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    再生障礙性貧血患者外周血CD55、CD59表達分析

    2015-06-01 12:25:27陳婷婷劉永林周郁鴻李曉芳陳益民
    浙江中西醫(yī)結(jié)合雜志 2015年11期
    關鍵詞:障礙性補體貧血

    張 麗 陳婷婷 劉永林 周郁鴻 李曉芳 陳益民

    再生障礙性貧血患者外周血CD55、CD59表達分析

    張 麗 陳婷婷 劉永林 周郁鴻 李曉芳 陳益民

    再生障礙性貧血;CD55;CD59;C3;C4;免疫球蛋白再生障礙性貧血(aplastic anemia,AA)是一種多原因引起的血液疾病,近年來T細胞免疫誘導的重要性在再障發(fā)病機制中逐漸被揭示[1-2],本課題前期亦證實AA患者外周血存在T細胞的異常活化[3-4]和調(diào)節(jié)性T細胞的異常[5],但體液免疫在AA發(fā)病機制的作用仍然存在爭論,因此我們通過檢測AA患者外周血粒、紅細胞表面CD55和CD59的表達和補體的變化,探討補體系統(tǒng)在AA發(fā)生過程中的作用。

    1 對象與方法

    1.1 研究對象 2010年7月—2012年9月在浙江省中醫(yī)院門診或住院就診AA患者81例,其中男40例,女41例,年齡5~77歲,中位年齡31歲,平均(33.7±20.6)歲;所有病例均為初次就診,診斷均參照文獻[6]。非AA組為浙江省中醫(yī)院體檢人群,共31名,其中男17名,女14名,年齡13~64歲,中位年齡33歲,平均(31.2±15.4)歲,外周血細胞計數(shù)排除AA和明顯感染。

    1.2 儀器與試劑 美國BD公司PE-anti-CD55鼠抗人單克隆抗體,PE-anti-CD59鼠抗人單克隆抗體單抗體、PC5-anti-CD19鼠抗人單克隆抗體、鼠抗人PE-anti-IgG1同型對照、鼠抗人PC5-anti-IgG1同型對照。美國Beckman公司IgG、IgA、IgM、C3、C4試劑。美國Beckman公司EPICS-XL流式細胞儀、Immage全自動特定蛋白儀。

    表1 兩組CD55、CD59表達與血清補體比較(±s)

    表1 兩組CD55、CD59表達與血清補體比較(±s)

    注:與非AA組比較,t=3.715、2.777、3.732、3.711、4.935、6.809,△P<0.05;AA:再生障礙性貧血

    組別非AA組AA組例數(shù)31 81紅細胞(%) 粒細胞(%)CD55 97.92±1.40 94.54±7.88△CD59 97.85±1.67 93.06±15.28△CD55 99.28±0.69 91.92±17.72△CD59 97.88±2.20 93.83±9.17△C3(g/L)1.03±0.26 0.86±0.11△C4(g/L)0.30±0.10 0.20±0.05△

    1.3 指標檢測 兩組均取外周血5mL,其中2mLEDTA-K2抗凝備用,3mL全血靜置15min后,2000rpm離心5min,取血清,全自動特定蛋白儀檢測IgG、IgA、IgM、C3、C4含量。取抗凝的外周血1μL,加入PBS緩沖液200μL稀釋,然后取3根試管,分別加入稀釋后紅細胞20μL和PE-anti-CD55抗體20μL、稀釋后紅細胞20μL和PE-anti-CD59抗體20μL、稀釋后紅細胞20μL和PE-anti-IgG1抗體,室溫孵育30min,加入PBS綬沖液1mL,上流式細胞儀分析。另取3根試管,分別加入全血100μL,再加入0.84%NH4Cl,室溫放置30min,加入PBS 5mL,1500rpm離心5min,棄上清,分別加入PE-anti-CD55、PE-anti-CD59、PE-anti-IgG1抗體,室溫孵育30min,加入PBS緩沖液1mL,上流式細胞儀分析。取2根試管,分別加入全血100μL,分別加入PC5-anti-CD19、PC5-anti-IgG1抗體,室溫孵育30min,再加入0.84%NH4Cl,室溫放置30min,加入PBS 5mL,1500rpm離心5min,棄上清,加入PBS緩沖液1mL,上流式細胞儀分析。

    表2 兩組外周血B細胞比例與免疫球蛋白IgG、IgA、IgM比較(±s)

    表2 兩組外周血B細胞比例與免疫球蛋白IgG、IgA、IgM比較(±s)

    注:AA:再生障礙性貧血

    非AA組AA組1.32±0.43 1.41±0.47 31 81 10.36±2.26 9.43±6.48 16.10±3.8 15.45±4.62 3.21±0.65 3.65±0.72

    2 結(jié)果

    2.1 兩組CD55、CD59表達與血清補體比較 與非AA比較,81例AA患者外周血紅、粒細胞CD55和CD59表達、血清補體含量顯著降低(P<0.05),見表1。

    2.2 兩組外周血B細胞比例與免疫球蛋白IgG、I-gA、IgM比較 與非AA組比較,AA患者外周血B細胞比例與免疫球蛋白IgG、IgA、IgM差異均無統(tǒng)計學意義(P>0.05),見表2。

    3 討論

    CD55又稱促衰變因子,廣泛分布在血細胞、黏膜上皮細胞和其他組織細胞表面,能與細胞表面瞬時形成的C3轉(zhuǎn)化酶裂解失活;CD59又稱膜反應性溶血抑制劑,廣泛分布于各個血細胞和組織細胞的表面,主要組織膜攻擊復合物的形成。CD55、CD59作為主要的膜結(jié)合調(diào)節(jié)蛋白,保護宿主正常細胞免遭補體活化介導的損傷[7]。造血干細胞存在PIG-A基因突變,可導致錨蛋白CD55、CD59表達缺失。文獻報道AA造血干細胞存在PIG-A突變和體液免疫異常[8]。因此本課題組檢測81例AA患者外周血紅、粒細胞CD55、CD59的表達,發(fā)現(xiàn)AA患者外周血中粒、紅細胞的CD55和CD59的表達較非AA組顯著下降,血清C3、C4濃度較正常組降低,結(jié)果與李玉云等[8]結(jié)果一致。推測由于再障患者免疫功能紊亂、造血微環(huán)境異常等,部分干細胞可發(fā)生PIG-A基因突變,使CD55、CD59表達減少,降低對補體活化的抑制,從而使補體活化增強,水平降低。當CD55、CD59降低一定程度,血細胞則會出現(xiàn)獲得性膜缺陷,發(fā)生溶血。AA患者CD55、CD59表達缺失和補體數(shù)量的異常提示補體系統(tǒng)在AA發(fā)生或病情進展過程中發(fā)揮重要的作用,檢測外周血CD55、CD59及補體C3、C4等可能有助于AA的發(fā)現(xiàn)和療效監(jiān)測。

    本研究發(fā)現(xiàn),AA患者B細胞數(shù)量及免疫球蛋白IgG、IgA、IgM并無顯著改變。提示抗體介導的體液免疫功能可能與再障發(fā)生、發(fā)展無關,抑或AA患者雖無數(shù)量的異常,但可能存在功能上的異常,這有待進一步研究證實。

    [1]Kook H,Risitano AM,ZengW,etal.Changes in T-cell VB-repertoire in aplastic anemia:effects of different immunosuppressive regimens[J].Blood,2002,99(10):3668-3675.

    [2]Maciejewski JP,Risitano A,Kook H,et al.Immune patho-physiology of aplastic anemia[J].Int J Hematol,2002,76(suppl 1):207-214.

    [3]劉永林,周郁鴻,陳益民,等.流式熒光雜交技術(shù)檢測再生障礙性貧血患者血清細胞因子[J].臨床檢驗雜志,2011,29(8):572.

    [4]朱琳超,劉永林,周郁鴻,等.流式細胞術(shù)檢測慢性再生障礙性貧血患者T細胞活化的研究[J].浙江中醫(yī)藥大學學報,2012,36(7):767-769.

    [5]劉永林,周郁鴻,陳益民,等.再生障礙性貧血患者外周血調(diào)節(jié)性T細胞γδT細胞表達分析[J].浙江中醫(yī)藥大學學報,2012,36(10):1077-1078.

    [6]張之南.血液病診斷及療效標準[M].第3版.北京:科學技術(shù)出版社,2007:19-21.

    [7]Ruiz-Argüelles A,Llorente L.The role of complement regu-Latory proteins(CD55 and CD59)in the pathogenesis of autoimmune hemocytopenias[J].Autoimmun Rev,2007,6(3):155-161.

    [8]李玉云,昝麗娜,王衛(wèi)國,等.再生障礙性貧血患者PIG-A基因外顯子2、4、5突變及粒細胞CD55、CD59的表達[J].癌變畸變突變,2009,21(4):254-257.

    (收稿:2015-03-05 修回:2015-04-20)

    浙江省中醫(yī)藥科技計劃項目(2013ZB045)

    浙江中醫(yī)藥大學第一臨床醫(yī)學院(杭州 310006)

    劉永林,13336165550

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