化(t=-2.025，P>0.05)，同時(shí)，巴氯芬與左歸丸聯(lián)用組大鼠也在治療21天后較治療前學(xué)習(xí)記憶能力顯著改善(t=-2.303，P<0.05)，并且改善效果略?xún)?yōu)左歸丸單用(t=-2346，P<0.05)，見(jiàn)表2。

表2 各組大鼠治療前和治療后Y迷宮正確反應(yīng)次數(shù)變化

2.3 左歸丸與巴氯芬聯(lián)用對(duì)大鼠組織細(xì)胞因子和氧化應(yīng)激水平的影響

利用ELISA法分別測(cè)定各組大鼠血清中TNF-α和NOS以及腦組織中SOD和MDA的水平變化。結(jié)果顯示，CP模型未給藥組大鼠血清中TNF-α、NOS以及腦組織MDA含量顯著高于假手術(shù)組，SOD含量顯著下降(t值分別為-4.628、-8.874、-8.227和9.005，均P<0.05)；與模型組相比，左歸丸單用組和左歸丸與巴氯芬聯(lián)用組可顯著降低TNF-α、NOS和MDA的水平，同時(shí)促進(jìn)SOD含量增加(左歸丸單用組，t值分別為2.456、4.898、5.803和-6.144；聯(lián)用組，t值分別為2.833、5.009、9.078和-6.056；均P<0.05)；而巴氯芬治療組與CP模型未給藥組相比各因子水平無(wú)顯著性差異(t值分別為1.978、-0.082、-2.083和2.164，均P>0.05)；左歸丸與巴氯芬聯(lián)用效果優(yōu)于單用左歸丸(t值分別為-2.613、-3.241、-2.624、-3.194，均P<0.05)。見(jiàn)表3。

表3 各組大鼠細(xì)胞因子和氧化應(yīng)激水平的變化

注：與假手術(shù)組相比*P<0.05；與模型組比較#P<0.05。

2.4 左歸丸與巴氯芬聯(lián)用對(duì)大鼠腦組織神經(jīng)生長(zhǎng)因子和腦源性神經(jīng)營(yíng)養(yǎng)因子表達(dá)的影響

分別利用逆轉(zhuǎn)錄-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和蛋白質(zhì)印跡法(Western Blotting)檢測(cè)各組大鼠腦組織中NGF和BDNF分別在基因轉(zhuǎn)錄水平(mRNA水平)和蛋白表達(dá)水平的變化，結(jié)果顯示，CP模型未給藥組大鼠腦組織NGF和BDNF的mRNA和蛋白水平較假手術(shù)組均明顯降低(t值分別為10.071、10.216，6.942、7.746，均P<0.05)，左歸丸單用組及聯(lián)用組則顯著促進(jìn)了腦癱大鼠NGF和BDNF的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)(左歸丸組NGF和BDNF的基因轉(zhuǎn)錄水平：t值分別為-4.224、-5.124，NGF和BDNF的蛋白表達(dá)水平t值分別為-3.272、-4.166；聯(lián)用組NGF和BDNF的基因轉(zhuǎn)錄水平：t值分別為-7.439、-7.142，NGF和BDNF的蛋白表達(dá)水平：t值分別為-5.812、-4.301；均P<0.05)，而巴氯芬組則對(duì)腦癱大鼠腦組織中NGF和BDNF的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)水平無(wú)明顯影響(NGF和BDNF的基因轉(zhuǎn)錄水平：t值分別為-2.014、-1.955，NGF和BDNF的蛋白表達(dá)水平：-1.749、-1.022；均P>0.05)；與左歸丸組單用組比，聯(lián)用組更能促進(jìn)二者的表達(dá)，見(jiàn)圖2。

A：NGF和BDNF的mRNA水平；B：NGF和BDNF的表達(dá)水平

A: MRNA levels of NGF and BDNF; B: Expression levels of NGF and BDNF

1：假手術(shù)組；2：CP模型未給藥組；3：左歸丸治療組；4：巴氯芬治療組；5：左歸丸+巴氯芬治療組

1:Sham-operated group, 2: CP model without treatment group, 3:Zuoguiwan group, 4: Baclofen group, 5: Zuoguiwan combined with Baclofen group

注：與假手術(shù)組相比*P<0.05；與CP模型未給藥組比較#P<0.05。

圖2 各組大鼠腦組織中NGF和BDNF的mRNA和蛋白表達(dá)水平

Fig.2 MRNA and protein expression levels of NGF and BDNF in brain tissue of different rat groups

3 討論

3.1 藥物聯(lián)用對(duì)腦癱大鼠運(yùn)動(dòng)功能的改善

腦癱是幼兒殘疾病中最嚴(yán)重病因之一，由于環(huán)境污染、高齡產(chǎn)婦增多等原因，腦癱的發(fā)病率呈現(xiàn)上升趨勢(shì)。本文中，與假手術(shù)組大鼠相比，CP模型未給藥組大鼠肌張力等級(jí)顯著升高，通過(guò)平衡木的時(shí)間顯著增加，Y迷宮試驗(yàn)正確反應(yīng)次數(shù)顯著下降，提示建立的動(dòng)物模型符合腦癱的基本特征，可用于后續(xù)研究。

在改善新生腦癱大鼠運(yùn)動(dòng)功能方面，左歸丸可以改善運(yùn)動(dòng)功能，但起效時(shí)間較晚；而巴氯芬和巴氯芬與左歸丸聯(lián)用顯效時(shí)間均較短，而且聯(lián)用治療效果較單用巴氯芬好，提示巴氯芬對(duì)于改善腦癱大鼠運(yùn)動(dòng)功能效果較好，左歸丸具有增強(qiáng)巴氯芬治療效果的作用。

3.2 藥物聯(lián)用可降低腦組織氧化應(yīng)激水平

在CP的發(fā)病過(guò)程中，存在于腦組織中的細(xì)胞因子及其受體對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)的多項(xiàng)生理功能均具有調(diào)控作用。NOS是專(zhuān)一催化NO生物合成的酶，所以體內(nèi)NO的生物作用完全依賴(lài)于NOS。NO氧化產(chǎn)物的大量生成可引起強(qiáng)烈的神經(jīng)毒性，進(jìn)而引起神經(jīng)細(xì)胞損傷。TNF-α是免疫-神經(jīng)-內(nèi)分泌網(wǎng)絡(luò)調(diào)節(jié)的主要分子之一，過(guò)度的TNF-α表現(xiàn)出明顯的神經(jīng)細(xì)胞毒性。MDA水平的變化反映了腦組織自由基的水平和脂質(zhì)過(guò)氧化的程度，同時(shí)也反映了神經(jīng)細(xì)胞的受損程度[7]。本實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明左歸丸治療組和聯(lián)用組大鼠在治療21天后學(xué)習(xí)記憶能力顯著改善，同時(shí)兩組TNF-α、NOS和MDA的水平顯著降低，SOD含量增加，并且聯(lián)用組效果優(yōu)于左歸丸組。因此，推測(cè)左歸丸通過(guò)抑制細(xì)胞因子NOS和TNF-α的生成，保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞，進(jìn)而降低腦組織氧化應(yīng)激性水平；且在藥物聯(lián)用的治療作用上，左歸丸發(fā)揮主要作用，巴氯芬具有增強(qiáng)療效的作用。

3.3 藥物聯(lián)用可促進(jìn)神經(jīng)元修復(fù)

NGF可誘導(dǎo)突觸生長(zhǎng)，刺激胞體增大和促進(jìn)樹(shù)突發(fā)育，促進(jìn)蛋白合成，并促進(jìn)受損的中樞神經(jīng)纖維長(zhǎng)出新的軸突，使其可直接到達(dá)原來(lái)的靶細(xì)胞處，建立新的突觸聯(lián)系。BDNF可以下調(diào)N-甲基-D-天冬氨酸受體功能，抵抗興奮性氨基酸的毒性，減輕自由基對(duì)神經(jīng)元的損傷[8]。實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示，左歸丸單用組以及聯(lián)用組顯著促進(jìn)了腦癱大鼠NGF和BDNF的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)，且聯(lián)用的效果更好，提示藥物通過(guò)促進(jìn)腦組織中NGF和BDNF的合成和分泌，削弱神經(jīng)元的損傷并促進(jìn)神經(jīng)元的修復(fù)，從而改善大鼠學(xué)習(xí)記憶能力。

本文通過(guò)建立CP大鼠模型探究左歸丸和巴氯芬對(duì)新生大鼠腦癱的治療作用，表明左歸丸具有神經(jīng)保護(hù)作用，巴氯芬高效改善運(yùn)動(dòng)功能，左歸丸和巴氯芬聯(lián)用能改善大鼠運(yùn)動(dòng)功能，同時(shí)可能通過(guò)保護(hù)神經(jīng)細(xì)胞，促進(jìn)神經(jīng)元的修復(fù)以改善其認(rèn)知功能。因此，本研究將為腦癱患者的治療提供新的研究方向。

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[專(zhuān)業(yè)責(zé)任編輯：史曉薇]

Effect of combined application of Zuoguiwan and Baclofen on motor and cognition of rats with cerebral palsy

LI Ling1, JIAO Yin-xiang2, ZHANG Han3, LI Jing3, LI Hong-xia1

(1.ShaanxiRehabilitationHospital,ShaanxiXi’an710061,China;
2.WeiyangDistrictZhangjiabuCommunityHealthServiceCenter,ShaanxiXi’an710021,China;
3.PharmacyCollege,Xi’anJiaotongUniversity,ShaanxiXi’an710061,China)

Objective To investigate the effect of the combined application of Zuoguiwan and Baclofen on motor coordination ability and cognitive function of newborn rats with cerebral palsy (CP) and to study its possible mechanism. Methods SD rats were randomly divided into sham-operated group, CP model without treatment group, CP model with Zuoguiwan group, CP model with Baclofen group, and CP model with Zuoguiwan combined with Baclofen group. Neurobehavioral indexes were detected in each group before treatment, 7, 14, 21 and 28 day treatment, and 7 day after treatment, respectively. TNF-α and NOS in serum, and MDA and SOD in brain tissue of rats were measured in each group 7 day after treatment. Results Compared with CP model without treatment group, muscle tension reduced significantly and the time of going through the balance reduced in Baclofen group and Zuoguiwan combined with Baclofen group after having taken the drugs for 14 days (tvalue was 4.603, 5.590, 6.337 and 5.575, respectively, allP<0.05). While Zuoguiwan group shortened the time to go through the balance after 28 day treatment (t=6.124,P<0.05). Compared with CP model without treatment group, the contents of TNF-α, NOS and MDA declined significantly but the levels of SOD, NGF and mRNA rose remarkably (tZuoguiwan groupvalue was 2.456, 4.898, 5.803, -6.144, -4.224, -5.124, -3.272 and -4.166, respectively,tcombined groupvalue was 2.833, 5.009, 9.078, -6.056, -7.439, -7.142, -5.812 and -4.301, respectively, allP<0.05). The efficacy of the combined group was greater than Zuoguiwan group (tvalue was 2.613, 3.241, 2.624, -3.194, -3.275, -4.002, -3.986 and -2.881, respectively, allP<0.05). However, there was no obvious change in Baclofen group (P>0.05). Conclusion Compared with single drug therapy, combined application of Zuoguiwan and Baclofen can improve motor more obviously, and it may improve the cognition function of rats by protecting neurocyte and repairing neuron.

Zuoguiwan；Baclofen;combined application;infant cerebral palsy;rat model

2014-06-12

李 玲(1978-)，女，主治醫(yī)師，主要從事兒童康復(fù)方面的工作。

李紅霞，主任醫(yī)師。

10.3969/j.issn.1673-5293.2015. 02.015

R715.3

A

1673-5293(2015)02-0210-04