姜黃素腸道修復(fù)劑對雞球蟲病疫苗免疫效果的影響

劉麗丹，吳松明，廖貴城，唐建紅，翁亞彪，2?

姜黃素腸道修復(fù)劑對雞球蟲病疫苗免疫效果的影響

劉麗丹1，吳松明1，廖貴城1，唐建紅1，翁亞彪1，2?

（1.佛山市正典生物技術(shù)有限公司，廣東佛山528138；2.華南農(nóng)業(yè)大學(xué)獸醫(yī)學(xué)院，廣州510642）

為研究姜黃素腸道修復(fù)劑對雞球蟲病疫苗免疫效果的影響，在球蟲疫苗免疫時加入姜黃素腸道修復(fù)劑，通過觀察測定免疫組雞群的精神狀況、首免卵囊排泄量、疫苗反應(yīng)期的腸道病變記分和增重以及免疫后21 d攻蟲的保護(hù)效果進(jìn)行綜合評價。結(jié)果顯示：在免疫期，姜黃素實(shí)驗(yàn)組雞只的精神狀況良好，首免卵囊量排泄正常，疫苗反應(yīng)期的腸道病變記分和增重比未加姜黃素實(shí)驗(yàn)組的要好些；21 d攻蟲后，姜黃素實(shí)驗(yàn)組的相對增重高于未加姜黃素實(shí)驗(yàn)組，但差異性不顯著（P＞0.05），而且姜黃素實(shí)驗(yàn)組的腸道病變記分和糞便記分均低于未加姜黃素實(shí)驗(yàn)組。試驗(yàn)表明，姜黃素在球蟲疫苗免疫過程中能夠修復(fù)腸道損傷、提升腸道健康，對球蟲疫苗免疫具有較好的輔助性作用。

姜黃素；腸道修復(fù)劑；雞球蟲病活疫苗；免疫效果

雞球蟲病是集約化養(yǎng)雞場中流行普遍，發(fā)病率高，危害嚴(yán)重的疾病之一［1］。雞球蟲病長期依賴于抗球蟲藥物的防控，隨著國家對藥物殘留嚴(yán)格控制以及藥物耐藥性問題加劇，雞球蟲疫苗逐漸取代抗球蟲藥物成為防控該病的主要手段［1－2］。國內(nèi)市面上銷售的雞球蟲病疫苗產(chǎn)品有佛山市正典生物技術(shù)公司生產(chǎn)的正典球苗

（SCOCVAC）和先靈葆雅公司生產(chǎn)的COCCIVAC，

前者是早熟弱毒蟲株疫苗，后者是強(qiáng)毒株疫苗［3－5］。而且強(qiáng)毒疫苗較弱毒疫苗更容易出現(xiàn)疫苗反應(yīng)，這是由于雞球蟲繁殖力很強(qiáng)，在雞群接種雞球蟲疫苗后，1個疫苗蟲株的卵囊就可能產(chǎn)生數(shù)萬甚至數(shù)十萬的后代卵囊，當(dāng)這些卵囊孢子發(fā)育后再次重復(fù)感染雞只，刺激雞體產(chǎn)生堅(jiān)強(qiáng)的抗球蟲免疫力的同時，對腸黏膜也會造成一定的損傷，這時雞群表現(xiàn)一定程度的疫苗反應(yīng)［6］。在疫苗反應(yīng)期時，當(dāng)環(huán)境中腸道細(xì)菌或病毒增多，會加劇腸道損傷，從而表現(xiàn)出不同程度的腸道癥狀，如飼料糞、番茄糞、水糞甚至血便等［6］。姜黃素是一種用于養(yǎng)雞中的腸道調(diào)理中藥，可保護(hù)正常細(xì)胞免受各種不良因素的損傷，具有良好的抗炎、抗纖維化、抗氧化、調(diào)節(jié)免疫功能等藥理活性［7－8］。本實(shí)驗(yàn)是在使用雞球蟲病活疫苗的過程中添加姜黃素，研究姜黃素對雞球蟲病活疫苗首免、疫苗反應(yīng)程度，腸道健康以及免疫效果的影響。

1 材料和方法

1.1 試驗(yàn)材料 雞球蟲病四價活疫苗：佛山市正典生物技術(shù)有限公司生產(chǎn)；雞球蟲強(qiáng)毒卵囊：柔嫩艾美耳球蟲、毒害艾美耳球蟲強(qiáng)毒株、巨型艾美耳球蟲強(qiáng)毒株和堆型艾美耳球蟲強(qiáng)毒株，均由佛山市正典生物技術(shù)有限公司保存；姜黃素：廣州雙燕生物科技有限公司提供。

1.2 試驗(yàn)動物 1日齡嶺南黃雞180羽：購自廣東省農(nóng)業(yè)科學(xué)院畜牧研究所種雞場。

1.3 試驗(yàn)分組與處理

1.3.1 試驗(yàn)分組 3日齡嶺南黃雞180羽，隨機(jī)分成3組，每組60羽雞，分別為空白組、姜黃素實(shí)驗(yàn)組和未加姜黃素實(shí)驗(yàn)組，分別在分隔成約2.7m2（1.8m×1.5m）的相等飼養(yǎng)面積的地面上隔離飼養(yǎng)，以谷殼為墊料，厚度為4 cm，免后足11 d換墊料，所有試驗(yàn)組飼喂的飼料不添加任何抗球蟲藥物。

1.3.2 試驗(yàn)組處理 除空白組，各試驗(yàn)組雞在4日齡時進(jìn)行接種免疫，每組雞按每羽雞1羽份接種雞球蟲活疫苗。姜黃素實(shí)驗(yàn)組：按照雞球蟲病四價活疫苗使用指南操作來免疫雞群；未加姜黃素實(shí)驗(yàn)組：與姜黃素實(shí)驗(yàn)組使用相同的免疫方法和免疫劑量；姜黃素實(shí)驗(yàn)組雞群從3日齡開始，將姜黃素按0.5 g／kg飼料，每天拌料至試驗(yàn)結(jié)束。

姜黃素實(shí)驗(yàn)組和未加姜黃素實(shí)驗(yàn)組于免后足5～8 d，免后足13～16 d，分別計(jì)克糞卵囊數(shù)值（OPG值）。在免疫接種后第13天和第20天稱量3個組的雞重量，計(jì)算平均體重和增重；免疫后的第13～16天，每天從試驗(yàn)組隨機(jī)抽取4只雞，剖檢腸道，記錄腸道病變記分及腸內(nèi)容物情況，觀察疫苗反應(yīng)程度；免疫后第21天，分別從姜黃素實(shí)驗(yàn)組和未加姜黃素實(shí)驗(yàn)組以及陽性對照組各組隨機(jī)取8只雞，共分為3個攻蟲組，另取8只空白組雞作為陰性對照組，每組雞稱重后，分別對姜黃素實(shí)驗(yàn)組和未加姜黃素實(shí)驗(yàn)組以及陽性對照組經(jīng)口灌服混合強(qiáng)毒株卵囊（每只雞灌服10萬個柔嫩艾美耳球蟲強(qiáng)毒株卵囊、5萬個毒害艾美耳球蟲強(qiáng)毒株卵囊、5萬個巨型艾美耳球蟲強(qiáng)毒株卵囊和3萬個堆型艾美耳球蟲強(qiáng)毒株卵囊），攻蟲后第6天結(jié)束試驗(yàn)，評價疫苗免疫保護(hù)效果。

1.3.3 評價指標(biāo) 對試驗(yàn)組免疫的臨床狀況，克糞卵囊值、腸道病變記分和內(nèi)容物、雞群增重情況、免疫保護(hù)效果等各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行觀察和評價［9］。利用SPSS 18.0數(shù)理統(tǒng)計(jì)軟件和Excel軟件對兩個試驗(yàn)之間相對增重的差異性進(jìn)行比較。

2 結(jié)果與分析

2.1 臨床狀況 整個試驗(yàn)過程中，免疫組雞健康狀況良好，食欲正常，無雞球蟲病引起的雞只死亡。疫苗反應(yīng)期，姜黃素實(shí)驗(yàn)組和未加姜黃素實(shí)驗(yàn)組雞有零星的飼料糞和番茄糞，但姜黃素實(shí)驗(yàn)組的飼料糞和番茄糞數(shù)量要少于未加姜黃素實(shí)驗(yàn)組。攻蟲后各組雞都出現(xiàn)了不同程度的臨床癥狀。陽性對照組雞精神沉郁，食欲減退，羽毛無光澤，消瘦、脫水等癥狀明顯；免疫組的雞反應(yīng)輕微，僅有1～2只表現(xiàn)精神不佳，食欲較差，消瘦等癥狀。

2.2 卵囊OPG值 于免疫后第5～8天和第13～16天，每天從每個免疫組挑取糞便，用麥?zhǔn)嫌?jì)數(shù)板法檢測雞群的卵囊OPG值，結(jié)果如表1所示。免疫后第5～8天，卵囊排泄高峰期都在第6天。免疫后第13～16天，未加姜黃素實(shí)驗(yàn)組卵囊排泄高峰期出現(xiàn)在第14天高峰，而姜黃素實(shí)驗(yàn)組卵囊排泄高峰期是在第15天。

表1 免疫后第5～8天和第13～16天的卵囊OPG值個／羽

2.3 疫苗反應(yīng)期［6］

2.3.1 腸道剖檢 免疫后第13～16天，未加姜黃素實(shí)驗(yàn)組和姜黃素實(shí)驗(yàn)組的腸道漿膜和粘膜均無明顯的病變，僅有輕微的腸道反應(yīng)。在免疫后15天，剖檢腸道發(fā)現(xiàn)未加姜黃素實(shí)驗(yàn)組小腸中段腸內(nèi)容物呈水樣。免疫后第16天，未加姜黃素實(shí)驗(yàn)組小腸中段，腸外觀蒼白，內(nèi)容物水樣，黏膜層較粗糙；而姜黃素實(shí)驗(yàn)組腸道較健康，與空白組外觀接近。

2.3.2 腸道病變記分 在免疫后第13～16天，姜黃素實(shí)驗(yàn)組和未加姜黃素實(shí)驗(yàn)組的腸道病變記分見表2。

表2 免疫后第13～16天疫苗反應(yīng)十二指腸、小腸中段和盲腸病變記分結(jié)果

2.3.3 雞群增重情況 免疫后第13天和免疫后第20天增重情況如表3所示。免疫后第13天和免疫后第20天，未加姜黃素實(shí)驗(yàn)組和姜黃素實(shí)驗(yàn)組之間的增重均無顯著性差異（P＞0.05），而且均與空白組接近。但姜黃素實(shí)驗(yàn)組要稍好于未加姜黃素實(shí)驗(yàn)組，說明姜黃素對免疫球蟲疫苗的雞群增重有一定促進(jìn)作用。

表3 免疫后第13天和第20天增重情況

2.4 免疫效果 免疫后第21天，使用強(qiáng)毒混合株卵囊攻蟲。攻蟲后6天，發(fā)現(xiàn)未加姜黃素實(shí)驗(yàn)組和姜黃素實(shí)驗(yàn)組的均能耐受強(qiáng)毒株的攻擊，詳細(xì)病變記分如表4所示。從腸道病變記分和增重來看，未加姜黃素實(shí)驗(yàn)組要稍差于加姜黃素組，但無顯著性差異（P＞0.05），這可能跟姜黃素具有腸道炎癥抑制作用有一定的聯(lián)系。

表4 免疫后21天攻蟲后增重、糞便記分、腸道病變記分以及雞死亡率情況表

3 討論與小結(jié)

3.1 姜黃素對球蟲疫苗首免的影響 對姜黃素實(shí)驗(yàn)組和未加姜黃素實(shí)驗(yàn)組免疫后的第5～8天也即首免監(jiān)測發(fā)現(xiàn)，加有姜黃素的組別的卵囊排泄量要低于未加姜黃素實(shí)驗(yàn)組，但其卵囊排泄量是《正典球苗使用指南》中卵囊監(jiān)測的范圍內(nèi)。雞球蟲病活疫苗疫苗是由藥物敏感性早熟系蟲株組成，對常見的抗球蟲藥物敏感。盡管試驗(yàn)中的姜黃素首免監(jiān)測的卵囊量較少，但屬正常范圍，這表明了該腸道修復(fù)劑不會明顯抑制球蟲的增殖和影響雞群首免的建立。

3.2 姜黃素對疫苗反應(yīng)期的影響 腸炎是雞養(yǎng)殖場常見的疾病之一，其中以壞死性腸炎是最易發(fā)生且危害最大［10－3］。在免疫后的13～16天，雞群可能會出現(xiàn)疫苗反應(yīng)情況，在此期間如有其他不良的影響因素如應(yīng)激、病原菌繼發(fā)感染，就可能引起腸炎的發(fā)生［6］。而姜黃素具有抑制多種炎癥因子的作用，能夠明顯減輕腸組織的損傷，減弱壞死性腸炎炎癥反應(yīng)，對急性、亞急性和慢性腸炎均有藥效作用。其作用機(jī)理是通過減少中性粒細(xì)胞浸潤，抑制脂質(zhì)過氧化物反應(yīng)。在姜黃素對新生大鼠壞死性腸炎的試驗(yàn)指出，姜黃素能夠降低促炎因子TNF－α和炎性介質(zhì)COX－2的表達(dá)，同時增加抑炎因子IL－10的表達(dá)，進(jìn)而達(dá)到抑制壞死性腸炎的作用［13］。在本次實(shí)驗(yàn)中，疫苗反應(yīng)期的姜黃素實(shí)驗(yàn)組的十二指腸、小腸中段、盲腸病變記分均低于未加姜黃素實(shí)驗(yàn)組。剖檢腸道發(fā)現(xiàn)，姜黃素實(shí)驗(yàn)組的腸道粘膜層正常與空白對照組較接近；而未加姜黃素實(shí)驗(yàn)組腸道蒼白，有輕微腸炎癥狀，個別雞腸道含較多飼料樣或水樣內(nèi)容物。在免疫后第13天和第20天對未加姜黃素實(shí)驗(yàn)組和姜黃素實(shí)驗(yàn)組的雞群相對增重與空白對照組無顯著差異（P＞0.05），但姜黃素實(shí)驗(yàn)組增重情況均要好于不加藥組。因此，從試驗(yàn)結(jié)果來看，姜黃素在疫苗反應(yīng)期對雞群腸道健康有一定的改善和修復(fù)作用。

3.3 姜黃素對疫苗免疫效果的影響 免疫21天后，對未加姜黃素實(shí)驗(yàn)組和姜黃素實(shí)驗(yàn)組使用強(qiáng)毒株攻蟲后發(fā)現(xiàn)，免疫組雞均能抵抗強(qiáng)毒株的攻擊，無雞只死亡，腸道病變記分和糞便記分均較低，且相對增重與陽性對照組間差異性顯著（P＜0.05），與空白對照組的增重差異不顯著（P＞0.05）；姜黃素實(shí)驗(yàn)組的腸道病變記分和糞便記分比未加姜黃素實(shí)驗(yàn)組的要低，增重情況也好于未加姜黃素實(shí)驗(yàn)組，但兩組之間的增重?zé)o顯著差異（P＞0.05）。綜合免疫效果來看，使用姜黃素后腸道粘膜完好程度和糞便樣式都趨于正常，進(jìn)而體現(xiàn)出較好的增重情況，同時雞群也表現(xiàn)出良好的免疫保護(hù)效果。

從本試驗(yàn)可以看出，姜黃素是一種良好的腸道劑，具有較好的腸道修復(fù)作用，對球蟲疫苗的免疫建立沒有影響，能夠改善腸道健康狀況，在一定程度上抑制炎癥的發(fā)生，還可對球蟲疫苗免疫起輔助性作用。因此，在實(shí)際生產(chǎn)中針對某些地區(qū)或某個免疫階段，在使用球蟲疫苗過程中腸炎壓力較大時，可使用腸道修復(fù)劑預(yù)防或輔助治療腸炎。

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（編輯：李文平）

Effects of Intestinal Repair Agent－curcum in on Coccidiosis Vaccination

LIU Li－dan1，WU Song－ming1，LIAO Gui－cheng1，TANG Jian－h(huán)ong1，WENG Ya－biao1，2?
（1.Foshan Standard Biotech Co.，Ltd，F(xiàn)oshan，Guangdong 528138，China；2.College of Veterinary Medicine，South China Agricultural University，Guangzhou 510624，China）

In order to study effects of intestinal repair agent－curcumin on immunization chickens，curcumin was included in one experiment group during coccidium immunization.Chicken mental condition，oocysts output，intestinal lesion scores and weight gain in vaccine reaction period，and immunity to coccidium after 21stwere evaluated.Results showed that in drug and immunization group chicken mental condition was very well，also the oocysts output was normal，the intestinal lesion scores of vaccine reaction period were lower than those in immunization group，and weight gains of vaccine reaction period were higher than that in immunization group.After 21stimmunization，the two groups were challenged by virulent strains，and results showed thatweight gains of drug and immunization group were higher than those of immunization group，which was not significant（P＞0.05）.What’smore，the intestinal lesion and feces scores were lower than those of immunization group.Therefore，curcumin，kind of intestinal repair agent，has the effects of repairing intestinal injury，improving intestinal health，and assisting anti－coccidial immunity.

curcumin；intestinal repair agent；coccidiosis live vaccines；immunization effects

2014－10－16

A

1002－1280（2015）02－0022－05

S855.9

雞球蟲病藥敏蟲株七價活疫苗的研制及其應(yīng)用研究（2011C01）

劉麗丹，碩士，從事獸醫(yī)寄生蟲研究工作。

翁亞彪。E－mail：ybweng＠qq.com