MIF水平及MIF-173G/C多態(tài)性與恩施地區(qū)土家族銀屑病關(guān)聯(lián)性研究

周發(fā)瓊 雷淑英 吳明珠

MIF水平及MIF-173G/C多態(tài)性與恩施地區(qū)土家族銀屑病關(guān)聯(lián)性研究

周發(fā)瓊 雷淑英 吳明珠

目的:探討恩施地區(qū)土家族銀屑病患者巨噬細胞移動抑制因子(migration inhibitory factor，MIF)表達水平，分析M IF173G/C多態(tài)性與銀屑病發(fā)病關(guān)聯(lián)性。方法對2013年2月至2014年2月恩施中心醫(yī)院收治的245例銀屑病土家族患者及260名土家族健康對照(對照組)，應(yīng)用SNaPshot SNP分型技術(shù)確定MIF-173G/C等位基因型，ELISA法檢測血清中MIF水平。比較病例組和對照組MIF表達水平以及MIF-173G/C基因型和等位基因頻率的差異。結(jié)果銀屑病組MIF水平明顯高于對照組(P＜0.01);MIF基因173G/C基因型和等位基因頻率在2組間分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，銀屑病組CC基因型和C等位基因頻率均顯著高于對照組(P＜0.01);相對于GG基因型，暴露于CG、CC基因型的相對危險度分別為1.46(95%CI:1.01～2.10，P＜0.05)和5.19(95%CI:1.69～15.89，P＜0.01);MIF173G/C多態(tài)性3種基因型GG、GC、CC的銀屑病患者的臨床特征比較，顯示家族史、尋常型銀屑病差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。結(jié)論MIF-173G/C可能是恩施地區(qū)土家族銀屑病患者發(fā)病的遺傳危險因素之一，其機制是該多態(tài)性對影響MIF表達水平。

巨噬細胞移動抑制因子;MIF-173G/C多態(tài)性;銀屑病

銀屑病(psoriasis)是一種皮膚科一種較為常見的疾病。其臨床特征為慢性炎性疾病，病程較長，易反復(fù)發(fā)作甚至終生不愈。銀屑病發(fā)病以青壯年為主，嚴(yán)重影響患者的身體健康和精神狀況。近年來隨著免疫，生物制劑以及激素等療法的綜合利用，銀屑病治療效果取得令人滿意的臨床效果，然而少數(shù)患者臨床療效較差，提示了解銀屑病發(fā)病機制顯得尤為重要。現(xiàn)已經(jīng)明確銀屑病發(fā)病與機體免疫紊亂，遺傳，感染等因素密切相關(guān)［1］。臨床上銀屑病呈現(xiàn)出一定的家族聚集性，提示銀屑病是一種與遺傳因素密切相關(guān)的疾?。?－4］。鑒于炎癥和遺傳因素在銀屑病發(fā)病中的作用，本文探討恩施地區(qū)土家族銀屑病患MIF表達水平，分析MIF173G/C多態(tài)性與銀屑病易感性關(guān)系。

1 資料與方法

1.1 一般資料選取恩施中心醫(yī)院2013年2月至2014年2月皮膚科收治銀屑病患者245例，符合銀屑病的診斷標(biāo)準(zhǔn)［5］;其中男110例，女135例;年齡22～75歲。選擇260例健康體檢者為對照組，男120例，女140例;年齡20～67歲。所有受試對象為恩施地區(qū)土家族，在進入本研究之前告之患者，取得患者同意后才進入本研究。排除標(biāo)準(zhǔn):所有納入研究人員無明顯免疫風(fēng)濕性疾病、無高血壓、糖尿病、嚴(yán)重肝腎疾病、惡性腫瘤、慢性消耗性疾病以及嚴(yán)重感染性疾病，近3個月無服用免疫抑制劑以及激素史。

1.2 試驗方法

1.2.1 血清MIF水平測定:所有納入研究對象在入院后第2天或門診就診時晨起空腹外周靜脈血2 ml，4℃恒溫低速離心分離血清，－20℃保存。酶聯(lián)免疫吸附試驗法檢測血清MIF水平，操作方法按照上海依科賽生物制品有限公司MIF試劑盒檢測。

1.2.2 MIF-173位點單核苷酸多態(tài)性的檢測:在經(jīng)患者或者其家屬同意并簽署知情同意書后，取患者肘靜脈血2 ml，采用DNA提取試劑盒(上海泛柯生化試劑公司)提取DNA，并－20℃保存。按照文獻設(shè)計MIF-173 G/C引物以及基因型分析［6］PCR上游引物:5’-ACTAAGAAAGACCCGAGG-3’下游引物5’-TGGCA GAAGGACCAGGAGAC-3’PCR產(chǎn)物產(chǎn)物為330 bp。擴增條件為變性95℃，5 min，變性95℃，30 s退火54℃40 s延伸72℃，45 s，共34個循環(huán)。利用SNaPshot SNP分型技術(shù)MIF-173G/C位點進行分型。

1.3 統(tǒng)計學(xué)分析基因型與等位基因型頻率采用頻率計數(shù)法計算，研究對象基因型與Hardy-Weinberg平衡檢驗、組間基因型與等位基因頻率的比較均采用χ2檢驗。并以比數(shù)比(odds ratio，OR)及其95%可信區(qū)間(confidence intervals，CI)表示相對風(fēng)險度。logistic回歸分析MIF-173G/C多態(tài)性位點和銀屑病之間的相關(guān)性MIF血清濃度作為計量資料以±s表示，2組間比較采用t檢驗，P＜0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 MIF-173G/C多態(tài)性的分布與比較經(jīng)過預(yù)擴增、然后預(yù)擴增產(chǎn)物純化、最終延伸反應(yīng)以及延伸產(chǎn)物純化。銀屑病組GG，GC，CC基因型頻率分別是52.25%，41.22%，6.53%;對照組基因型頻率為63.84%，34.62%，1.54%;進行Hardy-Weinberg平衡定律的吻合度檢驗結(jié)果:銀屑病組(χ2=0.44，P＞0.05)，對照組(χ2=4.50，P＜0.05)。以GG基因型為參照，暴露于CG、CC基因型的OR分別1.46(95% CI:1.01～2.10，P＜0.05)和5.19(95%CI1.69～15.89，P＜0.01)。可見隨等位基因C的增加，患銀屑病的風(fēng)險顯著增加(χ2=10.59，P＜0.01)。以G等位基因為參照，暴露于C等位基因的OR值1.53 (95%CI:1.14～2.50，P＜0.01)。見表1。

表1 2組MIF-173G/C多態(tài)性頻率的分布比較

2.2 病例組不同臨床特征患兒的基因型分析對病例組245例患兒分別進行l(wèi)ogistic回歸分析MIF-173G/ C多態(tài)性位和臨床資料之間的相關(guān)性發(fā)現(xiàn)，男女兒童的基因型差異無統(tǒng)計學(xué)意義(χ2=0.888，P＞0.05)，對是否有銀屑病家族史(χ2=26.798，P＜0.01)，是否為尋常型銀屑病(χ2=0.786，P＞0.05)，是否處于活動期(χ2=12.426，P＜0.05)。見表2。

表2 不同臨床特銀屑病患者的MIF-173G/C基因分型情況例

2.3 結(jié)核病患者血清MIF表達水平分析組銀屑病患者MIF水平較對照組明顯升高(P＜0.01)。同基因型病例組與對照組血清MIF比較均有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。比較銀屑病組三種MIF-173 G/C基因型患者血清MIF濃度比較差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)。而健康對照組三種MIF-173 G/C基因型血清MIF濃度比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。見表3。

表3 2組MIF173G/C血清MIF表達水平比較pg/ml，±s

表3 2組MIF173G/C血清MIF表達水平比較pg/ml，±s

注:與對照組比較，*P＜0.05;與GG基因型比較，#P＜0.05;與GC比較，△P＜0.05

組別總數(shù)基因型GG GC CC銀屑病組(n=245)804±70*424±24*890±69*#814±58*#△對照組(n=260)369±60 373±48 344±59 394±51

3 討論

研究表明，炎性介質(zhì)相關(guān)基因及表達的蛋白在銀屑病等免疫性疾病的發(fā)生發(fā)展過程中起到至關(guān)重要的作用。MIF是一個關(guān)鍵的前炎性因子，是由T淋巴MIF分子含有115個氨基酸殘基，其相對分子質(zhì)量約為12 5 kDa，其編碼基因位于22號染色體長臂(22q11.2)的保守區(qū)［7］。正常情況下機體垂體以及單核巨細胞也會分泌少量的MIF［8，9］。MIF具有眾多生物學(xué)效應(yīng)，其主要效應(yīng)有免疫調(diào)節(jié)功能，促進血管新生，酶學(xué)活性［10］。MIF蛋白通過多種信號傳導(dǎo)通路促進角質(zhì)的形成、炎性細胞浸潤及真皮乳頭微血管擴張增生［10］。

基于MIF分子主要生物效應(yīng)可能在銀屑病發(fā)生發(fā)展中可能起著潛在作用，本研究旨在探討恩施地區(qū)土家族銀屑病患者巨噬細胞移動抑制因子表達水平，分析MIF173G/C多態(tài)性與銀屑病發(fā)病關(guān)聯(lián)性，結(jié)果表明銀屑病組MIF水平明顯高于對照組(P＜0.05)，這一發(fā)現(xiàn)與國外學(xué)者Shimizu等［11］相似?；蚨鄳B(tài)性與疾病的關(guān)聯(lián)性近來成為基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)領(lǐng)域的一個研究熱點，MIF基因存在多個位點基因多態(tài)性，其中MIF的cDNA序列中第173位堿基單核苷酸多態(tài)性研究較為廣泛。本研究發(fā)現(xiàn)MIF基因173G/C基因型和等位基因頻率在2組間分布差異有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，銀屑病組CC基因型和C等位基因頻率均顯著高于對照組(P＜0.05)，該該結(jié)果與國外學(xué)者研究發(fā)現(xiàn)［7］一致。國外學(xué)者發(fā)現(xiàn)MIF173G/C多態(tài)性與其他系統(tǒng)性紅斑狼瘡，炎性腸疾病等免疫性疾病有關(guān)［12，13］。銀屑病組三種MIF-173G/C基因型患者血清MIF濃度比較具有統(tǒng)計學(xué)差異，而健康對照組3種MIF-173 G/C基因型血清MIF濃度比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。基因型的異同導(dǎo)致血清MIF水平不一可能是恩施地區(qū)土家族MIF173G/C多態(tài)性與銀屑病存在關(guān)聯(lián)性的分子機制之一。而本研究銀屑病組中是否為尋常型銀屑病及是否有銀屑病家族史的患者其MIF173G/C的SNP的基因型存在顯著差別，表現(xiàn)為尋常型銀屑病和有銀屑病家族史的患者基因型以GC為主，因此，推測其基因型的不同可能與銀屑病的發(fā)生及預(yù)后有關(guān)。

本研究提示，MIF基因變異可能參與了銀屑病的發(fā)生發(fā)展，其對銀屑病的早期篩查，基因型診斷早期治療可能會有一定的輔助作用，但其確切分子機制尚需得到進一步研究。本次研究的病例對照研究還存在一些不足，流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)發(fā)病年齡，環(huán)境因素與代謝因素，服用避孕藥物等因素是影響銀屑病發(fā)病的相關(guān)因素，本研究的研究對象在發(fā)病年齡，環(huán)境因素與代謝因素，服用避孕藥物等方面資料不全，而且本研究的樣本量較小，需進一步擴大樣本量，完善相關(guān)背景資料以進一步深入探討MIF基因的遺傳多態(tài)性在銀屑病發(fā)生發(fā)展過程中可能的生物學(xué)機制。

1 馬天，姜文成，陳潔，等.銀屑病發(fā)病機制研究進展.中華臨床醫(yī)師雜志(電子版)，2013，21:9656-9658.

2 Liu M，Hu X，Wang Y，et al.Association of IL-23 and its receptor gene single-nucleotide polymorphisms with multiple sclerosis in Chinese southern population.Int J Neurosci，2014，19:145-151.

3 Hayashi M，Hirota T，Saeki H，et al.Genetic polymorphism in the TRAF3IP2 gene is associated with psoriasis vulgaris in a Japanese population.J Dermatol Sci，2014，73:264-265.

4 Turan H，Yaykasli KO，Soguktas H，et al.Omentin serum levels and omentin gene Val109Asp polymorphism in patients with psoriasis.Int J Dermatol，2013，10:134-142.

5 張學(xué)軍主編.皮膚性病學(xué).第7版.北京:人民衛(wèi)生出版社，2008.141-144.

6 Dambacher J，Staudinger T，Seiderer J，et al.Macrophage migration inhibitory factor(MIF)-173G/C promoter polymorphism influences upper gastrointestinal tract involvement and disease activity in patients with Crohn＇s disease.Inflamm Bowel Dis，2007，13:71-82.

7 Donn RP，Plant D，Jury F，et al.Macrophage migration inhibitory factor gene polymorphism is associated withpsoriasis.J Invest Dermatol，2004，123:484-487.

8 Denkinger CM，Metz C，F(xiàn)ingerle-Rowson G，et al.Macrophage migration inhibitory factor and its role in autoimmune diseases.Arch Immunol Ther Exp(Warsz)，2004，52:389-400.

9 Calandra T，Roger T.Macrophage migration inhibitory factor:a regulator of innate immunity.Nat Rev Immunol，2003，3:791-800.

10 Nishihira J.Molecular function of macrophage migration inhibitory factor and a novel therapy for inflammatory bowel disease.Ann N Y Acad Sci，2012，1271:53-57.

11 Shimizu T，Ohkawara A，Nishihira J，et al.Identification of macrophage migration inhibitory factor(MIF)in human skin and its immmunohistochemical localization.FEBS Lett，1996，381:199-202.

12 Sánchez E，Gómez LM，Lopez-Nevot MA，et al.Evidence of association of macrophage migration inhibitory factor gene polymorphisms with systemic lupus erythematosus.Genes Immun，2006，7:433-436.

13 Nú?ez C，Rueda B，Martínez A，et al.Involvement of macrophage migration inhibitory factor gene in celiac disease susceptibility.Genes Immun，2007，8:168-170.

Correlation between serum levels of MIF as well as 173G/C polymorphism and pathogenesis of psoriasis in Tujiapopulationof Enshi District

ZHOU Faqiong*，LEI Shuying*，WU Mingzhu.*Dermatology of Dermatology Central Hospital of Enshi Tujia and Miao Autonomous Prefecture，Hubei，Enshi 445000，China

ObjectiveTo investigate the levels of macrophage migration inhibitory factor(MIF)in serum of patients with psoriasis in Tujia population of Enshi District，and to explore the correlation between the pathogenesis of psoriasis and 173G/C polymorphism.M ethodsA total of 245 patients with psoriasis(case group)who were admitted to our hospital from September 2009 to September 2010 and 260 healthy volunteers of Tujia population in the same period were enrolled in the study.The serum levels of MIF were detected by ELISA，and MIF-173 G/C was genetyped by SNaPshot SNP technique.Finally，MIF-173 G/C genotype and serum levels of MIF were analyzed and compared between the two groups.ResultsThe serum levels of MIF in case group were significantly higher than those in control group［(804.21±69.78)pg/m l vs(369.46 ±60.46)pg/m l，P＜0.01］.There were significant differences in the 173G/C genotype of MIF gene and allele frequency between two groups(P＜0.05).The CC genotype and C allele frequency in case group were significantly higher than those in control group(P＜0.01).As compared with GG genotype，the relative risk exposed to CG，CC genetype was 1.46(95%CI: 1.01～2.10，P＜0.05)，5.19(95%CI:1.69～15.89，P＜0.01)，respectively.The clinical characteristics were compared in the patients with three different kinds of genotype(GG，GC，CC)of MIF173G/C polymorphism，which showed that there was a significant difference in family history，psoriasis vulgaris(P＜0.05).ConclusionMIF-173 G/C polymorphism may be one of genetic susceptibility factors in pathogenesis of psoriasis in Tujia population of Enshi District，and its potential mechanism is that the polymorphism may affect the expression levels of MIF.

macrophage migration inhibition factor;MIF-173G/C polymorphism;psoriasis

R 758.63

A

1002－7386(2015)03－0331－03

2014－09－18)

10.3969/j.issn.1002－7386.2015.03.002

445000湖北省恩施土家族苗族自治州中心醫(yī)院皮膚科(周發(fā)瓊、雷淑英);武漢大學(xué)人民醫(yī)院檢驗科(吳明珠)