血管內(nèi)皮功能損傷與氧化應(yīng)激在急性冠脈綜合征合并糖尿病患者血漿中相關(guān)性研究

李雅 趙學(xué)偉 陳彥霞 高淑賢 李雪松

糖尿病為冠心病的等位癥，高糖會造成體內(nèi)發(fā)生血脂代謝異常，容易發(fā)生高脂血癥、高膽固醇血癥等疾病，糖尿病患者本身都存在炎性反應(yīng)，炎性因子導(dǎo)致血管壁損傷，引起細(xì)胞破壞、膽固醇沉積，導(dǎo)致動脈粥樣硬化[1]。目前大量研究表明，氧化應(yīng)激參與了動脈硬化的發(fā)生與發(fā)展過程。氧化應(yīng)激是指機(jī)體組織或細(xì)胞內(nèi)氧自由基生成增加和/或清除能力降低，導(dǎo)致氧自由基及其相關(guān)代謝產(chǎn)物的過度積聚而引起氧化損傷的過程。氧化應(yīng)激一方面直接對血管壁細(xì)胞造成損傷，另一方面通過影響血管壁細(xì)胞轉(zhuǎn)錄因子的水平，調(diào)節(jié)基因的表達(dá)，參與動脈硬化的發(fā)生、發(fā)展[2]。由此可見，血管內(nèi)皮功能損傷與氧化應(yīng)激有著一定的關(guān)系。冠心病或糖尿病患者均存在血管內(nèi)皮功能損傷，本文通過研究血管內(nèi)皮、氧化應(yīng)激的相關(guān)指標(biāo)，進(jìn)一步探討血管內(nèi)皮功能損傷與氧化應(yīng)激在急性冠脈綜合征合并糖尿病患者血漿中相關(guān)性，現(xiàn)報(bào)道如下。

1 資料及方法

1.1 一般資料 選擇2012年8月-2014年12月于本院心內(nèi)科住院并符合急性冠脈綜合征合并糖尿病的患者200例作為研究對象。將其分為不穩(wěn)定型心絞痛組（UAP組）118例，急性心肌梗死組（AMI組）82例。另外選取正常健康體檢患者120例作為對照組。冠心病診斷依據(jù)2007年ACC/AHA制定的診斷標(biāo)準(zhǔn)。排除標(biāo)準(zhǔn)：有嚴(yán)重瓣膜性心臟病、嚴(yán)重肝腎功能不全、結(jié)締組織病、甲狀腺功能亢進(jìn)或減退癥、惡性腫瘤、血液系統(tǒng)疾病、慢性阻塞性肺疾病及周圍血栓病史。三組年齡、性別、體重指數(shù)、吸煙史比較差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；三組的高血壓、膽固醇、甘油三酯和高密度脂蛋白比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表1。

表1 三組一般資料比較

1.2 方法

1.2.1 臨床一般資料的檢測 所有受試者均詳細(xì)詢問吸煙史、高血壓及血脂異常病史。測身高、體重、血壓，并計(jì)算體質(zhì)指數(shù)（BMI=體重/身高2），次日清晨空腹抽取靜脈血測定膽固醇、甘油三酯和高密度脂蛋白。

1.2.2 血管功能相關(guān)指標(biāo)檢測 采用放射免疫法測定內(nèi)皮素（ET-1），比色法測定超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽過氧化物酶（GSH-Px）以及硝酸還原法測定一氧化氮（NO）（由南京建成生物工程有限公司提供），采用ELISA測定血管內(nèi)皮生長因子（VEGF）（由美國Biomerica公司提供），均嚴(yán)格按照試劑盒說明操作。

1.2.3 氧化應(yīng)激相關(guān)指標(biāo)檢測 采用比色法測定血漿中丙二醛含量（MDA），應(yīng)用酶標(biāo)儀在532 mm測定吸光度值，通過描繪標(biāo)準(zhǔn)曲線，求出標(biāo)本中MAD濃度。MAD試劑盒由上海天齊生物科技公司提供。采用電子自旋共振法測定活性氧自由基信號強(qiáng)度。均嚴(yán)格按照試劑盒說明操作。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 15.0統(tǒng)計(jì)軟件包進(jìn)行數(shù)據(jù)處理；計(jì)量資料以（x-±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用 字2檢驗(yàn)，以P<0.05表示差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 各組血清中ET-1、SOD、GSH-Px及NO水平比較 AMI組及UAP組NO、SOD、GSH-Px水平均低于對照組，而ET-1水平高于對照組；AMI組ET-1水平均高于UAP組，GSH-Px及SOD水平低于UAP組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表2。

表2 各組血清中ET-1、SOD、GSH-Px及NO水平比較（x-±s）

2.2 各組血清中MDA、VEGF、ROS水平比較 AMI組及UAP組VEGF、MDA、ROS水平均高于對照組，AMI組MDA、VEGF、ROS水平均高于UAP組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05），見表3。

表3 各組血清中MDA、VEGF、ROS水平比較（x-±s）

3 討論

動脈粥樣硬化是一種慢性炎癥反應(yīng)，糖尿病、高血壓、高血脂、肥胖、高同型半胱氨酸血癥及吸煙均為動脈硬化的危險(xiǎn)因素。研究表明，心血管功能障礙的發(fā)生和發(fā)展中，氧化應(yīng)激起主要作用。氧化應(yīng)激狀態(tài)時產(chǎn)生的活性產(chǎn)物（自由基、丙二醛等）直接或間接引起細(xì)胞壞死、細(xì)胞功能缺損[3-4]。MDA是過氧化脂質(zhì)降解的產(chǎn)物，可間接反映氧自由基對機(jī)體細(xì)胞的損傷程度[5-6]。NO是一種內(nèi)皮源性小分子物質(zhì)，在體內(nèi)具有血管活性和細(xì)胞毒性的雙重作用，通過激活鳥苷酸環(huán)化酶，使細(xì)胞內(nèi)cGMP水平升高，引起血管平滑肌松弛、血管擴(kuò)張，在生理狀態(tài)下與氧自由基處于平衡狀態(tài)而無毒性作用，但由于各種原因平衡打破時，細(xì)胞內(nèi)合成過多的NO與氧自由基生成羥自由基和過氧硝基陰離子，更具細(xì)胞毒性，后者可引起細(xì)胞損傷[7-8]。動物實(shí)驗(yàn)表明，動脈粥樣硬化時，血管ROS的合成增多主要來源于血管細(xì)胞，而不是活化的中性粒細(xì)胞或巨噬細(xì)胞，而血管NADH/NADPH氧化酶是血管壁產(chǎn)生ROS的主要來源。氧化應(yīng)激的增加會引起NADPH消耗，造成還原型GSH生成減少、抗氧化能力下降、自由基清除減少，導(dǎo)致內(nèi)皮細(xì)胞損傷。NADPH是GSH還原酶的輔助因子，而GSH能清除ROS的產(chǎn)生，所以這也能誘導(dǎo)或加劇細(xì)胞發(fā)生氧化應(yīng)激[9-10]。

目前認(rèn)為氧化應(yīng)激的異常、內(nèi)皮功能的障礙是動脈粥樣硬化發(fā)生與發(fā)展的重要原因。機(jī)體組織或細(xì)胞內(nèi)氧化能力增加和/或抗氧化能力降低產(chǎn)生的過量活性氧簇（ROS）可引發(fā)脂質(zhì)過氧化作用，形成脂質(zhì)過氧化物一丙二醛（MDA），并通過鏈?zhǔn)椒磻?yīng)放大ROS的損傷作用，最終導(dǎo)致內(nèi)皮血管損傷及組織臟器的損傷[11]。其中MDA作為脂質(zhì)過氧化物的最終產(chǎn)物，可直接反映機(jī)體的脂質(zhì)過氧化程度，而超氧化物歧化酶（SOD）作為最重要的抗氧化酶之一，能清除氧自由基保護(hù)細(xì)胞免受損傷[12]。目前該兩物質(zhì)的水平是臨床上反映人體內(nèi)氧化應(yīng)激程度最經(jīng)典的指標(biāo)。內(nèi)皮功能障礙指內(nèi)皮細(xì)胞在病理因素（如高血脂、氧自由基、吸煙、高血流切應(yīng)力等）刺激下發(fā)生的內(nèi)皮功能異常。其中內(nèi)皮細(xì)胞合成釋放的NO是維持和反應(yīng)血管正常功能最主要的介質(zhì)。NO在體內(nèi)發(fā)揮著多種作用：強(qiáng)烈的舒血管作用，抑制血小板黏附和聚集，抑制平滑肌細(xì)胞增殖，清除超氧化物，調(diào)節(jié)免疫反應(yīng)，抑制內(nèi)皮-單核細(xì)胞黏附等[13-14]。

本試驗(yàn)測定血管內(nèi)皮功能及氧化應(yīng)激各種指標(biāo)。SOD是人體的一種抗氧化酶，可使O2-轉(zhuǎn)化為更加穩(wěn)定的 ROS-H2O2，H2O2在CAT或 GPX還原為 H2O，從而達(dá)到清除活性氧ROS的目的，因此測定血清SOD水平，可以一定程度上反應(yīng)機(jī)體的氧化應(yīng)激狀態(tài)[15-16]。AMI組及 UAP組 NO、SOD、GSH-Px水平均低于對照組，而ET-1水平高于對照組，AMI組及UAP組VEGF、MDA、ROS水平均高于對照組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。提示這組患者體內(nèi)不僅存在氧化應(yīng)激，抗氧化能力減弱，NO水平下降，還同時存在內(nèi)皮功能的異常。AMI組ET-1及GSH-Px水平均高于UAP組，SOD水平低于UAP組，AMI組MDA、VEGF、ROS水平均高于UAP組，比較差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；表明急性心肌梗死患者體內(nèi)氧化應(yīng)激程度更重，血管內(nèi)皮功能損傷情況也更嚴(yán)重。

綜上所述，血管內(nèi)皮功能損傷與氧化應(yīng)激在急性冠脈綜合征合并糖尿病患者血漿中存在一定的相關(guān)性，且急性心肌梗死患者較不穩(wěn)定型心絞痛患者程度更為嚴(yán)重。

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