豬O型口蹄疫疫苗免疫抗體消長(zhǎng)動(dòng)態(tài)研究

項(xiàng)朝榮等

摘要：[目的] 掌握豬O型口蹄疫疫苗免疫后的抗體消長(zhǎng)規(guī)律。[方法] 應(yīng)用豬O型口蹄疫滅活疫苗1、滅活疫苗2和合成肽疫苗對(duì)198頭試驗(yàn)豬進(jìn)行至少2次免疫，定期采血后用液相阻斷ELISA檢測(cè)方法測(cè)定免疫前后抗體效價(jià)。[結(jié)果] 在首次免疫時(shí)，疫苗免疫效果受母源抗體的干擾較大；仔豬首免后抗體很難達(dá)到完全保護(hù)（大于6log2）水平，應(yīng)適當(dāng)縮短首免與二免的間隔時(shí)間，盡量減少免疫空白期；合成肽疫苗的首免效果較滅活疫苗好，首次免疫推薦使用合成肽疫苗；如果生豬飼養(yǎng)周期過(guò)長(zhǎng)，免疫2次的生豬出欄時(shí)抗體不能達(dá)到完全保護(hù)水平；規(guī)模場(chǎng)試驗(yàn)豬的母源抗體水平低于散養(yǎng)戶(hù)，隨著試驗(yàn)豬日齡的增加和免疫的加強(qiáng)，規(guī)模場(chǎng)試驗(yàn)豬的免疫抗體滴度逐漸高于散養(yǎng)戶(hù)。[結(jié)論] 該研究可為研究豬O型口蹄疫抗體變化和制定豬O型口蹄疫疫苗的免疫程序提供參考和借鑒。

關(guān)鍵詞：豬O型口蹄疫；疫苗免疫；抗體檢測(cè)；抗體消長(zhǎng)；分析

中圖分類(lèi)號(hào)：S855 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼 A 文章編號(hào) 0517-6611（2015）08-109-03

口蹄疫（FMD）是由口蹄疫病毒引起偶蹄動(dòng)物的一種急性、熱性、高度接觸性傳染病，該病傳播速度快，感染率高，對(duì)社會(huì)及國(guó)際貿(mào)易危害嚴(yán)重，世界動(dòng)物衛(wèi)生組織（OIE）將其列為A類(lèi)動(dòng)物傳染病之首。我國(guó)是受口蹄疫危害的國(guó)家之一，也是世界上最大的豬肉生產(chǎn)國(guó)和消費(fèi)國(guó)。豬口蹄疫防控是我國(guó)動(dòng)物疫病防控的重中之重。為了制定科學(xué)免疫程序，有效防控該病，筆者對(duì)豬O型口蹄疫疫苗的免疫抗體消長(zhǎng)動(dòng)態(tài)進(jìn)行了檢測(cè)。

1 材料與方法

1.1 試驗(yàn)動(dòng)物 試驗(yàn)豬為母豬免疫背景基本一致的仔豬198頭，選自河南省濟(jì)源市6個(gè)生豬規(guī)模場(chǎng)和9個(gè)散養(yǎng)戶(hù)。

1.2 試驗(yàn)材料

1.2.1 疫苗。疫苗購(gòu)自河南省政府招標(biāo)的3個(gè)疫苗廠家，疫苗批號(hào)分別為：2136002、2136012、2136034；H120742J、H120743J；20120501、20120611、20120705。所用疫苗均由濟(jì)源市畜牧局提供。

1.2.2 檢測(cè)試劑?？谔阋咭合嘧钄郋LISA檢測(cè)試劑，批號(hào)為2012102901，購(gòu)自中國(guó)農(nóng)業(yè)科學(xué)院蘭州獸醫(yī)研究所。

1.3 試驗(yàn)場(chǎng)地 動(dòng)物免疫接種試驗(yàn)在各養(yǎng)殖場(chǎng)內(nèi)完成，血清學(xué)試驗(yàn)在濟(jì)源市動(dòng)物疫病預(yù)防控制中心實(shí)驗(yàn)室完成。

1.4 試驗(yàn)方法 198頭試驗(yàn)豬分為3大組、9小組，第1大組的72頭規(guī)模場(chǎng)試驗(yàn)豬分別用豬O型口蹄疫滅活疫苗1、滅活疫苗2和合成肽疫苗進(jìn)行2次免疫，第2大組的72頭規(guī)模場(chǎng)試驗(yàn)豬分別用豬O型口蹄疫滅活疫苗1、滅活疫苗2和合成肽疫苗進(jìn)行3次免疫，第3大組的54頭散養(yǎng)戶(hù)試驗(yàn)豬分別用豬O型口蹄疫滅活疫苗1、滅活疫苗2和合成肽疫苗進(jìn)行3次免疫，免疫方法與免疫劑量按照疫苗說(shuō)明書(shū)進(jìn)行。試驗(yàn)豬從10日齡開(kāi)始每月開(kāi)展1次抗體檢測(cè)，跟蹤抗體的消長(zhǎng)規(guī)律。

1.5 數(shù)據(jù)處理及結(jié)果判定 FMD抗體效價(jià)與保護(hù)性關(guān)系通常以3個(gè)區(qū)帶來(lái)表述[1]，小于3log2時(shí)為敏感帶（易受感染），3log2～6log2時(shí)為灰色帶（不完全保護(hù)或部分保護(hù)），大于6log2時(shí)為保護(hù)帶（完全保護(hù)）。

2 結(jié)果與分析

2.1 試驗(yàn)豬疫苗免疫前后抗體消長(zhǎng)變化 從表1可以看出，10日齡9個(gè)試驗(yàn)組的平均抗體滴度全部處于保護(hù)帶；37日齡（首免），8個(gè)試驗(yàn)組的平均抗體滴度仍處于保護(hù)帶；68日齡（首免后31 d，二免），只有1個(gè)試驗(yàn)組的平均抗體滴度處于保護(hù)帶，甚至有1個(gè)試驗(yàn)組的平均抗體滴度處于敏感帶；99日齡（二免后31 d）時(shí)，7個(gè)試驗(yàn)組的平均抗體滴度處于保護(hù)帶，2個(gè)試驗(yàn)組的平均抗體滴度處于灰色帶；125日齡（二免后57 d，部分組三免）時(shí)，9個(gè)試驗(yàn)組的平均抗體滴度全部處于保護(hù)帶；150日齡（部分組二免后82 d，部分組三免后25 d）時(shí)，9個(gè)試驗(yàn)組的平均抗體滴度全部處于保護(hù)帶。

2.2 不同疫苗廠家抗體消長(zhǎng)的比較 從圖1可以看出，10日齡和37日齡未免疫疫苗時(shí)，3組試驗(yàn)豬平均抗體滴度基本一致；首免后31 d，3組試驗(yàn)豬平均抗體滴度均有所下降，但下降幅度差異較大，其中合成肽疫苗免疫豬抗體滴度下降幅度最小，不到1個(gè)滴度，滅活疫苗1免疫豬抗體滴度下降幅度最大，約4個(gè)滴度；此后幾次檢測(cè)，合成肽疫苗免疫豬抗體滴度一直高于滅活疫苗免疫豬。

2.3 不同免疫次數(shù)的抗體消長(zhǎng)比較 從圖2可以看出，10日齡、37日齡、68日齡、99日齡和125日齡，2組試驗(yàn)豬平均抗體滴度基本一致；150日齡，免疫3次試驗(yàn)豬抗體滴度較25 d前略有上升，免疫2次試驗(yàn)豬抗體滴度較25 d前明顯下降。

2.4 不同養(yǎng)殖類(lèi)型抗體消長(zhǎng)的比較 從圖3可以看出，10日齡、37日齡未免疫疫苗和68日齡首免后31 d，散養(yǎng)戶(hù)平均抗體滴度略高于規(guī)模場(chǎng)；99日齡、125日齡和150日齡，隨著試驗(yàn)豬的生長(zhǎng)和免疫次數(shù)增多，規(guī)模場(chǎng)平均抗體滴度略高于散養(yǎng)戶(hù)。

3 討論

（1）該試驗(yàn)結(jié)果表明，仔豬首免后抗體下降明顯，說(shuō)明在首次免疫時(shí)疫苗免疫效果受母源抗體干擾較大。據(jù)報(bào)道，母源抗體可從細(xì)胞免疫和體液免疫2個(gè)方面對(duì)疫苗免疫產(chǎn)生干擾[1]，其作用機(jī)理主要是加速抗原物質(zhì)的清除、對(duì)弱毒疫苗起中和作用、母源抗體對(duì)特異性抗原位點(diǎn)的“封閉”而阻止抗原位點(diǎn)與機(jī)體免疫相關(guān)細(xì)胞上的抗原受體結(jié)合等，從而導(dǎo)致免疫系統(tǒng)不能對(duì)抗原物質(zhì)產(chǎn)生反應(yīng)。因此，在豬O型口蹄疫免疫中應(yīng)重視母源抗體對(duì)疫苗的干擾作用，選擇合適的時(shí)機(jī)進(jìn)行疫苗免疫。在實(shí)際生產(chǎn)中，當(dāng)母源抗體降至不完全保護(hù)水平時(shí)，對(duì)疫苗免疫效果的干擾較小，此時(shí)是接種疫苗的最佳時(shí)機(jī)。該試驗(yàn)結(jié)果表明，仔豬經(jīng)過(guò)1次免疫抗體很難達(dá)到完全保護(hù)水平，二免后抗體能達(dá)到完全保護(hù)水平且有效抗體持續(xù)時(shí)間長(zhǎng)。魏孔福等[2]2007年報(bào)道的O型口蹄疫疫苗免疫?？贵w消長(zhǎng)動(dòng)態(tài)的LPB-ELISA檢測(cè)結(jié)果也表明，畜群經(jīng)過(guò)1次免疫不能獲得良好的保護(hù)率，只有在一免后進(jìn)行加強(qiáng)免疫，才能達(dá)到預(yù)期目的。首免后至二免有效抗體產(chǎn)生以前仔豬處于免疫空白期，因此在生產(chǎn)中要適當(dāng)縮短首免與二免間隔時(shí)間，盡量減少免疫空白期。

（2）該試驗(yàn)結(jié)果表明合成肽疫苗免疫效果受母源抗體的干擾較滅活疫苗小，這與王文娟等[3]報(bào)道的豬O型口蹄疫滅活疫苗與合成肽疫苗免疫抗體水平的比較結(jié)果一致。豬O型口蹄疫合成肽疫苗是僅含免疫決定簇組分的小肽，由于不是全病毒，母源抗體對(duì)其干擾作用相對(duì)較小，首免后抗體滴度明顯高于滅活疫苗。由于首免基礎(chǔ)好，加強(qiáng)免疫后抗體滴度仍高于滅活疫苗。因此，仔豬首免使用合成肽疫苗可以達(dá)到較好的免疫效果，首次免疫推薦使用合成肽疫苗。

（3）該試驗(yàn)結(jié)果表明，試驗(yàn)豬二免后82 d抗體仍處于保護(hù)帶，但滅活疫苗組的抗體已接近保護(hù)帶與灰色帶的臨界線，與及時(shí)進(jìn)行三免的試驗(yàn)豬相比，平均抗體低將近2個(gè)滴度。在實(shí)際生產(chǎn)中，如果生豬飼養(yǎng)周期過(guò)長(zhǎng)，免疫2次的生豬出欄時(shí)抗體不能達(dá)到完全保護(hù)水平。因此，飼養(yǎng)周期超過(guò)180 d的生豬，應(yīng)在二免后60 d再免疫1次豬O型口蹄疫疫苗。

（4）不同養(yǎng)殖類(lèi)型的比較結(jié)果表明，規(guī)模場(chǎng)試驗(yàn)豬母源抗體水平低于散養(yǎng)戶(hù)，仔豬母源抗體水平與母體特異抗體水平呈正相關(guān)[1]，此次選取的試驗(yàn)豬母豬免疫背景基本一致，規(guī)模場(chǎng)可能因?yàn)槟肛i批量免疫，免疫效果不如散養(yǎng)戶(hù)。在試驗(yàn)過(guò)程中規(guī)模場(chǎng)和散養(yǎng)戶(hù)試驗(yàn)豬的疫苗免疫全部由試驗(yàn)人員親自完成，免疫日齡和免疫劑量一致，隨著試驗(yàn)豬日齡的增加和免疫的加強(qiáng)，規(guī)模場(chǎng)試驗(yàn)豬免疫抗體滴度逐漸高于散養(yǎng)戶(hù)，這可能與規(guī)模場(chǎng)的飼養(yǎng)管理水平較高有關(guān)，有待進(jìn)一步研究。

（5）由于受條件限制，此次試驗(yàn)采樣檢測(cè)間隔時(shí)間較長(zhǎng)，只能粗略掌握試驗(yàn)豬疫苗免疫前后抗體消長(zhǎng)規(guī)律，下一步將不斷完善研究數(shù)據(jù)，探索更詳細(xì)的抗體變化規(guī)律，更好為養(yǎng)殖場(chǎng)戶(hù)的豬O型口蹄疫免疫提供參考和指導(dǎo)。

參考文獻(xiàn)

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[2] 魏孔福，祁淑蕓，林密，等.O型口蹄疫疫苗免疫?？贵w消長(zhǎng)動(dòng)態(tài)的LPB-ELISA檢測(cè)[J].中國(guó)獸醫(yī)科學(xué)，2007，37（9）：787-790.

[3] 王文娟，鄧紅江，王群英，等.豬O型口蹄疫滅活疫苗與合成肽疫苗免疫抗體水平檢測(cè)[J].中國(guó)獸醫(yī)雜志，2013，49（11）：41-42.