胚胎角膜干細胞移植治療翼狀胬肉的遠期臨床觀察

鄭培新221124江蘇省徐州市銅山區(qū)大許中心衛(wèi)生院眼科

胚胎角膜干細胞移植治療翼狀胬肉的遠期臨床觀察

鄭培新
221124江蘇省徐州市銅山區(qū)大許中心衛(wèi)生院眼科

目的：探討胚胎角膜干細胞移植治療翼狀胬肉的遠期臨床效果。方法：收治翼狀胬肉患者100例(108眼)，隨機分成觀察組和對照組各50例(54眼)，對照組在顯微鏡下常規(guī)切除翼狀胬肉頭部，形成6mm×8mm大小的鞏膜裸露區(qū)。將結膜間斷固定于淺層鞏膜，暴露寬度3～4mm，術畢包扎，48 h后給予氧氟沙星眼液滴眼，第5天改用典必舒滴眼液滴眼，術后10 d拆線。觀察組在對照組的基礎上，在結膜間斷固定于淺層鞏膜時，將上述準備好的移植材料，平鋪于暴露鞏膜的創(chuàng)面上，縫合，剪除多余羊膜組織。術后治療與對照組相同。結果：觀察組50例(54眼)均未見上皮排斥線，術后3 d術區(qū)角膜上皮愈合，拆線后羊膜水腫消失，愈合率100.0％，經(jīng)過1～36個月的隨訪，復發(fā)1例，復發(fā)率1.9％，對照組50例(54眼)，45眼5～7 d術區(qū)角膜上皮愈合，愈合率83.3％(45/54)，經(jīng)過1～36個月的隨訪，復發(fā)20眼，復發(fā)率37％(20/54)。結論：胚胎角膜干細胞移植治療翼狀胬肉的復發(fā)率低，遠期療效好。

胚胎角膜干細胞移植；翼狀胬肉；遠期療效

翼狀胬肉是最為古老的眼病[1]。傳統(tǒng)的翼狀胬肉切除術術后復發(fā)率較高，隨著研究的不斷深入，胚胎角膜干細胞移植可以明顯降低復發(fā)率[2]。2012年11 月-2015年11月收治翼狀胬肉患者100例(108眼)，進行總結和分析，現(xiàn)報告如下。

資料與方法

2012年11月-2015年11月收治翼狀胬肉患者100例(108眼)，胬肉組織侵入角膜緣＞3.5mm，均無外傷、化學燒傷等病史，隨機分成觀察組和對照組各50例(54 眼)，其中觀察組男24例，女26例，年齡33～78歲，平均(57.8±8.9)歲，其中左眼20眼，右眼34眼。對照組男23例，女27例，年齡32～79歲，平均(57.8±9.0)歲，其中左眼21眼，右眼33眼。兩組患者一般資料比較，差異無統(tǒng)計學意義。

方法：①人胚胎角膜干細胞來源：首先選擇無梅毒、乙肝、丙肝、艾滋病等血液傳染病的剖宮產(chǎn)產(chǎn)婦的鈍性剝離羊膜和絨毛膜，用100μg/mL的鏈霉素和100 U/mL的青霉素的混合液洗滌3遍[3]，剪成25 mm×25 mm大小，加入等量DMEM與純甘油，-80℃貯存。使用前，在室溫下融化羊膜，在PBS中水化30 min[4]，再用0.25％胰蛋白酶+0.02％ EDTA消化1 h，然后用細胞刮刀刮除其上皮，再用PBS洗3遍，將上皮基底面向上平鋪于固定羊膜的培養(yǎng)板中備用。②組織材料的獲取和細胞培養(yǎng)：獲?。哼x擇自然流產(chǎn)的13周胚胎的新鮮角膜緣上皮，剪碎、消化、中止消化、離心后，在DMEM與F12培養(yǎng)基中加入適當濃度的促細胞生長成分，嚴格控制培養(yǎng)條件，進行體外培養(yǎng)和擴增角膜緣干細胞。將第3代細胞種植在已將羊膜上皮基底膜向上平鋪于培養(yǎng)皿中的羊膜上，繼續(xù)培養(yǎng)12～14 d后，進行BrdU標記細胞染色及免疫熒光染色，檢測p63、connexin43、keratin3、keratin12的表達情況。檢測結果顯示第三代培養(yǎng)細胞保存羊膜表面后仍可大量擴增、會聚、克隆生長而不分化，顯示干細胞的特性。鑒定后，將其作為移植材料。③方法：對照組在顯微鏡下常規(guī)切除翼狀胬肉頭部，形成6mm×8mm大小的鞏膜裸露區(qū)。將結膜間斷固定于淺層鞏膜，暴露寬3～4mm，術畢包扎，48 h后給予氧氟沙星眼液滴眼，第5天改用典必舒滴眼液滴眼，術后10 d拆線。觀察組在對照組的基礎上，在結膜間斷固定于淺層鞏膜時，將上述準備好的移植材料平鋪于暴露鞏膜創(chuàng)面上，縫合，剪除多余羊膜組織。術畢治療與對照組相同。

療效評定標準：以術后12～24個月復診結果為療效評判依據(jù)。①痊愈：結膜平整，無充血，角膜上皮愈合良好，表面光滑且基本透明，角膜及球結膜無新生血管和結膜下組織增生。②復發(fā)：結膜充血明顯，局部增殖肥厚，纖維血管增生組織侵入角膜緣內超過1mm。

結果

兩組患者治療效果及復發(fā)情況比較：觀察組50例患者(54眼)均未見上皮排斥線，術后3 d術區(qū)角膜上皮愈合，拆線后羊膜水腫消失，愈合率100.0％，經(jīng)過1～36個月的隨訪，復發(fā)1眼，復發(fā)率1.9％，對照組50例患者(54眼)有45眼5～7 d術區(qū)角膜上皮愈合，愈合率83.3％ (45/54)，經(jīng)過1～36個月的隨訪，復發(fā)20眼，復發(fā)率37.0％(20/54)，見表1。

討論

翼狀胬肉是最為古老的眼病，也是眼科常見病和多發(fā)病，其發(fā)病機制目前尚不明了。這種疾病不但會導致眼刺激征及外觀缺陷，而且還可以不同程度地影響視力，傳統(tǒng)的翼狀胬肉切除術術后復發(fā)率較高，術中應徹底切除病變組織和一定范圍內的正常結膜及結膜下組織，創(chuàng)面充分止血，減少羊膜下積血而引起植片溶解，脫落，導致復發(fā)。羊膜應平鋪，緊貼植床，間斷縫合，固定于淺層鞏膜上，大小合適，使結膜能遮蓋羊膜1～2mm，它不僅有利于羊膜載體上的胚胎角膜干細胞貼附和生長，還有利于正常表型的眼表上皮細胞增生。

表1 兩組患者治療效果及復發(fā)情況比較[n(％)]

本組資料采用胚胎角膜干細胞移植術進行治療，胚胎角膜干細胞來源于自然或藥物流產(chǎn)的胚胎眼球，羊膜是人體最厚的一層基底膜，利用羊膜可促進培養(yǎng)的角膜干細胞增生并抑制其分化，將這樣制作的胚胎角膜干細胞移植到患者眼部，術后不會發(fā)生免疫排斥反應，Donald等研究發(fā)現(xiàn)羊膜本身又具有抗纖維化、抗新生血管、抗感染及抗粘連作用[5]，是培養(yǎng)胚胎角膜干細胞的最佳培養(yǎng)基，Al-Fayez等研究發(fā)現(xiàn)胚胎角膜干細胞移植治療翼狀胬肉明顯降低了復發(fā)率[6]。

本組資料結果顯示：觀察組50例患者(54眼)均未見上皮排斥線，術后3 d術區(qū)角膜上皮愈合，拆線后羊膜水腫消失，愈合率100.0％，經(jīng)過1～36個月的隨訪，復發(fā)1例，復發(fā)率1.9％，對照組50例患者(54眼)有45眼5～7 d術區(qū)角膜上皮愈合，愈合率83.3％(45/54)，經(jīng)過1～36個月的隨訪，復發(fā)20眼，復發(fā)率370％(20/54)。由此可見，胚胎角膜干細胞移植治療翼狀胬肉復發(fā)率低，遠期療效好，值得推廣。

[1] Shimazaki J,Aia M,Goto E,etal.Transplantation of human limbal epi thelium cultivated on amniotic membrane for the treatment of severe ocular surface disorders[J].Ophthalmology,2012,109(7)：1285-1290.

[2] Tananuvat N,Martin T.the results of amniotic membrane transplantation for primary pterygium compared with conjunctival autograft [J].Cornea,2014,23(5)：458-463.

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Long term clinicalobservation ofembryonic cornealstem cell transp lantation in the treatmentof pterygium

Zheng Peixin
Ophthalmology Department,Daxu CenterHospitalofTongshan District,Xuzhou City,Jiangsu Province 221124

Objective：To explore the long term clinicalobservation ofembryonic cornealstem cell transplantation in the treatment ofpterygium.Methods：100 patients(108 eyes)with pterygium were selected,theywere random ly divided into the observation group and the control group with 50 cases(54 eyes),the control group was treated with conventional excision of pterygium under microscope,scleral exposed areawith 6mm×8mm was formed.Conjunctivawas fixed in shallow layer scleral discontinuity,the width ofexposurewas3 to 4mm,after surgery,thewound wasbandaged,48 hours later,the patientwasgiven levofloxacin eye drops, on the fifth day,the eye dropswere changed to Dianbishu eye drops,at10 days after operation,thewound can take out stitches.In the observation group,on the basis of the controlgroup,the preparedmaterialwas placed on thewound when conjunctivawas fixed in shallow layer scleral discontinuity,and then suture thewound,excessamniotic tissuewas cutoff.After surgery,the treatmentwas same as that of the control group.Results：In the observation group of 50 cases(54 eyes),theywas no epithelial rejection line,at3 days after surgery,cornealepithelium was healed,after suture removal,amnioticmembrane edemawas disappeared,the healing rate was 100％,after1 to 36monthsof follow-up,1 casewas recurred,the recurrence ratewas 1.9％,in the controlgroup of50 cases(54 eyes),at5 to 7 days later,the cornealepithelium of 45 eyeswas healed,the healing ratewas 83.3％(45/54),after 1 to 36months of follow-up,20 eyeswere recurrented,and the recurrence ratewas37％(20/54).Conclusion：The recurrence rate ofembryonic corneal stem cell transplantation in the treatmentofpterygium was low,and the long-term effectwasgood.

Embryonic cornealstem cell transplantation；Pterygium；Long term clinicalobservation

10.3969/j.issn.1007-614x.2015.36.35