急性子提取物抗炎鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究*

丁玉峰，胡敦梅，彭金蘭，李瓊閣，閆興津，杜光，曾凡波

(1.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院藥學(xué)部，武漢 430030；2.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬普愛醫(yī)院內(nèi)科，武漢 430034；3.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，武漢 430030)

急性子提取物抗炎鎮(zhèn)痛作用的實(shí)驗(yàn)研究*

丁玉峰1，胡敦梅1，彭金蘭2，李瓊閣1，閆興津3，杜光1，曾凡波3

(1.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬同濟(jì)醫(yī)院藥學(xué)部，武漢 430030；2.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院附屬普愛醫(yī)院內(nèi)科，武漢 430034；3.華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院，武漢 430030)

目的 探討中藥急性子的抗炎鎮(zhèn)痛效果，為臨床合理應(yīng)用提供理論依據(jù)。方法 采用二甲苯致小鼠耳腫脹、冰醋酸致小鼠扭體反應(yīng)、小鼠熱板法、蛋清致大鼠足腫脹和肉芽腫實(shí)驗(yàn)觀察急性子提取物的抗炎鎮(zhèn)痛效果。結(jié)果 與模型對(duì)照組比較，急性子水提物中、大劑量組小鼠扭體次數(shù)明顯減少(P<0.05)，急性子水提物中、大劑量組大鼠足腫脹減輕。中、大劑量急性子水提物對(duì)小鼠耳腫脹無效，其中大劑量可延長60 min(P<0.01)和90 min(P<0.05)小鼠疼痛閾值；急性子醇提取物大劑量可顯著減少小鼠扭體次數(shù)(P<0.01)，減輕小鼠耳腫脹程度(P<0.05)，明顯延長30 min疼痛閾值(P<0.01)，減輕大鼠腫脹程度；急性子醇提物大劑量可延長60 min疼痛閾值(P<0.01)。急性子提取物對(duì)大鼠肉芽腫無抑制作用。結(jié)論 急性子提取物有一定的鎮(zhèn)痛效果和抑制急性炎癥作用。

急性子提取物；抗炎；鎮(zhèn)痛

急性子為鳳仙花科植物鳳仙花的種子，《本經(jīng)逢原》《醫(yī)林纂要》《本草再新》等記載其有軟堅(jiān)消腫、治外瘍、敗火毒等功效?，F(xiàn)代研究表明，急性子提取物有一定的抗氧化、抗生育、抗腫瘤等作用。急性子化學(xué)成分主要包括脂肪油、黃酮類、萘醌類、皂苷類、揮發(fā)油和多肽及蛋白質(zhì)類等，這些化合物具有一些藥理功效[1]。近年來研究發(fā)現(xiàn)，急性子含有抑制細(xì)菌生長、但對(duì)培養(yǎng)的人體細(xì)胞無毒性作用的多肽[2]。鳳仙花提取物具有拮抗組胺H1受體作用，其地上部分具有抗炎、抗風(fēng)濕、治療瘙癢等作用[3]。筆者在目前已發(fā)現(xiàn)的治療作用基礎(chǔ)上進(jìn)行相關(guān)研究，探討急性子抗炎鎮(zhèn)痛功效。

1 材料與方法

1.1 動(dòng)物 昆明種小鼠，清潔級(jí)，體質(zhì)量(20±2) g，雌雄兼用；斯?jié)娎鄹瘛ざ嗬?Sprague Dawley,SD)大鼠，清潔級(jí)，體質(zhì)量(180±20) g，雌雄各半。均由華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動(dòng)物中心提供，動(dòng)物實(shí)驗(yàn)許可證編號(hào)：SCXK(鄂)2010-0009。飼養(yǎng)條件：溫度(25±2) ℃，相對(duì)濕度75%，光照、黑暗各12 h，普通飼料喂養(yǎng)。

1.2 儀器 電熱恒溫水浴箱(北京市醫(yī)療設(shè)備廠，型號(hào)：GSY3-Ⅱ)，高速粉碎機(jī)(鄭州科豐儀器設(shè)備有限公司，型號(hào)：FW100)，電子天平(OHAUS公司，型號(hào)：AR2140)，游標(biāo)卡尺(中國上海工量具有限公司，型號(hào)：O-300)，電熱恒溫鼓風(fēng)干燥箱(上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司，型號(hào)：DHG-9123A)，手提式壓力蒸汽滅菌器(浙江新豐醫(yī)療器械有限公司，型號(hào)：XFS-280CB)。

1.3 藥物 急性子[武漢神草中藥飲片有限責(zé)任公司，批號(hào)：080424-5，經(jīng)華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院藥學(xué)院張長弓教授鑒定為鳳仙花科鳳仙花屬植物鳳仙花(ImpatiensbalsaminaL.)的干燥成熟種子]，阿司匹林片(神威藥業(yè)有限公司，批號(hào)：1003171，規(guī)格：0.3 g)，蛋清(新鮮雞蛋去殼，取蛋清直接使用)，脫脂棉(河南飄安集團(tuán)有限公司)，試劑均為分析純。

1.4 急性子提取物的制備 根據(jù)急性子所含主要化學(xué)成分及其有關(guān)研究報(bào)道，選擇將其分別進(jìn)行醇提和水提。先將藥材適度粉碎，干燥滅活，置于4 ℃冰箱待用。水提：取藥材粉末，加入石油醚脫脂，過濾石油醚(沸程60～90 ℃)并將藥材中的石油醚揮凈，加入純化水沸提，合并藥液，揮干得干浸膏(收率10%)，備用。醇提：取藥材粉末，加入固定比例的乙醇沸提，合并提取液，回收溶劑，得干浸膏(收率9.5%)，備用。

1.5 急性子提取物鎮(zhèn)痛作用研究

1.5.1 小鼠醋酸扭體法 取小鼠80只，雌雄兼用，按體質(zhì)量隨機(jī)分為8組，每組10只，隨機(jī)分為空白對(duì)照組(純化水)、陽性組(阿司匹林200 mg·kg-1)，醇提物和水提物各小、中、大劑量組(即分別相當(dāng)于生藥材3，6，9 g·kg-1)。均灌胃給藥，連續(xù)給藥3 d，于末次給藥30 min后，腹腔注射0.6%醋酸，10 mL·kg-1，觀察小鼠15 min內(nèi)扭體次數(shù)及出現(xiàn)扭體反應(yīng)的時(shí)間[4-5]。

1.5.2 小鼠熱板法 調(diào)節(jié)恒溫水浴箱，使溫度保持(55±1) ℃，預(yù)熱30 min。取體質(zhì)量(20±2) g雌性小鼠80只，按體質(zhì)量隨機(jī)分為8組，每組10只，即空白對(duì)照組(純化水)、陽性組(阿司匹林200 mg·kg-1)，醇提物和水提物各小、中、大劑量組(即分別相當(dāng)于生藥材3，6，12 g·kg-1)。均灌胃給藥，連續(xù)給藥3 d，末次給藥后30，60，90 min記錄小鼠在熱板上出現(xiàn)舔足所用時(shí)間(s)，作為該鼠的痛閾值。如果痛閾值超過60 s或小鼠跳出，即停止測試而將此時(shí)終止時(shí)間作為小鼠痛閾值[4-5]。

1.6 急性子提取物抗炎作用研究

1.6.1 蛋清致大鼠足跖腫 取SD大鼠50只，按體質(zhì)量隨機(jī)分為8組：空白對(duì)照組8只；陽性組，醇提物和水提物各3個(gè)劑量組(給藥劑量依“1.5.2”項(xiàng)小鼠種屬換算)，每組6只。連續(xù)給藥5 d，最后一次給藥1.5 h后，于大鼠右后足掌腱膜下注入10%新鮮蛋清溶液0.1 mL致炎。測定致炎前及致炎后0.5，1，2，4，6 h右后足跖厚度，以致炎前后足跖厚度差作為腫脹度(致炎后足跖厚度-致炎前足跖厚度)[4-5]。

1.6.2 二甲苯致小鼠耳腫脹 取雄性小鼠80只，分組、給藥劑量同“1.5.2”項(xiàng)，連續(xù)給藥3 d，末次給藥后30 min以二甲苯0.05 mL均勻涂于左耳兩面，右耳作為參照。1 h后處死小鼠，沿耳廓線取兩耳，對(duì)齊后用直徑8 mm打孔器在同一部位分別打下耳片，稱質(zhì)量以左右耳質(zhì)量差表示腫脹度[4-5]。

1.6.3 大鼠棉球肉芽腫實(shí)驗(yàn) 取SD大鼠50只，分組及給藥劑量同“1.6.1”項(xiàng)。棉球(20±1) mg，高壓滅菌，60 ℃烘干。在水合氯醛麻醉下無菌操作，于兩腋下切口，兩側(cè)腋窩部皮下各植入兩個(gè)滅菌棉球，縫合皮膚。給藥方法：術(shù)后第二天給藥，每天一次，連續(xù)7 d。第8天處死大鼠，取出棉球，60 ℃烘干至恒重。肉芽腫質(zhì)量=術(shù)后棉球質(zhì)量-術(shù)前棉球質(zhì)量、抑制率(%)=(空白對(duì)照組肉芽腫平均質(zhì)量-給藥組肉芽腫平均質(zhì)量)/空白對(duì)照組肉芽腫平均質(zhì)量×100%[4-5]。

2 結(jié)果

2.1 急性子提取物鎮(zhèn)痛作用

2.1.1 小鼠醋酸扭體實(shí)驗(yàn) 見表1。與空白對(duì)照組比較，水提物和醇提物中、高劑量組小鼠15 min內(nèi)扭體次數(shù)均明顯減少，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。與空白對(duì)照組比較，陽性組潛伏時(shí)間明顯延長，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。水提物各劑量組鎮(zhèn)痛率與給藥劑量有一定量效關(guān)系趨勢(shì)。

2.1.2 小鼠熱板實(shí)驗(yàn) 見表2。30 min時(shí)，與空白對(duì)照組比較，陽性組和醇提物中、大劑量組舔足時(shí)間均明顯延長，且差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)，醇提物中、大劑量組延長更明顯(P<0.01)。60 min時(shí)，與空白對(duì)照組比較，水提物大劑量組和醇提物大劑量組舔足時(shí)間明顯延長，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.01)。90 min時(shí)，與空白對(duì)照組比較，陽性組和水提物大劑量組舔足時(shí)間明顯延長，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。

2.2 急性子提取物抗炎作用

2.2.1 蛋清致大鼠足跖腫 見表3。0.5 h時(shí)，與空白對(duì)照組比較，水提物和醇提物大劑量組大鼠足腫脹度減輕，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。1和2 h時(shí)，與空白對(duì)照組比較，水提物和醇提物中、大劑量組大鼠足腫脹度減輕，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。

表1 8組小鼠扭體反應(yīng)測定結(jié)果

與空白對(duì)照組比較，*1P<0.01，*2P<0.05

Compared with blank control group，*1P<0.01，*2P<0.05

4 h時(shí)，與空白對(duì)照組比較，水提物中劑量組和醇提物中、大劑量組大鼠足腫脹度減輕，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05或P<0.01)。

2.2.2 二甲苯致小鼠耳腫脹 見表4。與空白對(duì)照組比較，陽性組和醇提物中、大劑量組小鼠耳腫脹度明顯減輕，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05)。

2.2.3 大鼠棉球肉芽腫實(shí)驗(yàn) 見表5。由于小劑量組未造模成功，故表5中只有中、大劑量組數(shù)據(jù)。與空白對(duì)照組比較，水提物、醇提物組對(duì)肉芽腫抑制率差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

3 討論

從本實(shí)驗(yàn)結(jié)果可知，急性子提取物有一定鎮(zhèn)痛效果。在醋酸扭體法實(shí)驗(yàn)中，與空白對(duì)照組比較，中、大劑量醇提物和水提物可明顯減少扭體次數(shù)，且醇提物效果更好，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。與陽性對(duì)照組比較，提取物組間潛伏時(shí)間差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，陽性藥可明顯延長疼痛發(fā)作潛伏時(shí)間。在熱板實(shí)驗(yàn)中，30 min時(shí)，醇提物中、大劑量顯示出一定鎮(zhèn)痛作用；60 min時(shí)，大劑量水提物和醇提物有一定鎮(zhèn)痛作用；90 min時(shí)，只有水提物有抑制小鼠熱致痛的作用。由此推斷，急性子醇提物和水提物中均含有鎮(zhèn)痛物質(zhì)。在兩次鎮(zhèn)痛實(shí)驗(yàn)中，醇提物中劑量組均表現(xiàn)一定程度鎮(zhèn)痛效果，提示可能醇提對(duì)急性子鎮(zhèn)痛物質(zhì)的提取更完全。根據(jù)熱板法實(shí)驗(yàn)結(jié)果，推測水提物鎮(zhèn)痛成分可能較醇提物起效慢，或者水提物中鎮(zhèn)痛成分含量稍低，或者鎮(zhèn)痛效果稍弱。

表2 8組小鼠熱板法試驗(yàn)結(jié)果

與空白對(duì)照組比較，*1P<0.05，*2P<0.01

Compared with blank control group，*1P<0.05，*2P<0.01

表3 急性子提取物對(duì)蛋清致大鼠足腫脹的影響

與空白對(duì)照組比較，*1P<0.05，*2P<0.01

Compared with blank control group，*1P<0.05，*2P<0.01

表4 8組小鼠耳腫脹實(shí)驗(yàn)結(jié)果

與空白對(duì)照組比較，*1P<0.05

Compared with blank control group，*1P<0.05

表5 6組大鼠肉芽腫實(shí)驗(yàn)結(jié)果

與空白對(duì)照組比較，*1P<0.05

Compared with blank control group，*1P<0.05

在耳腫脹實(shí)驗(yàn)中，與空白對(duì)照組比較，中、大劑量醇提物對(duì)小鼠耳腫脹的抑制作用差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。足腫脹實(shí)驗(yàn)中，0.5 h時(shí)，只有水提物和醇提物大劑量組顯示一定的抑制炎癥作用；1～2 h時(shí)，除水提物小劑量組，其他組與對(duì)照組比較均有抑制大鼠足腫脹的作用；4 h時(shí)，水提物大劑量組和醇提物中、大劑量組與對(duì)照組比較，有一定的抑制腫脹的效果。肉芽腫實(shí)驗(yàn)中，急性子提取物未表現(xiàn)出明顯抑制肉芽生長作用。根據(jù)以上結(jié)果，推測急性子提取物含有一定量抑制急性炎癥物質(zhì)，對(duì)慢性炎癥治療效果還需進(jìn)一步確證。醇提物與水提物相比較，其提取物的抑制急性炎癥效果更明顯，即在低劑量組也表現(xiàn)出一定的抑制炎癥作用[6-7]。

目前對(duì)于鳳仙花的花等部位研究較多，但是對(duì)于急性子研究還不足。本研究發(fā)現(xiàn)急性子也具有一定的抗炎鎮(zhèn)痛作用，但其抗炎鎮(zhèn)痛作用的物質(zhì)是否與鳳仙花植物相同，以及兩者間存在的差異，有待進(jìn)一步研究。

[1] 李瓊閣，胡敦梅，丁玉峰.中藥急性子化學(xué)成分及藥理作用的研究進(jìn)展[J].中國藥師，2012，15(2)：262-264.

[2] WANG P，BANG J K，KIM H J，et al.Antimicrobial specificity and mechanism of action of disulfide-removed linear analogs of the plant-derived Cys-rich antimicrobial peptide Ib-AMP1[J].Peptides，2009，30(12)：2144-2149.

[3] LI H J，YU J J，LI P.Simultaneous qualification and quantification of baccharane glycosides in Impatientis Semen by HPLC-ESI-MSD and HPLC-ELSD[J].J Pharma Biomed Anal，2011，54(4)： 674-680.

[4] 徐叔云，卞如濂，陳修.藥理學(xué)實(shí)驗(yàn)方法學(xué)[M].2版.北京：人衛(wèi)生出版社， 2002：7.

[5] 王宗英，陳永好，鄭廣進(jìn)，等.老鼠筋生物堿 A 及其衍生物乙酰老鼠筋生物堿 A 的抗炎鎮(zhèn)痛作用[J].中國醫(yī)院藥學(xué)雜志，2011，31(10)：807-810.

[6] 莫單丹，唐炳蘭，周小雷，等.小鉆提取物抗炎鎮(zhèn)痛活性研究[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2014，33(3):291-294.

[7] 宋艷芹，杜源，孫雪，等.安兒寧顆粒解熱抗炎鎮(zhèn)痛作用[J].醫(yī)藥導(dǎo)報(bào)，2013，32(10)：1300-1302.

DOI 10.3870/yydb.2015.03.004

Experimental Studies on Anti-inflammatory and Analgesic Effects of Extracts ofGardenBalsamSeeds

DING Yufeng1， HU Dunmei1， PENG Jinlan2,LI Qiongge1， YAN Xingjin3， DU Guang1， ZENG Fanbo3

(1.DepartmentofPharmacy，TongjiHospital,TongjiMedicalCollege，HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430030，China; 2.DepartmentofEndocrinology，Pu'aiHospitalAffiliatedwithTongjiMedicalCollege，HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430034，China; 3.SchoolofPharmacy,TongjiMedicalCollege,HuazhongUniversityofScienceandTechnology，Wuhan430030，China)

Objective To investigate the anti-inflammatory and analgesic effects of extracts fromGardenBalsamseeds in order to provide theoretical basis for rational clinical application. Methods The mouse ear swelling induced by xylene, the body torsion induced by acetic acid or hot plate method, the rat foot swelling induced by egg white and granuloma model were set up to study anti-inflammatory and analgesic effects of extracts fromGardenBalsamseeds. Results The water extracts at the middle and high doses reduced the body torsion counts of mice (P<0.05), alleviated the rat toe swelling, but did not affect mice ear swelling.The extracts at the high dose prolonged pain threshold at 60 min (P<0.01) and 90 min (P<0.05); the alcohol extracts at the middle and high doses significantly lowered body twisting counts (P<0.01), attenuated the ear swelling of mice (P<0.05), remarkably prolonged the pain threshold (P<0.01)at 30 min, weakened the rat foot swelling, and elevated 60 min pain threshold at the high doses (P<0.01), but the extracts exerted no effects on the rats granuloma. Conclusion The extracts fromGardenBalsamseeds have anti-inflammatory and analgesic effects.

Extracts ofGardenBalsamseeds; Anti-inflammatory; Analgesia

2014-04-27

2014-06-20

*湖北省自然科學(xué)基金資助項(xiàng)目(2013CFB162)

丁玉峰(1966-)，男，湖北麻城人，主任藥師，碩士生導(dǎo)師，研究方向：藥物新制劑研究、臨床藥學(xué)。電話：027-83663519，E-mail:yfding@tjh.tjmu.edu.cn。

彭金蘭(1964-)，女，湖北麻城人，副主任醫(yī)師，學(xué)士，主要從事內(nèi)分泌臨床工作。電話：027-68831680，E-mail：jlpeng64@163.com。

R286；R965

A

1004-0781(2015)03-0298-05