呼吸道感染患兒血清Toll樣受體9檢測(cè)及意義

方 麗陳培英童夏生王恩智

呼吸道感染患兒血清Toll樣受體9檢測(cè)及意義

方 麗1陳培英1童夏生2王恩智3

兒童；呼吸道感染；模式識(shí)別受體；Toll樣受體9

模式識(shí)別受體能有效識(shí)別一些病原體中高度保守結(jié)構(gòu)，并能產(chǎn)生相應(yīng)的免疫反應(yīng)，在機(jī)體清除病原體的過(guò)程中起著重要的作用。Toll樣受體（toll like receptor，TLR）是固有免疫細(xì)胞膜上最重要的模式識(shí)別受體，是在識(shí)別病原體過(guò)程中進(jìn)化而來(lái)的保守受體復(fù)合物，每一種亞型因不同系列的病原體相關(guān)分子結(jié)構(gòu)而被識(shí)別，表達(dá)于多種免疫細(xì)胞，受病原體入侵影響后，TLR誘導(dǎo)機(jī)體產(chǎn)生免疫反應(yīng)，涉及到Thl/ Th2失衡，并傾向于Thl反應(yīng)[1]。目前研究發(fā)現(xiàn)，TLR參與了呼吸道感染的炎癥機(jī)制，我們先前的研究也發(fā)現(xiàn)TLR2與呼吸道感染相關(guān)[2]。本研究通過(guò)觀察呼吸道感染患兒血清TLR9的表達(dá)水平變化，旨在探討TLR9在呼吸道感染發(fā)病機(jī)制中的作用，為臨床治療提供理論依據(jù)。

1 資料與方法

1.1 臨床資料 2013年11月—2014年9月本院住院患兒90例，急性上呼吸道感染組30例，男15例，女15例，年齡0.5～6.3歲，平均2.8歲；毛細(xì)支氣管炎組30例，男16例，女14例，年齡0.6～4.1歲，平均2.0歲；肺炎組30例，年齡男18例，女12例，年齡0.5～4.2歲，平均2.5歲；健康對(duì)照組30名來(lái)自門(mén)診健康體檢者，男18名，女12名，年齡0.6～5.2歲，平均2.5歲。各組性別、年齡差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。急性上呼吸道感染組入選標(biāo)準(zhǔn)[3]：病程＜2天，體溫≥38.5℃，臨床表現(xiàn)為發(fā)熱、咳嗽、流涕。毛細(xì)支氣管炎組入選標(biāo)準(zhǔn)[3]：病程＜3天，臨床表現(xiàn)為咳嗽、喘息、氣促、發(fā)熱，肺部可聞及喘鳴音，X線胸片呈支氣管周?chē)渍飨?。肺炎組入選標(biāo)準(zhǔn)[3]：病程＜3天，臨床表現(xiàn)為咳嗽、氣促、發(fā)熱，肺部可聞及痰嗚音和細(xì)小濕性啰音，X線胸片呈片狀陰影。三組患兒均無(wú)其他伴發(fā)疾病。

1.2 試劑和方法 采集患兒入院當(dāng)時(shí)和恢復(fù)期靜脈血，各2mL，離心（3000轉(zhuǎn)/10min）后取血清置于-80℃冰箱中，集中檢測(cè)。TLR9試劑盒購(gòu)自上海研吉生物科技有限公司（批號(hào)201311），酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA）法檢測(cè)血清TLR9蛋白濃度。

1.3 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 應(yīng)用SPSS16.0統(tǒng)計(jì)軟件，數(shù)據(jù)以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差（±s） 表示，各組間均數(shù)比較采用方差分析，方差齊性者采用LSD法，方差不齊者采用Tamhane’s T2檢驗(yàn)，組內(nèi)治療前、后比較采用配對(duì)資料的t檢驗(yàn)，P＜0.05為差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié) 果

治療前血清TLR9蛋白濃度肺炎組＞急性上呼吸道感染組、毛細(xì)支氣管炎組＞健康對(duì)照組（P均＜0.01）；急性上呼吸道感染組、毛細(xì)支氣管炎組間差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。治療后急性上呼吸道感染組、毛細(xì)支氣管炎組、肺炎組血清TLR9蛋白濃度均顯著低于治療前（P均＜0.01），且均顯著高于健康對(duì)照組（P均＜0.01），見(jiàn)表1。

表1 血清TLR9蛋白濃度（ng/mL，±s）

表1 血清TLR9蛋白濃度（ng/mL，±s）

注：與健康對(duì)照組比較，▲P＜0.01；與急性上呼吸道感染組、毛細(xì)支氣管炎組比較，*P＜0.01；與治療前比較，△P＜0.01

組別健康對(duì)照組急性上呼吸道感染組毛細(xì)支氣管炎組肺炎組例數(shù)30 30 30 30治療前5.8±2.1 10.9±3.1▲13.5±4.1▲20.9±6.7▲*治療后 7.8±2.5△▲11.6±2.9△▲16.8±4.3△▲

3 討論

天然免疫系統(tǒng)通過(guò)模式識(shí)別受體識(shí)別入侵機(jī)體的病原體，在這些模式識(shí)別受體中，已顯示出TLR3、7/8、9和RIG樣受體具有識(shí)別病毒的功能[4]。TLR9是一種表達(dá)于細(xì)胞膜的膜結(jié)合受體，屬于Ⅰ型跨膜蛋白，廣泛表達(dá)于多種細(xì)胞，具有重要的生理和病理作用，參與感染、免疫等的發(fā)病機(jī)制。最近研究證實(shí)，TLR9與多種呼吸系統(tǒng)疾病有關(guān)，在抗病毒及細(xì)菌的感染中起了重要作用。

急性上呼吸道感染和毛細(xì)支氣管炎常由流感病毒、副流感病毒、呼吸道合胞病毒等引起，是嬰幼兒時(shí)期常見(jiàn)疾病。有學(xué)者[5]研究發(fā)現(xiàn)，滅活的呼吸道合胞病毒疫苗，在添加了TLR9和NOD2的特異性配體后,能增強(qiáng)機(jī)體黏膜對(duì)呼吸道合胞病毒的免疫力。本研究發(fā)現(xiàn)，治療前急性上呼吸道感染組、毛細(xì)支氣管炎組血TLR9蛋白濃度高于健康對(duì)照組（P＜0.01），提示TLR9可能參與了呼吸道病毒感染過(guò)程；而急性上呼吸道感染組與毛細(xì)支氣管炎組之間沒(méi)有差別，表明TLR9對(duì)病毒的反應(yīng)可能沒(méi)有選擇特異性；同時(shí)還發(fā)現(xiàn)，恢復(fù)期急性上呼吸道感染組、毛細(xì)支氣管炎組血清TLR9蛋白濃度降低，且高于對(duì)照組（P＜0.01），提示隨著機(jī)體炎癥減輕TLR9的水平也隨之下降，表明它能反應(yīng)疾病的炎癥狀態(tài)。

除了上述病毒感染性疾病，TLR9還參與肺炎的免疫反應(yīng)。在急性細(xì)菌性肺炎患者的血類漿細(xì)胞樹(shù)突狀細(xì)胞上TLR9的表達(dá)增加，上調(diào)了分子對(duì)病原體相關(guān)分子模式和受調(diào)理素作用抗原的識(shí)別能力[6]。在G-細(xì)菌性肺炎中，TLR9還可與TLR4一起共同起到促進(jìn)白細(xì)胞介素23和17表達(dá)的作用[7]。在A型流感病毒感染的肺炎中，TLR9也可與TLR2/6聯(lián)合起到清除病毒的作用[8]。本研究發(fā)現(xiàn)，肺炎組血清TLR9蛋白的濃度高于急性上呼吸道感染組及毛細(xì)支氣管炎組（P＜0.01），提示肺炎患者TLR9的免疫反應(yīng)強(qiáng)烈，其濃度處于較高水平；恢復(fù)期肺炎組血清TLR9蛋白濃度明顯下降但仍高于對(duì)照組，提示TLR9對(duì)炎癥反應(yīng)將持續(xù)一段時(shí)間才能恢復(fù)正常水平。

綜上所述，呼吸道感染后TLR9蛋白濃度升高，表明TLR9參與了呼吸道感染的天然免疫應(yīng)答機(jī)制，可以作為評(píng)價(jià)病情的免疫指標(biāo)。

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（收稿：2014-12-26 修回：2015-05-06）

1浙江省諸暨市人民醫(yī)院兒科（諸暨 311800）；2浙江省臺(tái)州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院兒科（溫嶺 317523）；3浙江省臺(tái)州市中西醫(yī)結(jié)合醫(yī)院檢驗(yàn)科（溫嶺 317523）

方麗，Tel：15356308779