流式細胞儀檢測缺鐵性貧血患者淋巴細胞免疫表型的探討

楊紅 孟巖 王超

流式細胞儀檢測缺鐵性貧血患者淋巴細胞免疫表型的探討

楊紅 孟巖 王超

目的研究缺鐵性貧血(IDA)患者外周血淋巴細胞免疫表型的變化。方法30例缺鐵性貧血患者(IDA組)和30例健康體檢者(正常對照組), 均應用流式細胞儀三色直接免疫熒光法檢測淋巴細胞免疫表型。對兩組外周血淋巴細胞免疫表型進行比較。結果IDA組外周血中CD3+、CD3+CD4+及CD+/CD+比值顯著低于正常對照組(P＜0.01), CD+CD+值高于正常對照組(P＜0.05)。結論 缺鐵性貧血患者影響機體T細胞的增殖分化, 導致細胞免疫功能障礙和免疫調(diào)節(jié)機制紊亂。

缺鐵性貧血；淋巴細胞免疫表型； 流式細胞儀；骨髓細胞學檢查

缺鐵性貧血是因機體鐵的需要量增加和鐵吸收減少, 使體內(nèi)儲存鐵耗盡而缺乏, 又未得到足夠的補充, 導致合成血紅蛋白的鐵不足而引起的貧血［1］。是人類最常見的慢性疾病之一。淋巴細胞免疫表型是了解機體免疫系統(tǒng)功能的狀態(tài)。在正常機體內(nèi)各淋巴細胞亞群的相互作用, 維護著機體正常的免疫功能, 當淋巴細胞亞群的數(shù)量和功能發(fā)生異常時, 都可導致機體免疫功能紊亂并發(fā)生一系列的病理變化［2］。淋巴細胞免疫表型的分析對一些疾病的診斷、治療、免疫功能重建、器官移植監(jiān)測等有重要的臨床意義［3］。流式細胞儀檢測缺鐵性貧血與淋巴細胞免疫表型的關系, 國內(nèi)外報道較少?，F(xiàn)將本院2012年1月～2014年12月收治的30例IDA患者進行了外周血淋巴細胞免疫表型(CD+、CD+CD+、CD+CD+33438及CD4+/CD8+)的檢測, 并與正常人對照?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 30例IDA患者作為IDA組, 男5例, 女25例,年齡23～81歲, 中位年齡46.5歲。血紅蛋白48～92 g/L, 紅細胞(3.24～4.76)×1012/L, 網(wǎng)織紅細胞0.1%～1.0%, 外周血紅細胞呈小細胞低色素性改變。骨髓細胞學檢查示：骨髓增生明顯活躍-活躍, 粒/紅比值1.91～4.37, 紅系增生活躍, 以中晚幼紅細胞為主, 晚幼紅細胞核固縮明顯。成熟紅細胞大小不等,以小者居多, 中心淡染區(qū)明顯擴大。骨髓細胞鐵染色：外鐵(-),細胞內(nèi)鐵為0～13%, 骨髓報告：符合缺鐵性貧血骨髓象。血清鐵2.51～11.5 mol/L, 血清鐵蛋白3.15～12.4 ng/L。全部病例服用鐵劑治療有效。另選健康體檢者30例作為正常對照組,其中男10例, 女20例, 為血常規(guī)、血清鐵、鐵蛋白各項指標均在正常范圍內(nèi), 且無其他器質(zhì)性病變。兩組一般資料比較, 差異無統(tǒng)計學意義(P＞0.05), 具有可比性。

1.2 儀器與試劑 采用美國BD FACSCalibur流式細胞儀,三色標記McAb：CD3FITC/CD4PE/CD45PerCP、CD3FITC/CD8PE/ CD45PerCP、紅細胞裂解液、熒光校準微球 calibrate 3 Beads均購自美國BD公司。

1.3 方法

1.3.1 樣品的制備 各管分別加入CD3FITC/CD4PE/CD45PerCP、CD3FITC/CD8PE/CD45PerCP熒光抗體20 μl, 再分別加入新鮮EDTA-K3抗凝外周血100 μl, 混勻, 室溫避光孵育20 min, 加入 1∶9 配制的溶血素 2 ml, 避光 10 min。2000 r/min離心5 min, 倒掉上清液, 加入 PBS 緩沖液 2 ml, 2000 r/min 離心5 min。去上清, 加入500 μl PBS混勻待測。

1.3.2 流式細胞儀測定 以熒光微球calibrite 3-colour校準儀器補償、使儀器分辨率CV＜2%達到最佳工作狀態(tài), 采用MultiSET 軟件獲取數(shù)據(jù)。建立SSC/CD45Percp、CD4PE/CD3FITC、SSC/CD3FITC熒光點圖, 用CD45-PerCP/SSC-Gating和Back-Gating 細胞群雙圈門以排除碎片的干擾, 調(diào)節(jié) FSC、SSC、Detectors/Amps、Copensation, FL1-FL 2% 、FL2-FL 1%熒光補償, 每管獲取1.5萬個細胞, 建立CD+/CD+、CD+/CD+4383散點圖, Th(CD4+)和Ts(CD8+)的表達情況, 同時計算出 Th/Ts比值。

1.4 統(tǒng)計學方法 應用SPSS11.0統(tǒng)計學軟件對研究數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計分析。計量資料以均數(shù)±標準差(-x±s)表示, 采用t檢驗。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

IDA組外周血中CD3+、CD3

+CD4

+及CD4+/CD8

+比值顯著低于正常對照組(P＜0.01), CD3+CD8

+值高于正常對照組(P＜0.05)。見表1。

表1 IDA組與正常對照組淋巴細胞免疫表型的結果( x-±s, %)

3 討論

導致細胞免疫功能障礙和免疫調(diào)節(jié)機制紊亂［9］。

3.1 缺鐵性貧血是一種全球性疾病, 雖然隨著現(xiàn)代物質(zhì)生活條件的改善, 各種營養(yǎng)缺乏性疾病已大為減少, 但缺鐵性貧血仍然是人們所面臨的威脅健康的一大難題［3］。為了了解缺血性貧血對機體免疫系統(tǒng)功能的影響, 本試驗通過流式細胞儀三色免疫標記法觀察30例成人缺鐵性貧血外周血淋巴細胞免疫表型的變化, 總結出缺鐵性貧血主要影響機體的細胞免疫功能, 可引起細胞免疫功能障礙和免疫調(diào)節(jié)紊亂［4］。

3.2 淋巴細胞是免疫系統(tǒng)的重要組成部分, 在人體細胞免疫中發(fā)揮核心作用。T 細胞免疫主要通過T 細胞的增殖分化來實現(xiàn), 這是一個消耗能量、依賴核酸及蛋白質(zhì)合成的復雜過程［5］。CD3+CD4+T 細胞是輔助性/誘導性T淋巴細胞(Th細胞), 也是遲發(fā)性超敏反應的啟動者、促使B細胞產(chǎn)生抗體的輔助細胞、抑制性T淋巴細胞的誘導細胞；CD3+CD8+T 細胞是抑制性/細胞毒性T細胞(Ts細胞), 是細胞毒性T 細胞介導反應的效應細胞, 也是抑制B細胞產(chǎn)生抗體的抑制性細胞; 當CD4+/CD8+比值發(fā)生變化時, 可引起機體免疫功能降低［6］。從而影響淋巴細胞的增殖和分化, 使T淋巴細胞功能受損, 導致免疫功能低下和免疫調(diào)節(jié)紊亂［7］。

3.3 缺鐵性貧血可對多系統(tǒng)造成危害, 但對免疫功能的具體影響具有爭議。Salaman 等［8］認為, IDA 可影響人體整個免疫系統(tǒng), 使特異性和非特異性免疫功能均下降; 本研究從機體免疫功能角度出發(fā), 分析IDA 對人體免疫功能的影響, 結果發(fā)現(xiàn)IDA 患者CD3+、CD3+CD4+T細胞比例減少、CD3+CD8+T 細胞比例升高, 提示IDA影響T細胞的增殖分化,

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Investigation of flow cytometry in examination of lymphocyte immunophenotyping in iron-deficiency anemia patients

YANG Hong, MENG Yan, WANG Chao.Department of Inspection, Beijing Fengtai Hospital, Beijing 100070, China

Objective To research the changes of lymphocyte immunophenotyping in iron-deficiency anemia (IDA) patients.MethodsThere were 30 iron-deficiency anemia patients (IDA group) and 30 healthy people (normal control group), and they all received flow cytometry three-color direct immunofluorescent method for detection of lymphocyte immunophenotyping.Comparison was made on the peripheral blood lymphocyte immunophenotyping between the two groups.ResultsIDA group had much lower levels of CD3+、CD3+CD4+, and CD+/CD+ratio in peripheral blood than the normal control group (P＜0.01), and it also had higher CD+CD+4838value than the normal control group (P＜0.05).ConclusionIron-deficiency anemia may affect proliferation and differentiation of T lymphocyte, resulting in decreased immune functions and immune regulatory dysfunction.

Iron-deficiency anemia; Lymphocyte immunophenotyping; Flow cytometry; Marrow cytology examination

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.14.009

2015-01-27］

100070 北京豐臺醫(yī)院檢驗科(楊紅 孟巖), 血液科(王超)