孕婦生殖道念珠菌感染與所生新生兒感染性疾病相關(guān)性調(diào)查研究

覃立剛 吳偉林 趙潔 駱華珍 葉娜

孕婦生殖道的感染危害程度要遠(yuǎn)高于非孕婦的患者，生殖道的常見(jiàn)的病菌感染有念珠菌感染，念珠菌感染會(huì)導(dǎo)致孕婦羊膜腔內(nèi)出現(xiàn)感染、胎膜早破、早產(chǎn)低出生兒、甚至流產(chǎn)和死胎不良妊娠結(jié)局，也可經(jīng)垂直傳播使胎兒宮內(nèi)感染、胎兒先天性病及新生兒感染等發(fā)生，而且新生兒感染性疾病發(fā)病率仍較高、是新生兒重要死因[1]；但關(guān)于孕婦生殖道念珠菌感染與新生兒感染性疾病的相關(guān)性研究很少。目前國(guó)內(nèi)及廣東省內(nèi)關(guān)于孕婦生殖道念珠菌感染與所生產(chǎn)新生兒感染性疾病相關(guān)性的研究報(bào)道較少，惠州地區(qū)未見(jiàn)相關(guān)研究公開(kāi)報(bào)道。加強(qiáng)圍產(chǎn)保健對(duì)孕婦生殖道念珠菌感染的監(jiān)測(cè)，提高新生兒生育、生存質(zhì)量，減少新生兒感染性疾病的發(fā)病率與死亡率，為圍產(chǎn)期保健提供科學(xué)的參考依據(jù)，有較高的社會(huì)效益及經(jīng)濟(jì)效益。本課題通過(guò)對(duì)生殖道念珠菌感染的孕婦及所生產(chǎn)的患有感染性疾病的新生兒進(jìn)行回顧性調(diào)查研究，對(duì)孕婦生殖道念珠菌感染的發(fā)生率、所生產(chǎn)的患有新生兒感染性疾病的發(fā)病率、死亡率以及各種主要臨床表現(xiàn)進(jìn)行分析，了解其中的相關(guān)性，為圍產(chǎn)期保健提供科學(xué)的參考依據(jù)。本文對(duì)本院2013年3月-2014年3月的1027例住院產(chǎn)婦的宮頸分泌物和陰道分泌物做常規(guī)細(xì)菌培養(yǎng)，現(xiàn)將結(jié)果報(bào)道如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取本院2013年3月-2014年3月實(shí)施產(chǎn)前檢查發(fā)現(xiàn)生殖道遭念珠菌感染的晚期產(chǎn)婦1027例作為研究對(duì)象，將其陰道分泌物進(jìn)行念珠菌培養(yǎng)，將檢驗(yàn)結(jié)果呈陽(yáng)性的患者作為對(duì)照組，隨機(jī)再抽取相同人數(shù)念珠菌檢驗(yàn)呈陰性的產(chǎn)婦作為觀察組。對(duì)照組102例產(chǎn)婦中，經(jīng)陰道分泌物念珠菌培養(yǎng)結(jié)果顯示呈陽(yáng)性，年齡22~34歲，平均（32.3±2.1）歲；孕齡37~41周，平均（39.2±0.8）周；體重49.3~62.1 kg，平均（54.6±2.3）kg。觀察組102例產(chǎn)婦中，經(jīng)陰道分泌物念珠菌培養(yǎng)結(jié)果呈陰性，年齡26~37歲，平均（32.4±0.6）歲；孕齡36~41周，平均（39.2±0.5）周；體重48.7~65.2 kg，平均（56.4±2.7）kg。兩組孕婦的年齡、孕齡、體重等一般資料比較差異均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），具有可比性。

1.2 儀器的選用 本次試驗(yàn)采用的儀器為超高倍顯微鏡圖像分析系統(tǒng)。

1.3 方法

1.3.1 標(biāo)本的采集 采用無(wú)菌的棉拭子插入產(chǎn)婦的宮頸口1 cm左右的部位，然后轉(zhuǎn)動(dòng)1周，停留3~5 s之后取出，放置于無(wú)菌管內(nèi)進(jìn)行密封保存，然后再送往檢驗(yàn)室檢驗(yàn)。

1.3.2 念珠菌的培養(yǎng)方法 念珠菌感染的實(shí)驗(yàn)室檢測(cè)方法：（1）鹽水直接涂片法（初篩）。棉拭子插入陰道1 cm處，然后轉(zhuǎn)動(dòng)1周，停留3~5 s取出，或者使用窺陰器取宮頸分泌物，然后將標(biāo)本置入預(yù)先加入0.5 mL氯化鈉的青霉素瓶?jī)?nèi)，作懸滴涂片和革蘭染色，然后將二者的鏡檢結(jié)果進(jìn)行記錄，然后將青霉素瓶、瓶?jī)?nèi)剩余液體、棉拭子均放置于室內(nèi)24 h左右，室內(nèi)溫度在22~26 ℃，然后制作懸滴涂片在高倍顯微鏡下進(jìn)行觀察。檢驗(yàn)呈陽(yáng)性者，用接種環(huán)挑取生長(zhǎng)物1環(huán)，與凹玻片中50 μL血清進(jìn)行混合，充分混合之后將蓋玻片蓋上，稍微輕壓讓混合物向四周均勻的溢散，然后放置在紙盒內(nèi)的水浴箱中，溫度保持在37 ℃，放置時(shí)間在3~4 h，然后觀察芽管的生成情況[2-3]；（2）直接培養(yǎng)法。①取少許菌落混懸于0.5 mL羊血清中；②將試管在35~37 ℃培養(yǎng)，培養(yǎng)時(shí)間小于3 h；③培養(yǎng)完畢，取一滴懸液滴在載玻片上，低倍鏡下觀察有無(wú)芽管從胞體生出，寬大約為胞體的一半，長(zhǎng)大為胞體的3~4倍；④培養(yǎng)2 h內(nèi)白色念珠菌生成芽管[4]。

1.3.3 念珠菌的鑒定 取樣品液劃線或者涂布與平板上，保持溫度在25~28 ℃，放置48 h，白色念珠菌表現(xiàn)為藍(lán)綠色，熱帶念珠菌表現(xiàn)為鐵藍(lán)色或者藍(lán)灰色，光滑念珠菌呈現(xiàn)出紫色，克柔假絲酵母菌呈現(xiàn)出粉紅色，其他念珠菌均為白色，詳情如表1所示。

表1 各種念珠菌的鑒定顏色區(qū)別

1.3.4 人員操作要求 所有的工作人員必須保持嚴(yán)謹(jǐn)?shù)墓ぷ鲬B(tài)度，統(tǒng)一經(jīng)受公司或者醫(yī)院的專(zhuān)業(yè)培訓(xùn)，操作人員的人數(shù)確保固定。

1.3.5 新生兒患感染性疾病診斷 新生兒出生后到出院前3 d的時(shí)間段內(nèi)，嬰兒出現(xiàn)感染性疾病，比如感染性肺炎、化膿性腦膜炎、感染性腹瀉、臍帶炎等均可被診斷為新生兒感染性疾病[5]。

1.4 統(tǒng)計(jì)學(xué)處理 采用SPSS 16.0軟件對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，計(jì)量資料用（x-±s）表示，比較采用t檢驗(yàn)，計(jì)數(shù)資料以率（%）表示，比較采用 字2檢驗(yàn)，以P<0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

本次所選取的研究對(duì)象為1027例晚期產(chǎn)婦，其中經(jīng)生殖道分泌物檢測(cè)得出102例孕婦被念珠球菌感染，感染率為9.93%，未被念珠球菌感染的患者為925例，所占比例為90.07%；結(jié)果顯示，第一胎產(chǎn)前念珠菌檢驗(yàn)呈陽(yáng)性的群體，個(gè)體最高，其一般情況如表2所示。

表2 102例產(chǎn)前陰道念珠菌感染產(chǎn)婦的一般情況 例（%）

其中白色念珠菌75例，占所有的念珠菌感染者的73.53%；光滑念珠菌20例，所占比例為19.61%，克柔假絲酵母菌7例，所占比例為6.86%，詳見(jiàn)表3。

表3 念珠菌的感染情況

對(duì)照組患者即念珠菌檢驗(yàn)呈陽(yáng)性的產(chǎn)婦，所產(chǎn)新生兒發(fā)生感染性疾病的有9例，發(fā)生率為8.82%。觀察組患者即念珠球菌檢驗(yàn)呈陰性的產(chǎn)婦，新生兒出現(xiàn)感染性疾病的有2例，發(fā)生率為1.96%，兩組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（字2=4.7084，P=0.0300）。對(duì)照組患感染性新生兒中尿布疹2例，口腔內(nèi)生白斑3例，嘴角皸裂3例，咽部鵝口瘡1例。觀察組新生兒2例均為感染性肺炎病。兩組患兒均出現(xiàn)死亡情況。

3 討論

念珠菌是一種真菌，其中白色的念珠菌可以導(dǎo)致婦女患陰道炎。它的形狀呈卵圓形，有芽孢，同時(shí)細(xì)胞發(fā)芽會(huì)形成假菌絲。念珠菌對(duì)于日光、紫外線等具有很強(qiáng)的抵抗力，但是不耐高溫，一般溫度超過(guò)60 ℃，時(shí)長(zhǎng)大約1 h左右，菌體便會(huì)死亡[6]。本次試驗(yàn)中檢驗(yàn)結(jié)果顯示假絲酵母菌的病原為白假絲酵母菌、光滑假絲酵母菌以及平滑假絲酵母菌等。女性的陰道微生物系統(tǒng)是由機(jī)體的內(nèi)分泌調(diào)節(jié)、微生態(tài)菌群、解剖結(jié)構(gòu)三者聯(lián)合組成的，如果是生理期或者妊娠期，那么生殖道內(nèi)部的生態(tài)環(huán)境就會(huì)發(fā)生變化，從而引發(fā)念珠菌或者其他細(xì)菌的感染[7]。因此對(duì)于念珠菌的分離、培養(yǎng)鑒定都應(yīng)該引起醫(yī)學(xué)研究者廣泛的關(guān)注。

由于感染念珠菌而導(dǎo)致的陰道炎是一種非常常見(jiàn)的婦科病，其中以妊娠晚期的產(chǎn)婦患病率最高，資料顯示，在妊娠晚期的產(chǎn)婦中大約有25%~30%的陰道中有念珠菌[7]，本次研究對(duì)象的采集過(guò)程中，念珠菌檢驗(yàn)呈陽(yáng)性患者的比例為9.93%，遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于一般水平。念珠菌屬于女性陰道的正常菌群，主要感染原因是因?yàn)樵袐D在妊娠晚期機(jī)體的免疫力降低，雌激素分泌過(guò)多，然后導(dǎo)致陰道的菌群平衡失調(diào)，同時(shí)在妊娠晚期產(chǎn)婦陰道的pH值降低，酸性增強(qiáng)，而念珠菌是耐酸性菌群，在酸性環(huán)境中生長(zhǎng)速度和繁殖速度加快，因此妊娠末期和非妊娠期女性，念珠菌感染差別非常大[8-9]。本次研究中，念珠菌培養(yǎng)呈陽(yáng)性的產(chǎn)婦為102例，結(jié)果顯示，陽(yáng)性率最高的是家庭主婦，主要的原因可能是由于個(gè)人的衛(wèi)生情況有關(guān)。以白色念珠菌為主的75例，所占的比例為73.53%，因此由于白念珠菌而引發(fā)的陰道炎應(yīng)該引起人們的重視，從而采取有效的治療措施。陰道是產(chǎn)婦自然分娩新生兒出生的途徑，因此如果有孕婦患有陰道炎，那么很容易造成新生兒發(fā)生感染性疾病，另外現(xiàn)在妊娠末期對(duì)于產(chǎn)婦來(lái)說(shuō)也非常容易導(dǎo)致胎膜早破等并發(fā)癥。

醫(yī)學(xué)技術(shù)的不斷發(fā)展，人們對(duì)于生育的觀念也有了轉(zhuǎn)變，但是在保證少生優(yōu)育的同時(shí)，醫(yī)學(xué)研究者更應(yīng)該關(guān)注孕婦妊娠和分娩過(guò)程中所要面臨的問(wèn)題，特別是由于產(chǎn)婦的婦科疾病從而直接影響新生兒的身體健康。研究表明，新生兒的感染性疾病大部分都是由產(chǎn)婦垂直傳播的[10]。比如B型鏈球菌，簡(jiǎn)稱(chēng)GBS，它能夠使得新生兒體內(nèi)引發(fā)多種感染，比如肺炎、腦膜炎等，而這種病菌多存在于產(chǎn)婦的直腸和陰道之中，因此非常容易傳染給新生兒；大腸桿菌可以引發(fā)新生兒出現(xiàn)腦膜炎、敗血癥以及肺炎，主要存在于產(chǎn)婦的大腸內(nèi)部，同樣也非常容易垂直傳播給新生兒；主要的臨床癥狀是高燒、精神萎靡、厭食等；念珠菌可以導(dǎo)致新生兒發(fā)生感染性疾病，比如尿布疹、口咽部生鵝口瘡、嘴角龜裂，口腔內(nèi)白斑等[11-12]。本次研究中對(duì)照組新生兒中尿布疹2例，主要的臨床癥狀會(huì)陰部、肛門(mén)、臀部，大腿外側(cè)等部位的皮膚發(fā)紅、充血，嚴(yán)重者出現(xiàn)表皮脫落伴有紅斑和丘疹，最嚴(yán)重可能引發(fā)敗血癥?？谇粌?nèi)生白斑3例，主要臨床癥狀就是口腔內(nèi)的出現(xiàn)白點(diǎn)有痛感，影響新生兒的進(jìn)食；嘴角皸裂、咽部鵝口瘡共4例；觀察組新生兒2例均為感染性肺炎病。

因此對(duì)于妊娠晚期的產(chǎn)婦應(yīng)該頻繁地進(jìn)行檢查，做到早發(fā)現(xiàn)、早治療，保證母嬰的身體健康。如果在妊娠期被檢出念珠菌呈陽(yáng)性，應(yīng)該及時(shí)進(jìn)行治療，避免造成新生嬰兒的垂直傳播。妊娠期婦女念珠菌感染中，最多的是白念珠菌，其次是熱帶念珠菌，再次是光滑念珠菌。據(jù)資料顯示，在所有的新生兒出現(xiàn)感染性疾病中，由于自然分娩導(dǎo)致感染所占比重為22%~24%，其中最主要的表現(xiàn)形式是口腔念珠菌的感染[13]。據(jù)醫(yī)學(xué)研究者的研究表明，由于產(chǎn)婦陰道分泌物檢測(cè)念珠菌呈陽(yáng)性的，新生兒的皮膚、口腔涂片檢測(cè)呈陽(yáng)性率為7.14%，因此可能導(dǎo)致垂直傳染率為7.14%[14]，本次研究的念珠菌的垂直傳染率為8.82%，基本保持一致。為了研究母嬰是否真正存在垂直傳播，筆者將所篩選的菌株均進(jìn)行了DNA檢測(cè)排序，并采用隨機(jī)擴(kuò)增DNA多態(tài)性分析及染色體核型分析，檢測(cè)結(jié)果表明，所選的菌株形態(tài)和生化鑒定結(jié)果保持一致，因此表明產(chǎn)婦和新生兒所分離出的念珠菌為同一菌株[15]，在對(duì)照組發(fā)生感染的9例新生兒中，出現(xiàn)鵝口瘡的嬰兒1例，所占比例為11.1%，因此在以后的臨床治療實(shí)踐中，確保新生兒降低對(duì)念珠菌的感染，一定要對(duì)妊娠晚期的產(chǎn)婦進(jìn)行陰道抗真菌治療。

本次使用的念珠菌的培養(yǎng)方法采用鹽水直接涂片法進(jìn)行初次篩選，然后使用直接培養(yǎng)方法進(jìn)行對(duì)念珠菌的確診。鹽水直接涂片法（初篩）7元/例、直接培養(yǎng)法38元/例，每年3000~3500人次，每年增加效益13.5~16.5萬(wàn)元[15]。通過(guò)對(duì)孕婦生殖道念珠菌感染與所產(chǎn)新生兒感染性疾病相關(guān)性的回顧性調(diào)查分析，了解其中的相關(guān)性，并掌握其規(guī)律，提出加強(qiáng)圍產(chǎn)保健對(duì)孕婦生殖道念珠菌感染的監(jiān)測(cè)，提高新生兒生育、生存質(zhì)量，減少新生兒感染性疾病的發(fā)病率與死亡率，為圍產(chǎn)期保健提供科學(xué)的參考依據(jù)，有較高的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。

綜上所述，本課題研究有較強(qiáng)的社會(huì)及經(jīng)濟(jì)效益，課題設(shè)計(jì)合理，路線明確，步驟清晰，具有相應(yīng)的人員及設(shè)備等條件，而且采用回顧性調(diào)查研究的方法，方法簡(jiǎn)捷，數(shù)據(jù)可靠，經(jīng)費(fèi)節(jié)儉，可操作性強(qiáng)，可行性強(qiáng)。

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