紫杉醇脂質(zhì)體對(duì)乳腺癌細(xì)胞SK-BR-3的放療增敏作用及其機(jī)制

姚 烜，趙 玲，李索妮，史婷婷，姚 煜

（1.西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部附屬西安市中心醫(yī)院普外科，陜西西安 710003；

2.鄭州市中心醫(yī)院腫瘤科，河南鄭州 450000；3.陜西省腫瘤醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，陜西西安 710061；4.西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部第一附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，陜西西安 710061）

紫杉醇脂質(zhì)體對(duì)乳腺癌細(xì)胞SK-BR-3的放療增敏作用及其機(jī)制

姚 烜1，趙 玲2，李索妮3，史婷婷4，姚 煜4

（1.西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部附屬西安市中心醫(yī)院普外科，陜西西安 710003；

2.鄭州市中心醫(yī)院腫瘤科，河南鄭州 450000；3.陜西省腫瘤醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，陜西西安 710061；4.西安交通大學(xué)醫(yī)學(xué)部第一附屬醫(yī)院腫瘤內(nèi)科，陜西西安 710061）

目的 探索紫杉醇脂質(zhì)體（力撲素）對(duì)乳腺癌細(xì)胞株SK-BR-3是否具有放療增敏作用及其放療增敏機(jī)制。方法 利用MTT法檢測(cè)放療組、單藥紫杉醇脂質(zhì)體（以下簡(jiǎn)稱(chēng)單藥組）及紫杉醇脂質(zhì)體聯(lián)合放療（以下簡(jiǎn)稱(chēng)聯(lián)合組）在不同時(shí)間對(duì)乳腺癌細(xì)胞SK-BR-3的生長(zhǎng)抑制作用。利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)放療組、單藥組及聯(lián)合組對(duì)細(xì)胞周期及凋亡的影響。利用Western blot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3、Bcl-2及Bax在不同處理組中的表達(dá)，探索紫杉醇脂質(zhì)體放療增敏作用的機(jī)制。結(jié)果 MTT結(jié)果顯示放療組、單藥組及聯(lián)合組均具有細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用，與細(xì)胞對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而且聯(lián)合組較單藥及放療組具有更顯著的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示放療組、單藥組及聯(lián)合組凋亡細(xì)胞均明顯增加，與對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），并且聯(lián)合組在細(xì)胞周期中均出現(xiàn)了明顯的凋亡峰；Western blot結(jié)果顯示，促凋亡蛋白Caspase-3和Bax的表達(dá)在放療組、單藥組和聯(lián)合組中均升高，與對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），并且聯(lián)合組升高較放療組及單藥組更為顯著，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)在放療組、單藥組及聯(lián)合組均減低，與對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而聯(lián)合組較放療組及單藥組降低更明顯，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）。結(jié)論 紫杉醇脂質(zhì)體具有明顯的放療增敏作用，并且可能通過(guò)調(diào)控凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)引起細(xì)胞凋亡來(lái)發(fā)揮其放療增敏作用。

乳腺癌；放療增敏作用；紫杉醇脂質(zhì)體；凋亡；細(xì)胞周期；Caspase；Bcl-2；Bax

乳腺癌是女性最常見(jiàn)、發(fā)病率最高的惡性腫瘤之一。據(jù)統(tǒng)計(jì)，2012年全球乳腺癌新增病例170萬(wàn)例，死亡約52.1萬(wàn)例［1］。我國(guó)乳腺癌的發(fā)病率也在不斷上升，新發(fā)病例每年遞增3%～4%，與不同地區(qū)的經(jīng)濟(jì)發(fā)展程度相關(guān)，在許多發(fā)達(dá)城市，乳腺癌已躍居成為女性發(fā)病率第一位的惡性腫瘤［2］。目前，化療聯(lián)合放療在乳腺癌的綜合治療中占據(jù)重要地位，但有些腫瘤對(duì)放療的敏感性較差，尋找有效且低毒的放療增敏藥物顯得尤為重要。

紫杉醇-脂質(zhì)體是用磷脂雙分子層將紫杉醇包裹起來(lái)，從而形成一個(gè)閉合的囊泡，將磷脂酰膽堿、膽固醇、紫杉醇按照一定的比列制成，有研究證明，其比原始紫杉醇具有更強(qiáng)的細(xì)胞毒性和較高的穩(wěn)定性，從而提高抗腫瘤的療效、減少不良反應(yīng)的發(fā)生［3］。目前是臨床乳腺癌患者治療用藥中的新寵。但眾所周知，原始紫杉醇具有一定的放療增敏作用，所以本課題致力于研究新藥紫杉醇脂質(zhì)體在增加藥物有效性，減小藥物不良反應(yīng)的同時(shí)能否同樣發(fā)揮放療增敏作用，并初步探索其放療增敏作用的機(jī)制。

1 材料與方法

1.1 實(shí)驗(yàn)材料人乳腺癌細(xì)胞株SK-BR-3（以下簡(jiǎn)稱(chēng)SK-BR-3細(xì)胞）購(gòu)自中科院上海細(xì)胞庫(kù)。RPMI-1640培養(yǎng)基及青霉素鏈霉素雙抗購(gòu)自美國(guó)HYCLONE公司，胎牛血清購(gòu)自上海四季青公司，胰蛋白酶購(gòu)自GIBCO公司，凋亡試劑盒購(gòu)自珠海健康元生物醫(yī)藥有限公司，RNA酶及PI染液購(gòu)自O(shè)mega公司，Caspase-3、Bcl-2、Bax兔抗人單克隆抗體購(gòu)自Proteintech Group，Inc USA公司，β-actin兔抗人抗體購(gòu)自SANTA CRUZ BIOTECHNOLOGY，ING公司，HRP標(biāo)記的羊抗兔IgG購(gòu)自Signalway Antibody（SAB）Co.Ltd。紫杉醇脂質(zhì)體（力撲素）由南京綠葉思科公司提供。

1.2 細(xì)胞培養(yǎng)及收集SK-BR-3細(xì)胞使用100 mL/L胎牛血清及10 g/L青鏈霉素雙抗的RPMI-1640培養(yǎng)基，放置于含有50 m L/L CO2的37℃的恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。傳代時(shí)用胰蛋白酶進(jìn)行消化。

1.3 藥物濃度及放射線(xiàn)計(jì)量設(shè)定查閱相關(guān)文獻(xiàn)并進(jìn)行前期預(yù)實(shí)驗(yàn)后將實(shí)驗(yàn)藥物紫杉醇酯質(zhì)體（力撲素）濃度設(shè)定為5、10、15、20 mmol/L，并將放射線(xiàn)計(jì)量設(shè)定為4兆伏2 gy。

1.4 MTT法檢測(cè)不同處理組細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，以4×103個(gè)/孔接種于96孔板中，將培養(yǎng)板中細(xì)胞分為對(duì)照組、放療組、單藥組（力撲素組）以及聯(lián)合組（放療+力撲素組）。接種細(xì)胞培養(yǎng)18 h后換液，對(duì)單藥組及聯(lián)合組細(xì)胞按設(shè)置濃度加藥，加藥完成后將放療組及聯(lián)合組細(xì)胞繼續(xù)于直線(xiàn)加速器下接受4 MV 2 gy X線(xiàn)照射。處理完畢的細(xì)胞置于恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h。培養(yǎng)完畢后于每孔中加入5 mg/mL的MTT液20μL，放置于培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)4 h，小心吸出孔內(nèi)上清液，于每孔中加入DMSO 100μL，振蕩5 min，使還原物質(zhì)全部溶解，置于酶標(biāo)儀上于560 nm波長(zhǎng)下檢測(cè)光吸收值，實(shí)驗(yàn)重復(fù)3次。按照以下公式計(jì)算細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率：細(xì)胞生長(zhǎng)抑制率=（1-實(shí)驗(yàn)組A值/對(duì)照組A值）×100%。

1.5 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期細(xì)胞，消化后按1×105個(gè)/孔接種于6孔板中，分組同MTT。18 h后換液，按照MTT結(jié)果所得IC50濃度的1/3于單藥組及聯(lián)合組孔中加藥，加藥完畢后將放療組及聯(lián)合組細(xì)胞置于直線(xiàn)加速器下接受4 MV 2 gy X線(xiàn)照射。照射完畢后繼續(xù)培養(yǎng)48 h。分別消化并收集各組細(xì)胞于事先標(biāo)記好的離心管中，置于離心機(jī)中1 500 r/min離心5 min，輕輕棄去上清；用3 m L PBS輕輕吹打洗滌細(xì)胞2次，置于超低溫離心機(jī)中1 000 r/min離心10 min，棄去PBS。用移液器吸取400μL Binding Buffer重懸細(xì)胞。重懸后的離心管中加入5μL Annexin V，室溫避光孵育5 min，之后加入10μL PI染液，室溫避光孵育15 min。1 h內(nèi)流式細(xì)胞儀檢測(cè)分析。

1.6 流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞周期細(xì)胞接種、加藥、加放射線(xiàn)照射及收集細(xì)胞過(guò)程同凋亡檢測(cè)步驟。將收集好的細(xì)胞用-20℃預(yù)冷的700 mL/L的乙醇固定，4℃過(guò)夜。過(guò)夜后置于離心機(jī)中離心，輕輕棄去酒精，繼續(xù)用3 mL PBS洗滌2次，1 500 r/min離心5 min，棄去PBS；首先加入RNA酶150μL，再加入PI染液150μL，4℃下避光染色30 min；1 h內(nèi)上機(jī)檢測(cè)。

1.7 Western blot檢測(cè)凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3、Bcl-2及Bax的表達(dá)細(xì)胞接種、加藥、加放射線(xiàn)照射步驟同前。培養(yǎng)48 h后的細(xì)胞用RIPA蛋白裂解液提取蛋白并進(jìn)行蛋白定量。定量完成后計(jì)算上樣量。配制SDS-PAGE濃縮膠及分離膠，按照常規(guī)步驟電泳、轉(zhuǎn)膜、孵育一抗、孵育二抗，最終于Odyssey紅外成像系統(tǒng)（Infrared Imaging System，LiCor Biosciences）中檢測(cè)PVDE膜上的熒光強(qiáng)度并進(jìn)行分析。

1.8 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法采用SPSS18.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析。計(jì)量資料用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s）表示。兩組間比較采用t檢驗(yàn)，多組間均數(shù)的比較采用單因素方差分析（ANOVA），兩兩比較采用LSD-t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

2.1 不同處理組對(duì)SK-BR-3細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用MTT結(jié)果顯示，單藥組及聯(lián)合組均表現(xiàn)出細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用，與細(xì)胞對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而聯(lián)合組表現(xiàn)出更顯著的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用，與單藥組相比差異均具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，圖1）。

圖2 不同處理組細(xì)胞凋亡的比較Eig.2 Comparison of apoptosis rate in different groups

圖1 不同處理組細(xì)胞生長(zhǎng)的抑制率曲線(xiàn)圖Eig.1 Rate of cell growth inhibition in different groups

2.2 不同處理組對(duì)SK-BR-3細(xì)胞凋亡的影響放療組及單藥組細(xì)胞均表現(xiàn)出不同程度的凋亡，與細(xì)胞對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），但兩組之間比較差異不具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）；而聯(lián)合組細(xì)胞表現(xiàn)出比放療組及單藥組更為顯著的細(xì)胞凋亡現(xiàn)象，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，圖2、圖3）。

2.3 不同處理組對(duì)SK-BR-3細(xì)胞周期的影響流式細(xì)胞儀檢測(cè)對(duì)照組及單藥組細(xì)胞均未出現(xiàn)明顯亞G1峰，而放療組及聯(lián)合組細(xì)胞均出現(xiàn)亞G1峰，而聯(lián)合組更為顯著，兩者相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，圖4、圖5）。

圖3 不同處理組細(xì)胞凋亡的統(tǒng)計(jì)結(jié)果Eig.3 Statistical results of apoptosis rate in different groups

2.4 不同處理組凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3、Bcl-2及Bax在SK-BR-3細(xì)胞中表達(dá)的變化與對(duì)照組相比，Caspase-3及Bax蛋白的表達(dá)在放療組、單藥組及聯(lián)合組中均出現(xiàn)了不同程度的升高，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），而其中聯(lián)合組細(xì)胞Caspase-3及Bax的表達(dá)升高尤為明顯，與放療組及單藥組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；而B(niǎo)cl-2蛋白的表達(dá)在不同處理組中表現(xiàn)出不同程度的下調(diào)，與對(duì)照組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05），并且以聯(lián)合組下調(diào)更為顯著，與放療組及單藥組相比差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05，圖6、圖7）。

圖4 不同處理組細(xì)胞周期的比較Eig.4 Results of cell cycle in different groups

圖5 不同處理組亞-G1峰的比較Eig.5 Statistical results of sub-G1 peak in different groups

圖6 Western blot檢測(cè)不同處理組凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)結(jié)果Eig.6 Expression of apoptosis-related proteins in different groups detected by Western blot

3 討 論

圖7 不同處理組凋亡相關(guān)蛋白表達(dá)的比較Eig.7 Comparison of the expressions of apoptosis-related proteins in different groups

放射治療是乳腺癌患者重要的治療手段之一，對(duì)于有高危因素的患者放射治療顯得尤為重要。但是放療的長(zhǎng)期應(yīng)用也導(dǎo)致放射線(xiàn)耐受腫瘤細(xì)胞的出現(xiàn)，因此尋找有效且低毒的放療增敏藥物成為臨床研究的熱點(diǎn)。隨著腫瘤分子生物學(xué)研究的進(jìn)展，人們對(duì)放療敏感性的認(rèn)識(shí)和研究不斷的深入。已經(jīng)從最初的組織、細(xì)胞學(xué)水平發(fā)展到目前的分子生物學(xué)和基因水平，放射增敏劑已經(jīng)從傳統(tǒng)的乏氧細(xì)胞增敏劑發(fā)展成包括所有能夠影響放射敏感性的化學(xué)和生物學(xué)手段，其作用機(jī)制研究領(lǐng)域也已經(jīng)擴(kuò)展到細(xì)胞微環(huán)境，血管生成因子，放射誘導(dǎo)的信號(hào)傳導(dǎo)過(guò)程，DNA的損傷，細(xì)胞分化，細(xì)胞周期調(diào)控與細(xì)胞凋亡等［4］。紫杉醇為雙萜紫杉烷類(lèi)抗癌藥物，在治療卵巢癌、乳腺癌和非小細(xì)胞肺癌等多種惡性腫瘤具有顯著療效。紫杉醇雖然具有確切的抗腫瘤活性，但是卻難溶于水，必須使用溶媒才能使之很好的溶解。目前臨床上通常使用聚氧乙烯蓖麻油與無(wú)水乙醇體積按1∶1配比的混合溶媒，但聚氧乙烯蓖麻油在體內(nèi)降解時(shí)會(huì)引起組胺釋放而發(fā)生嚴(yán)重的過(guò)敏反應(yīng)。臨床用藥前必須采取一系列的抗過(guò)敏措施，因此患者被動(dòng)接受了大劑量激素所帶來(lái)的不良反應(yīng)。聚氧乙烯蓖麻油還可在血液中形成膠團(tuán)包裹PTX分子，影響藥物分子向組織間擴(kuò)散，進(jìn)而影響抗腫瘤效應(yīng)［5］。

脂質(zhì)體是20世紀(jì)70年代出現(xiàn)的一種新型藥物載體，具有類(lèi)細(xì)胞結(jié)構(gòu)。其作為抗腫瘤藥物的載體具有多種優(yōu)勢(shì)，可減輕被包裹藥物的毒性，增加藥物被腫瘤細(xì)胞的攝取率，改變藥物在組織中的分布，有效延長(zhǎng)藥物在體內(nèi)的滯留時(shí)間，從而提高療效、減少不良反應(yīng)［6-8］。脂質(zhì)體紫杉醇是用卵磷脂等材料包裹的紫杉醇。具有更好的組織親和性和緩釋作用。

過(guò)去NGUYEN等［9］用原始紫杉醇對(duì)一種富含谷胱甘肽且耐放療的淋巴瘤細(xì)胞株LY-ar進(jìn)行放療增敏研究時(shí)發(fā)現(xiàn)，其增敏作用可能是由于紫杉醇能大幅度降低LY-ar細(xì)胞內(nèi)谷胱甘肽含量引起的。那么脂質(zhì)體紫杉醇是否能像原始紫杉醇一樣發(fā)揮放療增敏作用以及其放療增敏機(jī)制引起本課題組的關(guān)注。本實(shí)驗(yàn)應(yīng)用MTT法檢測(cè)放療組，單藥組以及聯(lián)合組對(duì)細(xì)胞的生長(zhǎng)抑制作用結(jié)果顯示，聯(lián)合組較放療組及單藥組表現(xiàn)出了更明顯的細(xì)胞生長(zhǎng)抑制作用，并且其作用明顯優(yōu)于兩種單純方案作用的疊加，提示紫杉醇脂質(zhì)體聯(lián)合放療能夠發(fā)揮放療增敏作用。

細(xì)胞凋亡是細(xì)胞的程序性死亡［10］，以往研究顯示，細(xì)胞凋亡程度與細(xì)胞的放射線(xiàn)敏感性有著一定的相關(guān)性，并且誘導(dǎo)凋亡的程度能夠作為衡量放射線(xiàn)敏感性的一項(xiàng)指標(biāo)［11］。本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)不同處理組細(xì)胞凋亡結(jié)果顯示，聯(lián)合組細(xì)胞凋亡數(shù)量較放療組及單藥組細(xì)胞顯著增多，同樣提示紫杉醇脂質(zhì)體具有放療增敏作用。而在細(xì)胞周期中，在細(xì)胞增殖過(guò)程中，處于不同時(shí)相的細(xì)胞其DNA含量分布在2～4 n之間，但凋亡的細(xì)胞由于DNA裂解成很多碎片，經(jīng)過(guò)染色后，用流式細(xì)胞儀檢測(cè)其DNA含量，會(huì)出現(xiàn)一個(gè)DNA＜2 n的位于G1期之前的分布區(qū)，即“亞G1峰”（Sub-G1）。Sub-G1法可應(yīng)用于不同細(xì)胞周期時(shí)相的細(xì)胞凋亡定量分析［12］。在本實(shí)驗(yàn)中，對(duì)照組細(xì)胞及單藥組細(xì)胞均未出現(xiàn)明顯的亞G1峰，而放療組及聯(lián)合組細(xì)胞均出現(xiàn)亞G1峰，但聯(lián)合組處于亞G1峰中的細(xì)胞數(shù)量顯著多于放療組。由此，細(xì)胞周期亞G1峰的出現(xiàn)同樣提示我們，紫杉醇脂質(zhì)體具有明顯的放療增敏作用。

上述的實(shí)驗(yàn)結(jié)果證明了紫杉醇脂質(zhì)體具有放療增敏作用，但是其放療增敏機(jī)制尚不得而知。但上述細(xì)胞周期及凋亡結(jié)果均指向，紫杉醇脂質(zhì)體的放療增敏作用可能與細(xì)胞凋亡有關(guān)。由此，本實(shí)驗(yàn)檢測(cè)細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白Caspase-3、Bax及Bcl-2的表達(dá)。Caspase即含半胱氨酸的天冬氨酸酶，是一種半胱氨酸蛋白酶，其起源于線(xiàn)蟲(chóng)（Celegans）細(xì)胞程序性死亡的研究［13］。Caspase-3基因是由EERNANDERS-ALNEMRI等［14］在1994年發(fā)現(xiàn)的，并且是整個(gè)細(xì)胞凋亡級(jí)聯(lián)反應(yīng)中的必經(jīng)之路，是一個(gè)非常關(guān)鍵的調(diào)控點(diǎn)。而B(niǎo)ax和Bcl-2同屬于Bcl-2家族，Bcl-2即B細(xì)胞淋巴瘤/白血病-2基因，最初是由TSUJIMOTO［15］在1985年研究濾泡性淋巴瘤時(shí)發(fā)現(xiàn)的，但Bcl-2屬于抗凋亡蛋白，而B(niǎo)ax屬于促凋亡蛋白。本課題利用Western blot法檢測(cè)3種凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)結(jié)果顯示，促凋亡蛋白Caspase-3及Bax的聯(lián)合組細(xì)胞中表達(dá)顯著高于對(duì)照組、放療組及單藥組，而抗凋亡蛋白Bcl-2表現(xiàn)出于促凋亡蛋白截然相反的結(jié)果。上述結(jié)果提示，紫杉醇脂質(zhì)體可能是通過(guò)調(diào)控凋亡蛋白的表達(dá)來(lái)發(fā)揮其放療增敏作用。

綜上所述，本實(shí)驗(yàn)初步探索了紫杉醇脂質(zhì)體的放療增敏作用，并初步闡明了其放療增敏作用的機(jī)制，為臨床用藥提供一定的理論基礎(chǔ)的同時(shí)，也為尋找新的放療增敏劑提供了實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。后續(xù)我們將進(jìn)一步進(jìn)行在體實(shí)驗(yàn)，對(duì)這一發(fā)現(xiàn)進(jìn)一步論證。

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（編輯 韓維棟）

Effect of paclitaxel liposome on the radiosensitization in breast cancer cell line SK-BR-3 and related mechanisms

YAO Xuan1，ZHAO Ling2，LI Suo-ni3，SHI Ting-ting4，YAO Yu4
（1.Department of General Surgery，Central Hospital of Xi'an，Xi'an 710003；2.Department of Oncology，Central Hospital of Zhengzhou，Zhengzhou 450000；3.Department of Oncology，Tumor Hospital of Shaanxi，Xi'an 710061；4.Department of Oncology，the Eirst Affiliated Hospital of Xi'an Jiaotong University Health Science Center，Xi'an 710061，China）

Objective To explore the effect of paclitaxel liposome on the radiosensitization in breast cancer cell line SK-BR-3 and its related mechanisms.Methods MTT assay was used to test the inhibitory effect of paclitaxel liposome on breast cancer cell line SK-BR-3.Flow cytometry was used to detect the cell cycle and apoptosis.Western blot was used to detect apoptosis-related proteins Bcl-2，Bax and Casepase-3.Results Paclitaxel liposome combined with radiotherapy could inhibit cell growth more significantly than single paclitaxel liposome or single radiotherapy（P＜0.05）.The number of apoptotic cells increased more significantly in the combination group than in radiotherapy group or single paclitaxel liposome group（P＜0.05）.The combination grouphad an obvious apoptosis peak during the cell cycles.Western blot results showed that the expressions of Caspase-3 and Bax were significantly upregulated in radiotherapy group，single paclitaxel liposome group and the combination group compared with the control group（P＜0.05），and that the effect was more obvious in the combination group（P＜0.05）.The expression of the anti-apoptosis protein Bcl-2 was downregulated in radiotherapy group，single paclitaxel liposome group and the combination group compared with the control group（P＜0.05），and the effect was more obvious in the combination group（P＜0.05）.Conclusion Through regulating the expression of apoptosis-related proteins，paclitaxel liposome has an obvious radiosensitization effect.

breast cancer；radiosensitization；paclitaxel liposome；apotosis；cell cycle；Caspase；Bcl-2；Bax

R73-36

A

10.7652/jdyxb201505011

2015-01-22

2015-04-01

陜西省科技攻關(guān)資助項(xiàng)目（No.2013K12-03-12）Supported by Science and Technology Research Fund of Shaanxi Province（No.2013K12-03-12）

姚煜.E-mail：13572101611@163.com

優(yōu)先出版：http：//www.cnki.net/kcms/detail/61.1399.R.20150720.1740.014.html（2015-07-20）