乙醛脫氫酶1、CD133在鼻咽癌組織中的表達及臨床意義

覃宇奇，覃冠平，藍川，韋愛芳

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論著·臨床

乙醛脫氫酶1、CD133在鼻咽癌組織中的表達及臨床意義

覃宇奇，覃冠平，藍川，韋愛芳

目的 觀察乙醛脫氫酶1(ALDH 1)、CD133在鼻咽癌組織中的表達及其臨床意義。方法 檢測鼻咽癌組織135例(研究組)以及正常組織97例(對照組)標本中的ALDH 1、CD133表達情況，并統(tǒng)計分析其與鼻咽癌患者臨床資料的關(guān)系。結(jié)果 (1)研究組ALDH 1陽性表達率為75.56%(102/135)，高于對照組的42.30%(42/97)(χ2=24.945，P<0.05)。ALDH 1評分在鼻咽癌患者性別、年齡、原發(fā)癌/轉(zhuǎn)移癌、未分化癌/分化型以及有無頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等不同臨床資料間無顯著性差異(t=0.543、0.034、0.022、0.356、0.382，P均>0.05)。(2)研究組CD133陽性表達率為35.56%(48/135)，高于對照組的12.37%(12/112)(χ2=15.824P<0.05)。CD133的表達在患者原發(fā)癌/轉(zhuǎn)移癌、未分化癌/分化型不同資料間比較差異有統(tǒng)計學意義(χ2=15.028、5.186，P均<0.05)，在患者性別、年齡以及有無頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等不同臨床資料間比較差異無統(tǒng)計學意義(χ2=1.545、0.000、0.036，P>0.05)。結(jié)論 ALDH1與CD133在鼻咽癌患者中均有較高的陽性表達率，ALDH1的臨床價值需進一步研究，而CD133可能與鼻咽癌轉(zhuǎn)移、病理分型有密切的關(guān)系。

乙醛脫氫酶1；細胞表面黏附分子；鼻咽癌；腫瘤干細胞

新近的研究顯示腫瘤也存在腫瘤干細胞，其存在與腫瘤的發(fā)生、轉(zhuǎn)移以及復發(fā)有密切的關(guān)系[1]，并且常導致放化療效果達不到臨床期望。腫瘤干細胞的生長、分化與乙醛脫氫酶1(ALDH1)有密切的關(guān)系，后者是前者的必需物質(zhì)[2]。細胞表面黏附分子(CD133)也是近年來研究較多的腫瘤干細胞的分子標志物。越來越多的證據(jù)顯示二者參與了多種腫瘤的發(fā)病、發(fā)展，但其與鼻咽癌的關(guān)系目前研究甚少，本研究通過檢測其在鼻咽癌中的表達，以明確其與鼻咽癌的關(guān)系，并嘗試分析其臨床意義。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 病理樣本來源于2004年6月—2014年5月廣西壯族自治區(qū)江濱醫(yī)院病理科和河池市人民醫(yī)院病理科的活檢標本，經(jīng)病理證實為鼻咽癌者135例納入本研究(研究組)，其中鼻咽部原發(fā)癌112例(未分化癌76例、分化型癌36例，伴有頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移37例)，頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移癌23例；135例患者中男96例，女39例，年齡25～82(52.1±13.5)歲。選擇同期病理科證實為鼻咽慢性炎性反應黏膜活檢標本97份為對照組，男71例，女26例，年齡24～80(51.6±12.7)歲。2組標本來源患者的性別、年齡比較無顯著性差異(P<0.05)，具有可比性。

1.2 標本處理 標本送病理科后均經(jīng)10%甲醛固定，并經(jīng)常規(guī)脫水、石蠟包埋、切片以及脫蠟等處理，切片標準厚度為4 μm，采用Envision免疫學組織化學二步法進行檢測。將已完成脫蠟至水的標本先使用0.01 mol/L檸檬酸緩沖液高溫、高壓修復3 min，之后使用3%H2O2浸泡10 min以阻斷細胞內(nèi)源性過氧化物酶。上述步驟完成后采用PBS洗滌，每次3 min，反復洗滌3次。滴入ALDH1[為ALDH1兔多克隆濃縮型抗體(BA3672)，購自武漢博士德生物工程有限公司]和已經(jīng)稀釋為1∶100的CD133一抗[為CD133兔多克隆濃縮型抗體(BA3992)，購自武漢博士德生物工程有限公司]，陰性對照組使用pH 7.4的0.01 mol/L PBS液代替一抗。滴注完畢后將標本置于37℃暖箱中孵育60 min，使用PBS液洗滌，每次3 min，反復3次之后滴入HRP二抗，后將標本再次置于37℃暖箱中孵育30 min，再次使用PBS液洗滌，每次3 min，反復3次。最后標本使用DAB顯色、蘇木精復染、脫水、封片等程序。

1.3 檢測指標及判斷標準

1.3.1 ALDH1： 依據(jù)切片中細胞染色的程度評分，評估顯色深淺和顯色范圍2個指標。(1)顯色深淺評分標準如下：未見顯色 0分；淺黃色 1分；棕黃色 2分；棕褐色 3分。(2)顯色范圍評分標準如下：顯色部分占細胞比例0～10% 0分；11%～30% 1分；31%～60% 2分；61%～100% 3分。顯色深淺和顯色范圍評分之和0～2分為ALDH1陰性(-)，2項之和≥3分為ALDH1陽性(+)。

1.3.2 CD133： 切片染色未見顯色為CD133陰性(-)，顯色為CD133陽性(+)。

2 結(jié) 果

2.1 ALDH1、CD133表達 研究組ALDH1陽性表達率為75.56%(102/135)，高于對照組的42.30%(42/97)(χ2=24.945，P<0.05)。研究組CD133陽性表達率為35.56%(48/135)，高于對照組的12.37%(12/97)(χ2=15.824，P<0.05)。

2.2 ALDH1、CD133表達的臨床特征 ALDH 1的表達在患者性別、年齡、原發(fā)癌/轉(zhuǎn)移癌、未分化癌/分化型以及有無頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等不同臨床資料間比較無顯著性差異(P>0.05)。CD133的表達在患者原發(fā)癌/轉(zhuǎn)移癌、未分化癌/分化型不同資料間比較有顯著性差異(P<0.05)，而在患者性別、年齡以及有無頸部淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等不同臨床資料間比較無顯著性差異(P>0.05)。見表1。

3 討 論

近年來鼻咽癌的發(fā)病率呈逐年增高的趨勢[3]，但對其治療目前并不十分樂觀，即使是放化療技術(shù)明顯進步的情況下，晚期鼻咽癌的5年生存率仍很低，最樂觀的數(shù)據(jù)也不足40%[4]，遠不能滿足醫(yī)患雙方的期望。近年來對惡性腫瘤的研究發(fā)現(xiàn)癌細胞對放化療不敏感可能與腫瘤組織中存在腫瘤干細胞(TSC)有關(guān)[5]。

表1 ALDH1、CD133在鼻咽癌患者中表達的臨床特征分析

TSC具備干細胞的某些特性，表現(xiàn)在存在自我分化多重潛能、自我修復更新等能力，其與腫瘤的增長、復發(fā)，甚至是轉(zhuǎn)移存在密切關(guān)系的觀點已被較為廣泛的認可[6]。由此可見，抑制TSC的活性甚至將其殺死后惡性腫瘤的遠期生存率有望得到改善，這就需要深入研究TSC的特異性腫瘤標記物，了解其生長特點。本研究所檢測的ALDH1和CD133就是目前研究較多的腫瘤標記物，但它們與鼻咽癌的關(guān)系目前研究甚少，本研究嘗試在這一領(lǐng)域做出努力。

ALDH1是將細胞內(nèi)乙醛氧化為乙酸的溶質(zhì)酶，是維持細胞生物活性不可或缺的物質(zhì)，這一點在TSC中也同樣成立[7]。近幾年的研究發(fā)現(xiàn)，ALDH1可作為肺癌、乳腺癌、胃癌、白血病等的功能性腫瘤標記物[5]，并且研究顯示ALDH 1陽性癌細胞具有更高的生長、增殖、分化、轉(zhuǎn)移能力[8]。本研究中，135例鼻咽癌組織標本中檢出陽性102例，檢出率高達75.56%，遠高于正常組織，提示其與鼻咽癌的發(fā)病存在密切的關(guān)系，檢測該標記物有助于臨床診斷。分析ALDH 1與患者臨床資料的關(guān)系，顯示在2組性別、年齡、原發(fā)癌/轉(zhuǎn)移癌、未分化癌/分化型以及有無頸淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移等資料間均未顯示出顯著的差異性，這一結(jié)果提示ALDH 1作為鼻咽癌腫瘤干細胞標志物的特征性并不顯著，本研究不能肯定其鼻咽癌特異性腫瘤標志物的地位。關(guān)于ALDH1在鼻咽癌檢測中的意義目前爭論頗多，差異也較為明顯，需進一步研究[5，9]。

CD133也是被廣泛研究的腫瘤標志物，其最早于1997年在小鼠神經(jīng)上皮干細胞中發(fā)現(xiàn)而被認識，目前的研究顯示CD133在腦癌、喉癌、結(jié)腸癌、肺癌等中也是特異性的腫瘤干細胞標志物[10]，在鼻咽癌領(lǐng)域的研究[11]顯示CD133陽性癌細胞具有很強的致瘤能力，且自我修復、分化能力較強。多項研究發(fā)現(xiàn)CD133與性別、年齡、腫瘤大小關(guān)系不大，但與病理分級、淋巴轉(zhuǎn)移、浸潤深度等關(guān)系密切[12]，CD133 陽性細胞的檢出往往意味著腫瘤惡性程度較高，存在轉(zhuǎn)移，預后不容樂觀[13]。本研究中，135例鼻咽癌組織標本中檢出陽性48例，陽性檢出率35.56%，雖然不及ALDH1的陽性檢出率高，但其在轉(zhuǎn)移癌CD133檢出率為73.9%，而在原發(fā)癌中檢出率為27.7%，提示CD133陽性時多意味著腫瘤有更強的侵襲性，這與國外的研究一致[13]。CD133在未分化癌中陽性檢出率為21.1%，在分化型中檢出率為41.7%，雖然結(jié)果顯示這種差異具有顯著性，但均非高度表達，分化型中陽性檢出也不足50%，以此為據(jù)將其作為反映腫瘤分化程度的特異性指標仍然十分牽強。有文獻顯示，CD133能否作為反映腫瘤分化程度的特異性指標物仍未見明確定論[14～16]，但考慮到未分化型/分化型中CD133表達存在顯著性差異，筆者考慮CD133有作為反映鼻咽癌病理分化程度特異性指標的潛力，但仍需繼續(xù)研究。需要反思的是有報道顯示CD133在分化型鼻咽癌中陽性表達率超過65%，這比本研究中的41.7%高出甚多，分析這種差異可能與本研究樣本量較小有關(guān)，同時需重視標本采集的科學性。總之，CD133可能與鼻咽癌轉(zhuǎn)移、病理分型有密切的關(guān)系，有待進一步研究證實。

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Expression of aldehyde dehydrogenase 1, CD133 in nasopharyngeal carcinoma and its clinical significance

QINYuqi*,QINGuanping,LANChuan,WEIAifang.*DepartmentofPathology,JiangbinHospitalofGuangxiZhuangAutonomousRegion,Guangxi,Nanning530021,China

Objective To observe the expression of aldehyde dehydrogenase 1 (ALDH-1), CD133 in nasopharyngeal carcinoma and its clinical significance.Methods Nasopharyngeal carcinoma (NPC) of 135 cases (study group) and normal tissue of 97 cases (control group) were detected with the ALDH-1 and CD133 expression, and statistical analyzed its relationship with clinical data for the patients with NPC.Results (1) Study group’s ALDH-1 positive expression rate was 75.56% (102/135), which was higher than the control group’s 42.30%(42/97) (χ2=24.945,P<0.05). ALDH-1 score in nasopharyngeal carcinoma patients’ gender, age, primary carcinoma / metastatic carcinoma, undifferentiated/ differentiation carcinoma and cervical lymph node metastasis did not show significant difference (t=0.543,t=0.034,t=0.022,t=0.356,t=0.382,P>0.05). (2) Study group’s CD133 expression rate was 35.56%(48/135),which was higher than in the control group 12.37%(12/112) (χ2=15.824,P<0.05). The expressions of CD133 in patients with primary cancer / metastatic carcinoma, undifferentiated / differentiated carcinoma have significant difference (χ2=15.028,χ2=5.186,P<0.05). Gender, age, and with or without cervical lymph node metastasis showed no significant difference (χ2=1.545,χ2=0.000,χ2=0.036,P>0.05).Conclusion ALDH-1 and CD133 in patients with nasopharyngeal carcinoma (NPC) had higher positive expression rate, ALDH-1’s clinical value needs to be further studied, and CD133 may have close relationship with nasopharyngeal carcinoma metastasis, pathological type.

Aldehyde dehydrogenase 1; Cell adhesion molecules; Nasopharyngeal carcinoma; Tumor stem cell

530021 南寧，廣西壯族自治區(qū)江濱醫(yī)院病理科(覃宇奇)； 547000 廣西河池市人民醫(yī)院病理科(覃冠平)， 腫瘤科(藍川，韋愛芳)

10.3969 / j.issn.1671-6450.2015.06.012

2015-02-05)