復方蒼術的初步藥效學研究

奚紅霞，巢艷紅（.鎮(zhèn)江市第二人民醫(yī)院藥劑科，江蘇003；江蘇大學藥學院，江蘇鎮(zhèn)江03）

蒼術為菊科植物茅蒼術[Atractylodes lancea（Thunb.）DC.]或北蒼術[1][Atractylodes chinensia（DC.）Koidz.]的干燥根莖。蒼術主要含揮發(fā)油，由一系列的倍半萜、聚乙烯炔類及少量的酚類、有機酸類成分組成[2]，另外還含有倍半萜內酯、倍半萜糖苷、多聚糖以及少量的黃酮類成分，其中主要的活性成分為倍半萜類和聚乙烯炔類。根莖含揮發(fā)油3.125%～6.192%，揮發(fā)油中主要成分為蒼術素、茅術醇、β桉油醇、蒼術酮等[3]。蒼術味甘苦、性溫，歸脾、腎、肝經(jīng)，具有燥濕健脾、祛風散寒等功效。朱丹溪曰：實脾土燥脾濕乃治痰之本。蒼術有燥濕健脾之功，對痰飲咳喘療效較好?！毒V目》：蒼術治濕痰留飲，或挾淤血成窠囊?！侗静菡x》：蒼術氣味雄厚，較白術愈猛，能切上切下，燥濕而宣化痰飲。若濕在上焦，易生濕痰，以此燥濕行痰。現(xiàn)代藥理學研究也證明，蒼術具有止咳、祛痰、抗炎、抗菌等作用。

宋·許叔微《類證普濟本事方》載有神術丸（生茅術、生芝麻和大棗）曾治愈其本人由于“膈中停飲”而引起的脅痛癥。20世紀40年代中醫(yī)劉氏改制其法，采用蒼術復方，即以生茅術為主藥，配以適量補骨脂、陳皮等，用于治療老年人發(fā)作于冬季的痰飲咳喘，即所謂老年慢性支氣管炎，頗有療效。明·王綸首揭“痰之本，水也，原于腎；痰之動，濕也，主于脾；痰之成，氣也，貯于肺?！崩^之張景岳提出：“五臟之病，雖具能生痰，然無不由乎脾腎，蓋脾主濕，濕動則為痰；腎主水，水泛也為痰。故痰之化無不在脾，而痰之本無不在腎?！眲⑹系膫鹘y(tǒng)驗方以中藥蒼術為主藥，燥濕健脾以達止咳、祛痰之效；補骨脂為臣藥補肝腎[4]；陳皮為佐使理氣健脾、燥濕化痰[5]，此為本實驗選方依據(jù)。為驗證該蒼術復方治療慢性支氣管炎的藥理活性，本文對其進行了初步藥效學研究，以期為臨床應用提供科學依據(jù)。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 藥物及試劑 蒼術由鎮(zhèn)江江揚國藥有限公司提供（批號：20130702），補骨脂由丹陽市練湖農(nóng)場提供（批號：20130302），陳皮由鎮(zhèn)江同源堂國藥有限公司提供（批號：20130306），茶新那敏由南京立業(yè)制藥股份有限公司提供，規(guī)格75 mg（以氨茶堿計）×100，苯酚紅由SCRC國藥集團化學試劑有限公司提供（批號：20121206），濃氨水為分析純。

1.1.2 設備與儀器 揮發(fā)油提取裝置，UV-2401PC紫外分光光度計由日本島津公司制造，KQ-250B型超聲波清洗器由昆山市超聲儀器有限公司制造，HH-S數(shù)顯恒溫水浴鍋由江蘇金壇市醫(yī)療儀器廠制造，SC202型電熱恒溫干燥箱由上海申通實驗電器廠制造，SHZ-D循環(huán)水式真空泵由鞏義市英峪予華儀器廠制造，BUCHI旋轉蒸發(fā)儀R-200。

1.1.3 動物 昆明種小鼠（KM小鼠），體質量18～22 g，由武漢大學動物實驗中心提供[證書編號：SCXK（鄂）2014-0004]。

1.2 方法

1.2.1 復方蒼術主成分的提取

1.2.1.1 揮發(fā)油組 稱取藥物適量置于1 000 mL圓底燒瓶加10倍量的水浸漬6h，用揮發(fā)油提取器水蒸餾8h，直至提盡揮發(fā)油，收集揮發(fā)油。量取所需劑量揮發(fā)油溶于0.2%吐溫80待用。

1.2.1.2 水提物組 取上述提取揮發(fā)油8 h的水液，真空抽濾，得淡黃色澄清液體，旋轉蒸發(fā)濃縮至稠膏，真空干燥成粉末，得水提物。稱取所需劑量溶于0.5%羧甲基纖維素鈉（CMC-Na）待用。

1.2.1.3 醇提物組 稱取藥物適量置于1 000 mL圓底燒瓶加10倍量95%乙醇，水浴加熱回流1.5 h，待冷后真空抽濾，得酒紅色澄清液體，旋轉蒸至稠膏，水浴蒸至無醇味，得醇提物。量取所需劑量溶于0.2%吐溫80待用。

1.2.1.4 主成分混合組 稱取藥物適量置于1 000 mL圓底燒瓶加10倍量的水浸漬6 h，用揮發(fā)油提取器水蒸餾提取8 h，收取揮發(fā)油。蒸餾后的水液另器收集。藥渣再加水煎煮2次，第1次加8倍量的水煎1 h，第2次加6倍量的水煎0.5 h，合并煎液，過濾，濾液與上述水液合并。濃縮合并液至一定體積，待冷至室溫，加入95%乙醇使藥液中醇濃度達到60%，靜置24 h，抽濾，濾液濃縮至稠膏，真空干燥成粉末。稱取所需劑量粉末溶于0.2%吐溫80，加入上述揮發(fā)油[6]適量，混勻待用。

1.2.2 復方蒼術主成分及各有效部位的藥理研究

1.2.2.1 濃氨水引咳實驗[7]取小鼠60只，雌雄兼用，體質量18～22 g，按體質量、性別分為6組（溶劑組、陽性藥組、揮發(fā)油組、水提物組、醇提物組、主成分混合組），每組10只，給藥組、溶劑組、陽性藥茶新那敏[8]組，灌胃給藥。連續(xù)給藥7 d。于末次給藥1 h后，將小鼠置于倒置的500 mL燒杯中，內放一棉球，用1 mL注射器吸取氨水0.2 mL，注入棉球，迅速倒置燒杯，以免氣體逸出，觀察和記錄小鼠的咳嗽潛伏期和2 min內咳嗽次數(shù)，并與溶劑組和陽性藥組比較。

1.2.2.2 酚紅排痰實驗 取小鼠60只，雌雄兼用，體質量18～22 g，按體質量、性別分為6組，每組10只，給藥組、溶劑組、陽性藥茶新那敏組，灌胃給藥。連續(xù)給藥7 d。（1）5%酚紅溶液的制備：精密稱取酚紅5 g，溶解于5%（5 g/dL）NaHCO3溶液中，加生理鹽水至 100 mL，搖勻。（2）酚紅標準液管配制：用分析天平準確稱取0.1 g酚紅，以5%NaHCO3溶液溶解至100 mL，使1 mL含酚紅1 000 μg。然后順次稀釋成 0.01、0.1、0.5、0.7、1.0、3.0、5.0、10.0 μg/mL不同濃度，各25 mL。用分光光度計測吸光度（A）值，以酚紅劑量為橫坐標（X），吸光度值為縱坐標（Y），繪制標準曲線[9]。Y=0.121 3X-0.006 5（r=0.999 9），線性良好。見圖1。（3）實驗前各組小鼠禁食不禁水12 h，于末次給藥后30 min，腹腔注射酚紅0.1 mL/10 g體質量，30 min后頸椎脫臼法處死，解剖分離出氣管，用濾紙吸凈周邊血液，剪下自甲狀軟骨下緣至氣管分叉處的一段氣管，放入2mL生理鹽水離心管中，超聲震蕩洗滌20min，加入5%NaHCO3溶液2 mL，用分光光度計測波長546 nm處A值，與酚紅標準曲線比較，計算出酚紅排泄量[10]，并與溶劑組和陽性藥組比較。

圖1 酚紅標準曲線

1.3 統(tǒng)計學處理 應用SPSS13.0統(tǒng)計軟件進行數(shù)據(jù)分析，計量資料以ss表示，采用 t檢驗。Р＜0.05為差異有統(tǒng)計學意義。

2 結 果

2.1 濃氨水引咳實驗 陽性藥組和各給藥組小鼠咳嗽潛伏期均延長，小鼠2 min內咳嗽次數(shù)減少。除醇提物組外，其他各組與溶劑組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；與陽性藥組比較，主成分混合組和水提物組均優(yōu)于陽性藥組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。說明復方蒼術有良好的鎮(zhèn)咳作用，其鎮(zhèn)咳效果依次為主成分混合組、水提物組、揮發(fā)油組，而醇提物組無顯著影響。其中主成分混合組小鼠咳嗽潛伏期延長70%，2 min內咳嗽次數(shù)減少超過75%。見表1。

2.2 酚紅排痰實驗 陽性藥組和各給藥組均能提高小鼠氣管酚紅排泄量。除醇提物組外，其他各組與溶劑組比較，差異均有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）；與陽性藥組比較，主成分混合組和水提物組均優(yōu)于陽性藥組，差異有統(tǒng)計學意義（P＜0.01）。說明復方蒼術有良好的祛痰作用，其中主成分藥效由高到低依次為混合組、水提物組、揮發(fā)油組，而醇提物組無顯著影響。見表2。

表1 對小鼠氨水致咳的影響（ss）

表1 對小鼠氨水致咳的影響（ss）

注：-表示未加藥；與溶劑組比較，aP＜0.01；與陽性藥組比較，bP＜0.01。

組別n 劑量（g/kg）溶劑組陽性藥組揮發(fā)油組水提物組醇提物組主成分混合組10 10 10 10 10 10-0.51 0.54 8.37 6.74 6.30咳嗽潛伏期（s）54.60±12.83 72.10±7.78a 68.10±5.51a 91.90±10.19ab 62.00±6.65 92.50±12.61ab 2 min內咳嗽次數(shù)（次）49.60±15.96 34.00±9.90a 29.40±4.65a 16.00±9.78ab 37.00±8.87 11.90±7.96ab

表2 對小鼠的化痰作用（ss）

表2 對小鼠的化痰作用（ss）

注：-表示未加藥；與溶劑組比較，aP＜0.01；與陽性藥組比較，bP＜0.01。

組別n 劑量（g/kg）溶劑組陽性藥組揮發(fā)油組水提物組醇提物組主成分混合組10 10 10 10 10 10-0.512 0.540 8.370 6.740 6.300氣管酚紅排泄量（μg/mL）0.25±0.05 0.39±0.08a 0.45±0.08a 0.56±0.16ab 0.31±0.08 0.58±0.13ab

3 討 論

3.1 提取方式 本實驗采用多種提取方式，水提、醇提、揮發(fā)油提取，然后對小鼠采用灌胃法給藥[11]，水提物濃縮干燥分劑量后用水溶解；醇提物濃縮后不能干燥為粉末，實驗中采用兩種方法，一種為用淀粉混合濃縮物干燥后分劑量，另一種方法為濃縮至無醇味后直接按體積分劑量，對結果均無影響；揮發(fā)油直接按體積分劑量。

3.2 揮發(fā)油提取條件的選擇 本實驗采用正交設計法[12]考察了揮發(fā)油提取的最佳條件，以揮發(fā)油提取量為考察指標，選擇浸漬時間（0、6、12 h）、加水量（8、10、12 倍）、提取時間（4、6、8 h）3 因素 3 水平的 L9（33）正交表，結果得揮發(fā)油提取的最優(yōu)工藝為浸漬6 h，加10倍量水，提取8 h。

3.3 溶劑的選取 水提物的溶劑可用水或5%CMC-Na，對結果無影響；醇提物與揮發(fā)油均難溶于水，實驗中采用兩種方法，一種為用植物油溶解，另一種為用0.2%吐溫80溶解，前者溶解效果較好，但長期灌胃條件下對小鼠健康狀況有不良影響，表現(xiàn)為毛色不光亮，形體消瘦，影響藥物吸收與實驗結果；后者雖溶解效果不如前者，長久放置易積聚，但振搖后可分散均勻，且對小鼠健康無明顯不良影響，藥物吸收良好，故實驗選用吐溫溶解法。

本研究僅對復方蒼術的鎮(zhèn)咳藥理作用作了初步動物實驗對比研究，為合理開發(fā)傳統(tǒng)中藥，充分利用中藥資源提供了理論參考，但對臨床藥理作用的研究沒有涉及，這也是作者今后的研究方向。

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