• <tr id="yyy80"></tr>
  • <sup id="yyy80"></sup>
  • <tfoot id="yyy80"><noscript id="yyy80"></noscript></tfoot>
  • 99热精品在线国产_美女午夜性视频免费_国产精品国产高清国产av_av欧美777_自拍偷自拍亚洲精品老妇_亚洲熟女精品中文字幕_www日本黄色视频网_国产精品野战在线观看 ?

    過氧化氫通過上調(diào)高遷移率族蛋白損傷心肌的實驗研究

    2015-06-09 08:08:26馬瑞松李元紅周曉亞江洪胡笑容
    疑難病雜志 2015年6期
    關(guān)鍵詞:過氧化氫性反應(yīng)脂質(zhì)

    馬瑞松,李元紅,周曉亞,江洪,胡笑容

    ?

    論著·基礎(chǔ)

    過氧化氫通過上調(diào)高遷移率族蛋白損傷心肌的實驗研究

    馬瑞松,李元紅,周曉亞,江洪,胡笑容

    目的 探討過氧化氫(H2O2)通過高遷移率族蛋白(HMGB1)介導(dǎo)對心肌損傷的作用機(jī)制。方法 胎鼠心肌細(xì)胞培養(yǎng)后,分為4組:對照組,H2O2不同濃度組(100 μmol/L、200 μmol/L、500 μmol/L),H2O2(200 μmol/L)+乙酰半胱氨酸(NAC,200 μmol/L)組,H2O2(200 μmol/L)+HMGB1抗體(20 μg/ml)組。檢測心肌細(xì)胞活性、凋亡率、乳酸脫氫酶(LDH)、肌酸激酶(CK)、超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)、HMGB1表達(dá)。結(jié)果 (1)細(xì)胞活性:與對照組比較,心肌細(xì)胞活性隨著H2O2濃度的增加而降低(t=-5.81,-9.59,-14.21,P均<0.05);NAC和HMGB1抗體可以明顯減弱H2O2(200 μmol/L)對細(xì)胞活性的抑制作用(t=-2.98,-3.03,P<均0.05)。(2)LDH和CK的表達(dá)水平:與對照組比較,LDH和CK的表達(dá)量隨著H2O2的濃度增加而增加(tLDH=9.78,15.37,18.13,tCK=11.29,20.35,26.17,P均<0.05)。與H2O2(200 μmol/L)組比,NAC和HMGB1抗體可以抑制LDH和CK的表達(dá)(tLDH=-4.91,-4.22,tCK=-4.17,3.29,P均<0.05)。(3)MDA表達(dá)和SOD活性:H2O2(100,200,500 μmol/L)可以抑制心肌細(xì)胞SOD活性,增加MDA表達(dá)(tSOD=-4.16,-6.59,-10.76,tMDA=3.98,5.16,9.47,P均<0.05);與H2O2(200 μmol/L)組比,NAC和HMGB1抗體可以拮抗H2O2對SOD和MDA的影響(tLDH=-4.91,-4.22,tCK=-4.17,3.29,P均<0.05)。(4) HMGB1的表達(dá):與對照組比較,H2O2(100,200,500 μmol/L)可明顯增加心肌中HMGB1的表達(dá)(t=12.94,21.08,25.81,P均<0.05),與H2O2(200 μmol/L)組比,NAC+ H2O2和HMGB1-Ab+ H2O2中HMGB1的表達(dá)明顯降低(t=-10.24,-8.09,P均<0.05)。(5)心肌凋亡:與對照組比較, H2O2組(100、200、500 μmol/L)心肌凋亡率明顯增加(t=7.52,13.06,16.61,P<0.05);NAC+H2O2組和HMGB1+H2O2組心肌凋亡率較H2O2(200 μmol/L)組明顯增加(t=-4.89,-4.23,P<0.05)。結(jié)論 H2O2誘導(dǎo)的氧化應(yīng)激反應(yīng)可以通過上調(diào)HMGB1表達(dá),損傷心肌。

    過氧化氫;高遷移率組蛋白;心肌損傷;胎鼠

    心肌缺血再灌注或缺氧再復(fù)氧能夠?qū)е聶C(jī)體內(nèi)的免疫細(xì)胞釋放大量活性氧(ROS)和促炎細(xì)胞因子(如TNF-α、IL-1、IFN-γ等)。心肌中活性氧生成的關(guān)鍵酶是煙酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸(NADPH)氧化酶和黃嘌呤氧化酶[1],乙酰半胱氨酸(NAC)可以降低NADPH氧化酶的活性,減少ROS的生成[2]。心肌細(xì)胞中ROS能夠引起氧化應(yīng)激及氧化損傷,過氧化氫(H2O2)作為一種常見的活性氧也參與了其中。氧化應(yīng)激參與了心血管系統(tǒng)多種疾病的發(fā)生、發(fā)展,包括心肌缺血再灌注損傷,可導(dǎo)致細(xì)胞凋亡或壞死。

    高遷移率族蛋白(High mobility group protein,HMGB1)是一種非組織核蛋白,由激活的免疫細(xì)胞或壞死細(xì)胞釋放,作為促炎因子可加重心肌缺血再灌注損傷[3,4]。2002年Scafidi等[5]在研究中提出HMGB1是壞死和凋亡細(xì)胞是否發(fā)生炎性反應(yīng)的關(guān)鍵信號。Tsung等[6]在肝臟I/R模型中發(fā)現(xiàn),ROS可能參與了HMGB1的產(chǎn)生和釋放,肝細(xì)胞在過氧化氫作用下HMGB1表達(dá)明顯增加,而加入了抗氧化劑后可以顯著抑制HMGB1的釋放。據(jù)此我們推測在心臟I/R中,HMGB1可能參與了氧化應(yīng)激對心肌的損傷。本文觀察HMGB1在心肌缺血缺氧時的表達(dá)機(jī)制,為預(yù)防各種心肌缺血后氧化應(yīng)激炎性反應(yīng)提供新的思路,現(xiàn)報道如下。

    1 材料與方法

    1.1 細(xì)胞培養(yǎng) 從胎鼠心臟分離心肌細(xì)胞[7]。迅速將離體心臟剪碎、消化和漂洗。心肌細(xì)胞以1.0×106/ml的濃度溶于含10%胎牛血清(FBS)、1%青霉素(100 U/ml),1%鏈霉素(100 μg/ml)的DMEM液中。在5%CO2高濕度的37℃恒溫培養(yǎng)箱里培養(yǎng)4 d。

    1.2 實驗分組 將培養(yǎng)細(xì)胞分為如下4組:(1)對照組,只加入含15%FBS的DMEM-F12培養(yǎng)基;(2)H2O2不同濃度組,加入無血清DMEM培養(yǎng)基,加入過氧化氫濃度分別為低100 μmol/L、中200 μmol/L、高500 μmol/L;(3)H2O2+NAC組,先以NAC(200 μmol/L)預(yù)處理心肌細(xì)胞30 min,后加入H2O2(200 μmol/L)共同孵育24 h;(4)H2O2+HMGB1抗體組,用HMGB1抗體16(IBL,德國,20 μg/ml)預(yù)處理心肌細(xì)胞30 min,后加入H2O2(200 μmol/L)共同孵育24 h。

    1.3 測定項目 (1)細(xì)胞活性:心肌細(xì)胞接種于96孔板,調(diào)整濃度至1×105/ml培養(yǎng)4 d后,用細(xì)胞計數(shù)試劑盒(CCK-8,Dojindo,日本)測定細(xì)胞活性。按照試劑盒說明規(guī)范操作。選擇波長490 nm,在酶聯(lián)免疫檢測儀上測定各孔光吸收值。細(xì)胞活性以測試組平均吸光度值/對照組平均吸光度值×100%表示。(2)酶類氧化指標(biāo)測定:乳酸脫氫酶(LDH)和肌酸激酶(CK),測定細(xì)胞培養(yǎng)液中LDH和CK的含量反映細(xì)胞損傷程度。選用南京建成生物實驗研究所的LDH和CK的ELISA試劑盒,根據(jù)說明規(guī)范操作。測定超氧化物歧化酶(SOD)活性和丙二醛(MDA)表達(dá),反映了氧化應(yīng)激損傷的程度。選用南京建成生物實驗研究所的試劑盒測定,根據(jù)說明規(guī)范操作。(3)免疫印跡法測定HMGB1的表達(dá)量:按文獻(xiàn)[8]方法測定培養(yǎng)細(xì)胞中HMGB1的表達(dá)量,以HMGB1與GADPH的比值反映HMGB1的表達(dá)量。(4)流式細(xì)胞儀測定細(xì)胞凋亡: 流式細(xì)胞儀Annexin V/PI雙染法檢測細(xì)胞凋亡。分離培養(yǎng)的細(xì)胞,PBS漂洗后懸浮于500 μl結(jié)合緩沖液,然后加入5 μl的Annexin V和5μl的PI,流式細(xì)胞儀檢測,Annexin V為藍(lán)色熒光,PI為紅色熒光。

    1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用SPSS 21.0軟件對數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計分析。計量資料以均值±標(biāo)準(zhǔn)差表示,組間比較用t檢驗,多組間采用單因素方差分析或Welch檢測,組間兩兩比較用Dunnett T3檢測。以P<0.05為差異有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié) 果

    2.1 細(xì)胞活性 與對照組比較,隨著H2O2濃度的增加心肌細(xì)胞活性降低(t=-5.81、-9.59、-14.21,P均<0.05);NAC和HMGB1抗體可以明顯減弱H2O2(200 μmol/L)對細(xì)胞活性的抑制作用(t=-2.98,-3.03,P<均0.05);而NAC+ H2O2(200 μmol/L)和HMGB1抗體+ H2O2(200 μmol/L)組間無統(tǒng)計學(xué)差異(t=1.09,P>0.05)。見圖1。

    注:與對照組比較,aP<0.05;與H2O2(200 μmol/L)組比較,bP<0.05

    2.2 LDH、CK的表達(dá)水平及SOD、MDA表達(dá) 與對照組比較,隨著H2O2的濃度增加LDH和CK的表達(dá)量增加(tLDH=9.78、15.37、18.13,tCK=11.29、20.35、26.17,P均<0.05)。與H2O2(200 μmol/L)組比,NAC和HMGB1抗體可以抑制LDH和CK的表達(dá)(tLDH=-4.91、-4.22,tCK=-4.17、3.29,P均<0.05)。見圖2。

    MDA表達(dá)和SOD活性:H2O2(100、200、500 μmol/L)可以抑制心肌細(xì)胞SOD活性,增加MDA表達(dá)(tSOD=-4.16、-6.59、-10.76,tMDA=3.98、5.16、9.47,P均<0.05);與H2O2(200μmol/L)組比,NAC和HMGB1抗體可以拮抗H2O2對SOD和MDA的影響(tLDH=-4.91、-4.22,tCK=-4.17、3.29、P均<0.05),見圖3。

    2.3 HMGB1的表達(dá) 與對照組比較,H2O2(100、200、500 μmol/L)可明顯增加心肌中HMGB1的表達(dá)(t=12.94、21.08、25.81,P均<0.05),與H2O2(200 μmol/L)組比,NAC+ H2O2和HMGB1-Ab+ H2O2中HMGB1的表達(dá)明顯降低(t=-10.24、-8.09,P均<0.05)。見圖4。

    注:與對照組比較,aP<0.05;與H2O2(200 μmol/L)組比較,bP<0.05

    注:與對照組比較,aP<0.05;與H2O2(200 μmol/L)組比較,bP<0.05

    2.4 心肌凋亡 與對照組比較,H2O2組(100、200、500 μmol/L)心肌凋亡率明顯增加(χ2=7.52、13.06、16.61,P<0.05);NAC+ H2O2和HMGB1+ H2O2組心肌凋亡率較H2O2(200 μmol/L)組明顯增加(χ2=-4.89、-4.23,P<0.05)。見圖5。

    3 討 論

    本文發(fā)現(xiàn):(1)H2O2作為一種活性氧,可以抑制心肌細(xì)胞活性,增加LDH和CK的表達(dá),且呈劑量依賴性。同時,H2O2還可以抑制SOD活性,增加MDA表達(dá);(2)H2O2可以促進(jìn)HMGB1的表達(dá)和心肌細(xì)胞凋亡,且呈劑量依賴型;(3)NAC-NADPH氧化酶抑制劑,可以拮抗H2O2的作用,增加心肌細(xì)胞活性、抑制HMGB1表達(dá),以及減少心肌凋亡率,這就提示我們抗氧化劑在對抗ROS侵襲的過程中也許能夠通過抑制HMGB1的釋放來減輕心肌細(xì)胞的損傷;(4)HMGB1抗體可以通過抑制HMGB1表達(dá)保護(hù)心肌,可以減弱H2O2的細(xì)胞損傷和促凋亡作用。

    注:與對照組比較,aP<0.05;與H2O2(200 μmol/L)組比較,bP<0.05

    注:與對照組比較,aP<0.05;與H2O2(200 μmol/L)組比較,bP<0.05

    心肌缺血再灌注可以通過線粒體途徑以及激活中性粒細(xì)胞和巨噬細(xì)胞引起ROS過度產(chǎn)生,從而加重心肌I/R損傷,外源性活性氧(如H2O2)同內(nèi)源性ROS一樣可以加重心肌I/R損傷。有研究已證實,ROS引起細(xì)胞損傷主要與脂質(zhì)過氧化、促細(xì)胞凋亡和鈣超載有關(guān)[9],而鈣超載主要是由于脂質(zhì)過氧化引起生物膜破壞和肌漿網(wǎng)鈣泵功能破壞所致,故可理解為脂質(zhì)過氧化的繼發(fā)損害。脂質(zhì)過氧化可以引起細(xì)胞膜以及細(xì)胞器膜流動性改變,破壞膜酶和離子通道的微環(huán)境,損壞呼吸鏈,進(jìn)而導(dǎo)致細(xì)胞的損傷。SOD是內(nèi)源性抗氧化系統(tǒng)中關(guān)鍵酶,MDA是脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物,CK和LDH是心肌損傷標(biāo)記物,H2O2抑制SOD活性,增加MDA、CK和LDH的表達(dá),印證了脂質(zhì)過氧化損傷的結(jié)論,但同時本研究發(fā)現(xiàn),NAC和HMGB1抗體可一定程度地增加SOD活性,減少MDA、CK和LDH的表達(dá),即減弱H2O2的脂質(zhì)過氧化和心肌損傷作用。ROS可通過直接損傷細(xì)胞DNA、影響線粒體信號通路以及激活核因子κB(NF-κB)誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。本研究發(fā)現(xiàn),H2O2可明增加心肌細(xì)胞凋亡指數(shù),且呈劑量依賴型,而NAC和HMGB1抗體可降低心肌凋亡指數(shù),即減弱H2O2的促細(xì)胞凋亡作用。另外,本結(jié)果發(fā)現(xiàn)HMGB1表達(dá)量的增高程度與氧化應(yīng)激對心肌細(xì)胞的損傷程度呈正相關(guān)。有研究已證實,HMGB1作為促炎因子,可以促進(jìn)細(xì)胞凋亡和炎性反應(yīng)加重心肌缺血再灌注損傷,且呈劑量依賴型[10~12]。而HMGB1是一種非組織核蛋白,當(dāng)細(xì)胞壞死時被釋放出來,可進(jìn)一步加重炎性反應(yīng)和細(xì)胞凋亡。2002年Scaffidi等[5]證實,缺失了HMGB1壞死細(xì)胞將不能誘導(dǎo)促炎因子的釋放。這些結(jié)果均提示,由ROS誘導(dǎo)的損傷和壞死心肌細(xì)胞可以釋放HMGB1,而HMGB1可進(jìn)一步加重心肌細(xì)胞的炎性反應(yīng)和凋亡。由此可以推斷,HMGB1參與了H2O2引起的心肌損傷作用。

    HMGB1引起心肌缺血再灌注損傷的機(jī)制,目前主流研究認(rèn)為,HMGB1是一種新型的促炎因子,參與了心肌I/R損傷,同時還可以促進(jìn)其他炎性因子的表達(dá),如TNF-α、IL-6;當(dāng)抑制HMGB1的表達(dá)時,會減少TNF-α、IL-6的表達(dá)且減輕心肌I/R損傷[13]。近期Zhu等[10]的研究證實了HMGB1-TLR4-IL-23-IL-17A軸可以通過促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡、中性粒細(xì)胞聚集加重心肌I/R損傷。Xiong等[14]的研究證明抑制HMGB1的表達(dá)可以減輕心肌I/R損傷的結(jié)論。心肌細(xì)胞凋亡是心肌I/R損傷的一個重要的病理生理過程。Hu等[12]的研究進(jìn)一步證明,在心肌I/R中,HMGB1可以促進(jìn)心肌細(xì)胞凋亡,且呈劑量依賴性。

    研究發(fā)現(xiàn),ROS可以激活炎性反應(yīng)通路NF-κB、絲裂原活化蛋白激酶(MAPK)進(jìn)而調(diào)控下游炎性因子TNF-α、IL-6等誘導(dǎo)凋亡發(fā)生[6,15~17]。HMGB1既可以調(diào)控炎性因子TNF-α、IL-6的表達(dá),也參與了心肌細(xì)胞凋亡過程,這可能是HMGB1參與H2O2心肌損傷作用的機(jī)制,但具體機(jī)制仍待進(jìn)一步研究。

    ROS與HMGB1的關(guān)系前期已有相關(guān)研究。Marshall等[18]證實,H2O2可以誘導(dǎo)培養(yǎng)的胎鼠心肌細(xì)胞釋放HMGB1;米諾環(huán)素和丙酮酸乙酯可以通過抑制HMGB1表達(dá)減弱ROS對心肌I/R的損傷[19,20]。另外,在系統(tǒng)性紅斑狼瘡中ROS可以明顯增加細(xì)胞外HMGB1的活性進(jìn)而激活白細(xì)胞加重炎性反應(yīng)[21];在肺組織中,ROS可以誘導(dǎo)支氣管上皮細(xì)胞HMGB1的移位和釋放[22];而HMGB1抗體可明顯減弱ROS性引起的肺組織炎性反應(yīng)和急性肺損傷[23]。同時,本實驗發(fā)現(xiàn)抗氧化劑NAC可以抑制H2O2誘導(dǎo)的HMGB1高表達(dá),HMGB1抗體可以通過抑制HMGB1,減弱H2O2對心肌細(xì)胞損傷作用,進(jìn)一步印證了上述結(jié)論。

    綜上,我們可以推斷:H2O2可以通過上調(diào)HMGB1的表達(dá)增加心肌缺血再灌注損傷。但關(guān)于ROS對HMGB1的調(diào)控作用和促心肌損傷作用的具體機(jī)制仍需進(jìn)一步研究。本文為臨床上預(yù)防或減弱ROS導(dǎo)致的心肌損傷提供了新的思路。

    1 Tsutsui H,Kinugawa S,Matsushima S,et al.Oxidative stress and heart failure[J].Am J Physiol Heart Circ Physio,2011,301:H2181-2190.

    2 Peng YW,Buller CL, Charpie JR. Impact of N-acetylcysteine on neonatal cardiomyocyte ischemia-reperfusion injury[J]. Pediatr Res, 2011, 70(1):61-66.

    3 王繼春,胡笑容,謝菁,等.選擇性預(yù)激動β1腎上腺素受體對大鼠心肌缺血再灌注損傷中高遷移率族蛋白1表達(dá)的影響及其機(jī)制[J].中華心血管病雜志,2014,42(8):680-685.

    4 Hu X, Fu W, Jiang H. HMGB1: A potential therapeutic target for myocardial ischemia and repe rfusion injury[J]. Int J Cardiol, 2012, 155(3): 489-489

    5 Scaffidi P, Misteli T, Bianchi ME. Release of chromatin protein HMGB1 by necrotic cells triggers inflammation[J]. Nature, 2002, 418(6894):191-195.

    6 Tsung A, Klune JR, Zhang X, et al. HMGB1 release induced by liver ischemia involves toll-like receptor 4 dependent reactive oxygen species production and calcium-mediated signaling[J]. J Exp Med, 2007, 204(12): 2913-2923.

    7 Xu H, Yao Y, Su Z,et al. Endogenous HMGB1 contributes to ischemia/reperfusion induced myocardial apoptosis by potentiating the effect of TNF-α/JNK [J]. Am J Physiol Heart Circ Physiol, 2011, 300(3):H913-H921.

    8 Wang J, Yang X, Hu X, et al. Dobutamine-mediated heme oxygenase-1 induction via PI3K and p38 MAPK inhibits high mobility group box 1 protein release and attenuates rat myocardial ischemia/reperfusion injury in vivo[J]. J Sur Res,2013, 183(2):509-516.

    9 郭建,劉義,李延平,et al. 氧自由基與心肌缺血再灌注損傷. 中國心血管病雜志,2008,13(5):384-387.

    10 Zhu H, Li J, Wang S, et al. Hmgb1-TLR4-IL-23-IL-17A axis promote ischemia-reperfusion injury in a cardiac transplantation model [J]. Transplantation, 2013, 95(12):1448-1454.

    11 Zhang A, Mao X, Li L, et al. Necrostatin-1 inhibits Hmgb1-IL-23/IL-17 pathway and attenuates cardiac ischemia reperfusion injury [J]. Transpl Int, 2014, 27(10):1077-1085.

    12 Hu X,Zhou X,He B,et al.Minocycline protects against myocardial ischemia and reperfusion injury by inhibiting high mobility group box 1 protein in rats [J]. Eur J Pharmacol, 2010, 638(1-3):84-89.

    13 Andrassy M, Volz HC, Igwe JC, et al. High-mobility group box-1 in ischemia-reperfusion injury of the heart [J]. Circulation, 2008, 117(25):3216-3226.

    14 Xiong J,Yuan YJ,Xue FS,et al.Postconditioning with α7nAChR agonist attenuates systemic inflammatory response to myocardial ischemia-reperfusion injury in rats [J]. Inflammation, 2012, 35(4):1357-1364.

    15 Pchejetski D, Kunduzova O, Dayon A, et al.Oxidative stress-dependent sphingosine kinase-1 inhibition mediates monoamine oxidase A-associated cardiac cell apoptosis[J].Cir Res, 2007, 100(1):41-49.

    16 Son Y,Cheong YK,Kim NH,et al.Mitogen-activated protein kinases and reactive oxygen species: how can Ros activate MAPK pathways? [J]. J Signal Transduct,2011, 2011:792639.

    17 Yu D, Li M, Tian Y, et al. Luteolin inhibits ROS-activated MAPK pathway in myocardial ischemia/reperfusion injury[J]. Life Sci, 2015, 122:15-25.

    18 Marshall KD, Edwards MA, Krenz M, et al. Proteomic mapping of proteins released during necrosis and apoptosis from cultured neonatal cardiac myocytes [J]. Am J Physiol Cell Physiol, 2014, 306(7):C639-C647.

    19 Hu X, Cui B, Zhou X, et al. Ethyl pyruvate reduces myocardial ischemia and reperfusion injury by inhibiting high mobility group box 1 protein in rats [J]. Mol Biol Rep, 2012, 39(1): 227-231.

    20 Hu X, Zhou X, He B, et al. Minocycline protects against myocardial ischemia and reperfusion injury by inhibiting high mobility group box 1 protein in rats[J]. Eur J Pharmacol, 2010, 638(1-3): 84-89.

    21 Maugeri N,Rovere-Querini P,Baldini M,et al.Oxidative Stress Elicits Platelet/Leukocyte In ammatory Interactions via HMGB1: A Candidate for Microvessel Injury in Sytemic Sclerosis [J]. Antioxid Redox Signal, 2014, 20(7):1060-1074.

    22 侯長春,趙海金,李文軍,等.過氧化氫誘導(dǎo)支氣管上皮細(xì)胞高遷移率族蛋白1主動釋放[J].南方醫(yī)科大學(xué)學(xué)報,2012,32(8):1131-1134.

    23 Entezari M, Javdan M, Antoine DJ, et al. Inhibition of extracellular HMGB1 attenuates hyperoxia-induced inflammatory acute lung injury [J]. Redox Biol, 2014, 20(2):314-322.

    Hydrogen peroxide worsen myocardial injury via up regulating HMGB1 expression:an experimental study

    MARuisong*,LIYuanhong,ZHOUXiaoya,JIANGHong,HUXiaorong.DepartmentofCardiology,RenminHospitalofWuhanUniversity,Wuhan430060,China

    Correspondingauthor:LIYuanhong,E-mail:lyh0101@vip.163.com

    Objective To investigate the effect of hydrogen peroxide (H2O2) by high mobility group protein (HMGB1) mediated mechanism of myocardial injury.Methods Fetal rat myocardial cells cultured and divided into 4 groups: control group, H2O2different concentration group (100 μmol / L, 200 μmol / L, 500 μmol / L), H2O2(200 μmol / L) + N-acetylcysteine (NAC, 200 μmol / L) group, H2O2(200 μmol / L) +HMGB1 antibody (20 ug / ml) group. The activity of myocardial cells, apoptosis rate, lactate dehydrogenase (LDH), creatine kinase (CK), superoxide dismutase (SOD) activity and malondialdehyde (MDA) and HMGB1 expression were detected.Results (1) Cell activity: compared with the control group, myocardial cell activity along with the increase of H2O2concentration were decrease (t=-5.81,t=9.59,t=-14.21, allP<0.05); NAC and HMGB1 antibodies can be significantly reduced H2O2(200 umol / L) on the activity of cell inhibition (t=-2.98,t=-3.03,P<0.05). (2) The expression level of LDH and CK: compared with the control group, the expression of LDH and CK were increased along with the increase of the H2O2concentration (LDH,t=9.78,t=15.37,t=18.13. CK,t=11.29,t=20.35,t=26.17, allP<0.05). Compared with H2O2(200 umol / L) group, NAC and HMGB1 antibodies can inhibit LDH and CK expression (LDH,t=-4.91,t=-4.22, CK,t=-4.17,t=3.29, allP<0.05). (3) The expression of MDA and SOD activity: H2O2(100, 200, 500 umol / L) can inhibit the activity of SOD of myocardial cells, increase the expression of MDA (SOD,t=-4.16,t=-6.59,t=-10.76, MDA,t=3.98,t=5.16,t=9.47,P<0.05); H2O2(200 umol / L) group, NAC and HMGB1 antibodies can antagonize the H2O2on superoxide dismutase (SOD) and malondialdehyde (MDA) (LDH,t=-4.91,t=-4.22, CK,t=-4.17,t=3.29, allP<0.05). (4) The expression of HMGB1: compared with the control group, H2O2(100, 200, 500 umol / L) can be significantly increased myocardial HMGB1 expression (t=12.94,t=21.08,t=25.81,P<0.05), and compared with H2O2(200 umol / L) group, NAC + H2O2and HMGB1-Ab+ H2O2’s expression of HMGB1 were decreased significantly (t=-10.24,t=-8.09, allP<0.05). (5) myocardial apoptosis: compared with the control group, H2O2group’s (100, 200, 500 u mol / L) myocardial apoptosis rate increased significantly (t=7.52,t=13.06,t=16.61,P<0.05); NAC+ H2O2and HMGB1+ H2O2groups’ myocyte apoptosis rate were higher than that of H2O2group (200 umol / L) (t=-4.89,t= -4.23,P<0.05).Conclusion The response to oxidative stress induced by H2O2can up regulate the expression of HMGB1, myocardial injury.

    Hydrogen peroxide;Myocardial injury;Fetal rat

    國家自然科學(xué)基金資助課題(No.81370308)

    430060 武漢大學(xué)人民醫(yī)院心內(nèi)科(馬瑞松、周曉亞、江洪、胡笑容); 445000 恩施土家族苗族自治州中心醫(yī)院 心內(nèi)科(李元紅)

    李元紅,E-mail:lyh0101@vip.163.com

    10.3969 / j.issn.1671-6450.2015.06.001

    2015-02-14)

    猜你喜歡
    過氧化氫性反應(yīng)脂質(zhì)
    腸道菌群失調(diào)通過促進(jìn)炎性反應(yīng)影響頸動脈粥樣硬化的形成
    復(fù)方一枝蒿提取物固體脂質(zhì)納米粒的制備
    中成藥(2018年9期)2018-10-09 07:18:36
    白楊素固體脂質(zhì)納米粒的制備及其藥動學(xué)行為
    中成藥(2018年1期)2018-02-02 07:19:53
    馬錢子堿固體脂質(zhì)納米粒在小鼠體內(nèi)的組織分布
    中成藥(2017年4期)2017-05-17 06:09:26
    促?;鞍讓?T3-L1脂肪細(xì)胞炎性反應(yīng)的影響
    螞蟻會用過氧化氫治療感染
    川陳皮素固體脂質(zhì)納米粒的制備
    中成藥(2014年9期)2014-02-28 22:28:50
    HHX-VHP型隧道式過氧化氫滅菌箱
    HHX-VHP 型隧道式過氧化氫滅菌箱
    氯化銀-過氧化氫復(fù)合電極
    国产日韩欧美在线精品| 777米奇影视久久| 亚洲精品日韩av片在线观看| 91aial.com中文字幕在线观看| 国产成人一区二区在线| 青春草视频在线免费观看| 国产91av在线免费观看| 在线亚洲精品国产二区图片欧美 | 免费不卡的大黄色大毛片视频在线观看| 99视频精品全部免费 在线| 久久精品国产亚洲av涩爱| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 国产探花在线观看一区二区| 欧美潮喷喷水| 国产69精品久久久久777片| 极品教师在线视频| 成年av动漫网址| 麻豆精品久久久久久蜜桃| 久久精品久久久久久久性| 三级国产精品片| 亚洲久久久久久中文字幕| 蜜桃久久精品国产亚洲av| 人妻一区二区av| 男女啪啪激烈高潮av片| 亚洲精品国产色婷婷电影| 在线 av 中文字幕| 可以在线观看毛片的网站| 肉色欧美久久久久久久蜜桃 | 丝袜喷水一区| 亚洲av日韩在线播放| 亚洲av.av天堂| 欧美成人a在线观看| 如何舔出高潮| 久久久久久久久久久免费av| www.色视频.com| 卡戴珊不雅视频在线播放| 国产精品一二三区在线看| 午夜视频国产福利| 国内少妇人妻偷人精品xxx网站| 我的女老师完整版在线观看| 精品久久久精品久久久| 国产一区有黄有色的免费视频| 大陆偷拍与自拍| 亚洲欧洲国产日韩| 久久午夜福利片| 熟妇人妻不卡中文字幕| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 久久精品国产a三级三级三级| 日韩成人伦理影院| 亚洲一区二区三区欧美精品 | 欧美人与善性xxx| 国产精品国产三级专区第一集| 国产一区二区亚洲精品在线观看| 国产中年淑女户外野战色| 欧美潮喷喷水| 国产精品偷伦视频观看了| 久久ye,这里只有精品| 久久久久国产精品人妻一区二区| 人妻一区二区av| av播播在线观看一区| av在线天堂中文字幕| 久久人人爽人人片av| 国产午夜精品一二区理论片| 只有这里有精品99| 久久人人爽av亚洲精品天堂 | 人人妻人人看人人澡| 久久热精品热| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 亚洲精品成人av观看孕妇| 小蜜桃在线观看免费完整版高清| 精品人妻偷拍中文字幕| 国产视频首页在线观看| 国产69精品久久久久777片| 久久久久久久久久成人| 深夜a级毛片| 搡老乐熟女国产| 99久国产av精品国产电影| 尤物成人国产欧美一区二区三区| 全区人妻精品视频| 久久久久久伊人网av| 欧美xxxx黑人xx丫x性爽| 国产在线一区二区三区精| 国产白丝娇喘喷水9色精品| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 国产成人免费无遮挡视频| 狠狠精品人妻久久久久久综合| 成人免费观看视频高清| 高清日韩中文字幕在线| 五月天丁香电影| 99久久精品一区二区三区| 22中文网久久字幕| 一级毛片久久久久久久久女| 特大巨黑吊av在线直播| 日本免费在线观看一区| 一边亲一边摸免费视频| 久久久久性生活片| 人妻制服诱惑在线中文字幕| 成人国产麻豆网| 精品久久久久久久末码| 国产淫语在线视频| 国产亚洲5aaaaa淫片| 听说在线观看完整版免费高清| 又爽又黄无遮挡网站| 免费看光身美女| 3wmmmm亚洲av在线观看| 国产在视频线精品| av专区在线播放| 汤姆久久久久久久影院中文字幕| 少妇猛男粗大的猛烈进出视频 | 国产高清不卡午夜福利| 黄色欧美视频在线观看| 亚洲精品成人av观看孕妇| 色视频www国产| 99久国产av精品国产电影| 欧美xxxx性猛交bbbb| 日韩 亚洲 欧美在线| 精品一区二区三区视频在线| 91久久精品国产一区二区三区| 国产亚洲最大av| 丰满乱子伦码专区| 亚洲精品久久午夜乱码| 国语对白做爰xxxⅹ性视频网站| 丝袜喷水一区| 天天躁夜夜躁狠狠久久av| 日本猛色少妇xxxxx猛交久久| 人妻少妇偷人精品九色| 欧美人与善性xxx| 黄片wwwwww| 观看美女的网站| 久久精品国产亚洲网站| 亚洲性久久影院| 黄片wwwwww| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 国产精品一区www在线观看| 亚洲av成人精品一区久久| 内射极品少妇av片p| 精品人妻视频免费看| 综合色丁香网| 晚上一个人看的免费电影| 不卡视频在线观看欧美| 日本wwww免费看| 免费观看无遮挡的男女| 99久久人妻综合| 久久女婷五月综合色啪小说 | 国产淫片久久久久久久久| 在线观看人妻少妇| av网站免费在线观看视频| 国产男女内射视频| 国产视频内射| 成人高潮视频无遮挡免费网站| 精品久久久久久久久亚洲| 久久99热这里只频精品6学生| 成年免费大片在线观看| 亚洲欧美日韩东京热| 免费高清在线观看视频在线观看| 欧美性猛交╳xxx乱大交人| 99热6这里只有精品| 成人午夜精彩视频在线观看| 五月伊人婷婷丁香| 插阴视频在线观看视频| tube8黄色片| 寂寞人妻少妇视频99o| 久久久成人免费电影| 能在线免费看毛片的网站| 亚洲精品国产av蜜桃| 看免费成人av毛片| www.色视频.com| 2021少妇久久久久久久久久久| av专区在线播放| 国产精品福利在线免费观看| 男插女下体视频免费在线播放| 欧美变态另类bdsm刘玥| 精品国产乱码久久久久久小说| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 久久久久久久亚洲中文字幕| 男女啪啪激烈高潮av片| 亚洲精品国产成人久久av| 久久久久性生活片| 国产精品一区二区在线观看99| 日产精品乱码卡一卡2卡三| 亚洲欧洲国产日韩| 一级片'在线观看视频| 国产精品久久久久久av不卡| 春色校园在线视频观看| 国产综合懂色| 午夜激情福利司机影院| 女人被狂操c到高潮| 国产精品伦人一区二区| 免费看av在线观看网站| 免费av观看视频| 纵有疾风起免费观看全集完整版| 91久久精品国产一区二区三区| 美女高潮的动态| 亚洲精品一二三| 夫妻性生交免费视频一级片| 国产极品天堂在线| 国产亚洲91精品色在线| 六月丁香七月| 国产久久久一区二区三区| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 又爽又黄无遮挡网站| 99久久精品一区二区三区| 成人免费观看视频高清| 日韩伦理黄色片| 18禁在线无遮挡免费观看视频| 久久人人爽人人片av| 国产午夜精品一二区理论片| 国产成人精品久久久久久| 精品国产三级普通话版| 青青草视频在线视频观看| 韩国av在线不卡| 97超碰精品成人国产| 街头女战士在线观看网站| 在线观看美女被高潮喷水网站| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 久久精品熟女亚洲av麻豆精品| 成人毛片a级毛片在线播放| 美女国产视频在线观看| 国产精品熟女久久久久浪| 亚洲三级黄色毛片| 国产成人一区二区在线| 亚洲熟女精品中文字幕| 亚洲色图综合在线观看| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 午夜精品国产一区二区电影 | 欧美精品人与动牲交sv欧美| 看非洲黑人一级黄片| av卡一久久| 久久精品国产a三级三级三级| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 久久久久久九九精品二区国产| 少妇丰满av| 一个人观看的视频www高清免费观看| 欧美日韩亚洲高清精品| 日韩国内少妇激情av| 午夜福利网站1000一区二区三区| 自拍偷自拍亚洲精品老妇| 日韩欧美精品v在线| 狂野欧美激情性xxxx在线观看| 日本-黄色视频高清免费观看| 在线a可以看的网站| 亚洲精品自拍成人| 亚洲国产av新网站| 夫妻午夜视频| 久久99热这里只频精品6学生| 国产成人aa在线观看| 丝袜喷水一区| 亚洲人成网站在线观看播放| 夫妻性生交免费视频一级片| 欧美亚洲 丝袜 人妻 在线| 97超视频在线观看视频| 久久国内精品自在自线图片| 特大巨黑吊av在线直播| av在线亚洲专区| 国产高潮美女av| 久久久精品欧美日韩精品| 热99国产精品久久久久久7| 亚洲av免费高清在线观看| 国产69精品久久久久777片| 日韩欧美一区视频在线观看 | 国产精品熟女久久久久浪| 少妇人妻精品综合一区二区| 国产爽快片一区二区三区| 男女无遮挡免费网站观看| 欧美激情国产日韩精品一区| 成人毛片60女人毛片免费| 一本—道久久a久久精品蜜桃钙片 精品乱码久久久久久99久播 | 国产白丝娇喘喷水9色精品| 2018国产大陆天天弄谢| 亚洲图色成人| 国产精品成人在线| 色婷婷久久久亚洲欧美| 国产精品一区二区在线观看99| 舔av片在线| 国产色爽女视频免费观看| 国产一区二区三区av在线| 男人和女人高潮做爰伦理| 国产探花极品一区二区| 激情 狠狠 欧美| 国产亚洲av片在线观看秒播厂| 国产亚洲5aaaaa淫片| 亚洲av免费高清在线观看| 日本熟妇午夜| 一级毛片久久久久久久久女| 赤兔流量卡办理| av免费在线看不卡| 蜜桃亚洲精品一区二区三区| 亚洲精品亚洲一区二区| 成人无遮挡网站| 亚洲国产精品999| 久久人人爽人人爽人人片va| 真实男女啪啪啪动态图| 视频区图区小说| 精品人妻熟女av久视频| 欧美区成人在线视频| 国产高清有码在线观看视频| 久久亚洲国产成人精品v| 国产精品一及| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 嘟嘟电影网在线观看| 三级国产精品欧美在线观看| 丝袜美腿在线中文| 久久亚洲国产成人精品v| 亚洲精品乱久久久久久| 精品人妻一区二区三区麻豆| 亚洲欧美成人综合另类久久久| 少妇熟女欧美另类| 日韩一本色道免费dvd| 亚洲精品影视一区二区三区av| 亚洲,欧美,日韩| 综合色av麻豆| 国产色婷婷99| 亚洲国产精品专区欧美| 欧美高清性xxxxhd video| 午夜福利在线在线| 久久人人爽人人片av| 精品熟女少妇av免费看| 插阴视频在线观看视频| 国产男女超爽视频在线观看| 青春草亚洲视频在线观看| 女的被弄到高潮叫床怎么办| 国产高清不卡午夜福利| 国产精品av视频在线免费观看| 日日摸夜夜添夜夜爱| 香蕉精品网在线| 男女边摸边吃奶| 国产亚洲精品久久久com| 精品酒店卫生间| 亚洲av一区综合| 美女被艹到高潮喷水动态| 大码成人一级视频| 国产综合懂色| 国产精品久久久久久精品电影| 干丝袜人妻中文字幕| 亚洲精品亚洲一区二区| 国产人妻一区二区三区在| 精品国产一区二区三区久久久樱花 | 免费看a级黄色片| 熟女人妻精品中文字幕| 永久免费av网站大全| 日韩欧美精品免费久久| 国产黄片美女视频| 欧美成人一区二区免费高清观看| 看免费成人av毛片| 黄色怎么调成土黄色| 国产伦在线观看视频一区| 成人特级av手机在线观看| 亚洲人成网站高清观看| 亚洲精品色激情综合| av线在线观看网站| 九九久久精品国产亚洲av麻豆| 一级av片app| 22中文网久久字幕| 麻豆成人午夜福利视频| 亚洲av日韩在线播放| 大香蕉97超碰在线| 制服丝袜香蕉在线| 99久久精品国产国产毛片| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 午夜福利视频精品| 人人妻人人澡人人爽人人夜夜| 久久6这里有精品| 看免费成人av毛片| 亚洲aⅴ乱码一区二区在线播放| 国产毛片在线视频| 91久久精品国产一区二区三区| 欧美变态另类bdsm刘玥| 久久久久久久午夜电影| 99久久精品一区二区三区| 大片电影免费在线观看免费| 久久这里有精品视频免费| 亚洲自偷自拍三级| 成人美女网站在线观看视频| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 香蕉精品网在线| 亚洲欧美日韩无卡精品| 中文字幕免费在线视频6| 免费看a级黄色片| 久久精品国产亚洲网站| 国产精品成人在线| 欧美 日韩 精品 国产| 国产精品国产三级专区第一集| 熟女人妻精品中文字幕| 神马国产精品三级电影在线观看| 超碰97精品在线观看| 2022亚洲国产成人精品| 少妇 在线观看| 欧美精品人与动牲交sv欧美| 免费在线观看成人毛片| av在线观看视频网站免费| 丝袜脚勾引网站| 成人毛片a级毛片在线播放| 亚洲成人久久爱视频| 成年女人看的毛片在线观看| 久热这里只有精品99| 美女主播在线视频| 美女视频免费永久观看网站| 哪个播放器可以免费观看大片| 免费黄色在线免费观看| 日日啪夜夜撸| 热re99久久精品国产66热6| 亚洲精品久久久久久婷婷小说| 亚洲欧美一区二区三区国产| 亚洲欧美精品专区久久| 欧美日韩亚洲高清精品| 欧美bdsm另类| 九九爱精品视频在线观看| 26uuu在线亚洲综合色| 极品教师在线视频| 精品国产乱码久久久久久小说| 亚洲美女搞黄在线观看| 日韩制服骚丝袜av| 乱码一卡2卡4卡精品| av又黄又爽大尺度在线免费看| 新久久久久国产一级毛片| 精品久久久久久电影网| 亚洲国产精品国产精品| 一级毛片 在线播放| 丝袜喷水一区| 亚洲av福利一区| 欧美一级a爱片免费观看看| 啦啦啦在线观看免费高清www| 成人综合一区亚洲| 综合色av麻豆| 精品少妇黑人巨大在线播放| 欧美激情在线99| 色网站视频免费| 亚洲国产最新在线播放| 国产有黄有色有爽视频| 国产成人aa在线观看| 男人舔奶头视频| 少妇熟女欧美另类| 久久国产乱子免费精品| 高清毛片免费看| 99久久精品热视频| 观看免费一级毛片| 亚洲av福利一区| 亚洲三级黄色毛片| 久久精品综合一区二区三区| 国产成人一区二区在线| 六月丁香七月| 国产成人精品久久久久久| 亚洲国产精品成人久久小说| 日韩av不卡免费在线播放| 午夜激情福利司机影院| 一级二级三级毛片免费看| 免费av观看视频| 观看美女的网站| h日本视频在线播放| 亚洲高清免费不卡视频| 美女脱内裤让男人舔精品视频| 免费观看的影片在线观看| 国产免费福利视频在线观看| 午夜激情福利司机影院| 97人妻精品一区二区三区麻豆| 亚洲不卡免费看| 免费av毛片视频| 丝袜喷水一区| 夫妻午夜视频| 内射极品少妇av片p| 国产高清有码在线观看视频| 亚洲成人av在线免费| 成年人午夜在线观看视频| 欧美精品一区二区大全| 又爽又黄无遮挡网站| 国内揄拍国产精品人妻在线| 涩涩av久久男人的天堂| 麻豆国产97在线/欧美| 少妇的逼水好多| 视频中文字幕在线观看| 一个人看的www免费观看视频| 2021少妇久久久久久久久久久| av网站免费在线观看视频| 国产69精品久久久久777片| 26uuu在线亚洲综合色| 免费黄频网站在线观看国产| 九色成人免费人妻av| 91狼人影院| 日日摸夜夜添夜夜爱| 免费观看在线日韩| 国产精品99久久99久久久不卡 | 日本黄色片子视频| 2021天堂中文幕一二区在线观| 中文字幕亚洲精品专区| 国产精品久久久久久精品电影| 精品视频人人做人人爽| 青春草亚洲视频在线观看| 免费大片黄手机在线观看| 亚洲综合精品二区| 亚洲精品亚洲一区二区| 欧美 日韩 精品 国产| 成人国产av品久久久| 成人亚洲欧美一区二区av| 久久久久九九精品影院| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 免费看日本二区| 国产精品久久久久久精品电影| 联通29元200g的流量卡| 国产免费一区二区三区四区乱码| 熟女av电影| 少妇人妻 视频| 激情五月婷婷亚洲| 中文在线观看免费www的网站| 少妇被粗大猛烈的视频| 极品教师在线视频| 欧美最新免费一区二区三区| 天美传媒精品一区二区| 久久精品国产亚洲av涩爱| 校园人妻丝袜中文字幕| 内射极品少妇av片p| 欧美激情在线99| 网址你懂的国产日韩在线| 69人妻影院| 看免费成人av毛片| av在线播放精品| 欧美激情久久久久久爽电影| 欧美日韩视频高清一区二区三区二| 欧美+日韩+精品| 国产黄片视频在线免费观看| 91精品一卡2卡3卡4卡| 一区二区三区四区激情视频| 天天一区二区日本电影三级| 一二三四中文在线观看免费高清| 女人久久www免费人成看片| 在线观看免费高清a一片| 白带黄色成豆腐渣| 国产免费一区二区三区四区乱码| 国产一区二区三区综合在线观看 | 免费看不卡的av| 久久99热这里只频精品6学生| 插逼视频在线观看| 少妇人妻精品综合一区二区| 少妇人妻 视频| 亚洲丝袜综合中文字幕| 69人妻影院| 日本-黄色视频高清免费观看| 三级国产精品片| 七月丁香在线播放| 赤兔流量卡办理| 色播亚洲综合网| 国产女主播在线喷水免费视频网站| 免费看av在线观看网站| 97超视频在线观看视频| 尾随美女入室| 春色校园在线视频观看| 国产精品偷伦视频观看了| 高清毛片免费看| 精品一区在线观看国产| 久久女婷五月综合色啪小说 | 你懂的网址亚洲精品在线观看| 黄色视频在线播放观看不卡| 亚洲成人中文字幕在线播放| 精品久久久噜噜| 深爱激情五月婷婷| 亚洲欧美精品自产自拍| 亚洲精品456在线播放app| 啦啦啦在线观看免费高清www| 亚洲在久久综合| 2021少妇久久久久久久久久久| 国产精品成人在线| 成人美女网站在线观看视频| 日本av手机在线免费观看| 麻豆久久精品国产亚洲av| 美女高潮的动态| 亚洲怡红院男人天堂| kizo精华| av国产久精品久网站免费入址| 精品人妻偷拍中文字幕| 国产在线一区二区三区精| av一本久久久久| 国产高清不卡午夜福利| 久久精品久久久久久久性| 国产精品国产三级国产av玫瑰| 亚洲无线观看免费| 日韩亚洲欧美综合| 精品人妻视频免费看| 午夜精品一区二区三区免费看| 国精品久久久久久国模美| 亚洲精品aⅴ在线观看| 高清毛片免费看| 精品一区在线观看国产| 色网站视频免费| 婷婷色av中文字幕| 自拍欧美九色日韩亚洲蝌蚪91 | 欧美潮喷喷水| 久久韩国三级中文字幕| 91午夜精品亚洲一区二区三区| 亚洲av在线观看美女高潮| 欧美少妇被猛烈插入视频| .国产精品久久| 青春草国产在线视频| 亚洲精品乱久久久久久| 欧美激情久久久久久爽电影| 熟女人妻精品中文字幕| 日韩制服骚丝袜av| 欧美激情国产日韩精品一区| 好男人在线观看高清免费视频| 久久国产乱子免费精品| 日韩欧美一区视频在线观看 | 国产亚洲午夜精品一区二区久久 | 国产老妇伦熟女老妇高清| 亚洲天堂av无毛| 黄色欧美视频在线观看| 性插视频无遮挡在线免费观看| 中文字幕av成人在线电影| 国产欧美日韩一区二区三区在线 | 久久鲁丝午夜福利片| 熟女人妻精品中文字幕| 99久久中文字幕三级久久日本| 欧美激情国产日韩精品一区| 精品人妻熟女av久视频| www.色视频.com| 欧美人与善性xxx| 日韩 亚洲 欧美在线| 日日撸夜夜添|