不同工藝仙人掌提取物對綠殼蛋雞生產(chǎn)性能及免疫指標的影響

顧文松，Li-Wen Hsu（.鎮(zhèn)江天和生物技術有限公司，江蘇　揚中　4；.印尼Satwa Boga Sampurna研究所，印尼　雅加達　405）

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不同工藝仙人掌提取物對綠殼蛋雞生產(chǎn)性能及免疫指標的影響

顧文松1，Li-Wen Hsu2
（1.鎮(zhèn)江天和生物技術有限公司，江蘇揚中212214；2.印尼Satwa Boga Sampurna研究所，印尼雅加達40115）

摘要：為研究不同工藝仙人掌提取物對綠殼蛋雞生產(chǎn)性能的影響，選取40周齡綠殼蛋雞7 260只，隨機分為3組（處理Ⅰ組、處理Ⅱ組和對照組）。對照組飼喂基礎飼糧，處理Ⅰ組在基礎飼糧中添加乙醇提取配合乙醚萃取的仙人掌提取物400 mg·kg(-1)，處理Ⅱ組在基礎飼糧中添加超臨界萃取的仙人掌提取物400 mg·kg(-1)，結果表明，添加不同工藝仙人掌提取物的處理組在產(chǎn)蛋率、平均蛋重、破殼率和綠殼蛋雞外周血T淋巴細胞轉化率與對照組相比均得到顯著改善（P<0.05），處理Ⅰ組和處理Ⅱ組的料蛋比與對照組相比差異不顯著（P>0.05）；處理Ⅰ組和處理Ⅱ組在產(chǎn)蛋率、平均蛋重、破殼蛋和綠殼蛋雞外周血T淋巴細胞轉化率上差異不顯著（P>0.05）。同時發(fā)現(xiàn)，不同工藝仙人掌提取物飼喂綠殼蛋雞能夠改善蛋品質。

關鍵詞：仙人掌提取物；綠殼蛋雞；產(chǎn)蛋率；蛋重；T淋巴細胞

在畜牧生產(chǎn)中，抗生素的長期使用導致有害細菌產(chǎn)生耐藥性、動物免疫力下降、畜禽內(nèi)源性感染和二重感染，給養(yǎng)禽業(yè)造成巨大的經(jīng)濟損失。與此同時抗生素在畜禽產(chǎn)品中殘留，也嚴重威脅到人類的健康。因此，具有無毒副作用，無藥物殘留等優(yōu)點的飼用抗生素替代品備受關注。中草藥與抗生素相比，具有天然性、無抗藥性、無殘留等特點，因此越來越受人們的重視。乙醇提取配合乙醚萃取的仙人掌提取物具有預防動物疾病、提高免疫力、提高動物生產(chǎn)性能等功效，且無毒負作用[1-3]。但由于工藝復雜，不易于大量生產(chǎn)，限制其使用，而超臨界萃取工藝則便于大批量生產(chǎn)。本試驗以40周齡綠殼蛋雞為試驗對象，觀察不同工藝仙人掌提取物對綠殼蛋雞生產(chǎn)性能的影響，為仙人掌提取物替代抗生素添加劑提供重要依據(jù)，探索出便于大量生產(chǎn)的仙人掌提取工藝。

1　材料與方法

1.1試驗動物

40周齡綠殼蛋雞7 260只，由江蘇揚中東風養(yǎng)禽場提供。

1.2試驗飼糧

蛋雞基礎日糧組成及營養(yǎng)水平見表1。

表1　飼糧組成及營養(yǎng)水平DM

1.3藥物與試劑

1.3.1試驗藥物

乙醇提取配合乙醚萃取仙人掌提取物：采用新鮮仙人掌通過乙醇提取和乙醚萃取技術制取的干粉；超臨界萃取仙人掌提取物：采用新鮮仙人掌通過30 MPa、45℃下用超臨界CO2提取的仙人掌干粉[3]。

1.3.2試驗試劑

青霉素鈉為哈藥集團制藥總廠產(chǎn)品；硫酸鏈霉素為華北制藥股份有限公司產(chǎn)品；RPMI-1640培養(yǎng)液為Gibco公司產(chǎn)品；新生牛血清為杭州四季青生物材料有限公司產(chǎn)品；伴刀豆球蛋白（ConA）、臺盼藍為Sigma公司分裝產(chǎn)品；淋巴細胞分離液為上海華精生物高科技有限公司產(chǎn)品；二甲基亞楓為上海生工生物工程技術服務有限公司產(chǎn)品；PBS稀釋液為鎮(zhèn)江天和生物技術有限公司實驗室配制。

1.4試驗方法

1.4.1動物分組及飼養(yǎng)

將綠殼蛋雞7 260只隨機分為3組，處理Ⅰ組為綠殼蛋雞2 810只，在基礎飼糧中添加乙醇提取配合乙醚萃取的仙人掌提取物400 mg·kg-1；處理Ⅱ組為綠殼蛋雞2 427只，在基礎飼糧中添加超臨界萃取的仙人掌提取物400 mg·kg-1；對照組為綠殼蛋雞2 023只，飼喂基礎飼糧。試驗前雞舍進行全面清洗、消毒，保證自動飲水器正常，自由飲水，采用16 h光照，按繼定免疫程序進行蛋雞群的免疫，試驗期由專人飼養(yǎng)管理，蛋雞飼喂為2次·d-1（9: 00、16: 00）。綠殼蛋雞從40周齡開始進行正式試驗，1個試驗周期為7 d，共4周期28 d。

1.4.2產(chǎn)蛋性能測定

每天記錄產(chǎn)蛋數(shù)、破殼蛋、總蛋重，每周統(tǒng)計一次采食量，計算日均產(chǎn)蛋率、平均蛋重、采食量及料蛋比。

1.4.3雞外周血T淋巴細胞活性情況測定

1.4.3.1外周血T淋巴細胞的制備

于添飼后0、7、14、28 d從3組試驗雞群中分別隨機抽取雞10只，通過翅下靜脈采集檸檬酸三鈉抗凝血2 mL，制備淋巴細胞。用MI-1640培養(yǎng)液（含有青鏈霉素100單位·mL-1、新生牛血清100 mL·L-1）調整細胞密度至1×106個·mL-1后，轉入細胞培養(yǎng)板于37.5℃、體積分數(shù)為5%的CO2培養(yǎng)箱中培養(yǎng)48 h。

1.4.3.2外周血T淋巴細胞增殖反應

待上述細胞生長至單層后，去除培養(yǎng)上清液，再用新鮮培養(yǎng)液懸浮細胞，加入ConA（終濃度10 mg·L-1）后，將細胞放入37.5℃、體積分數(shù)為5% 的CO2培養(yǎng)箱中繼續(xù)培養(yǎng)24 h。取出細胞板，每孔加入同體積的MTT液（以RPMI-1640培養(yǎng)液配置），繼續(xù)培養(yǎng)4 h后，棄去培養(yǎng)孔中的上清液，每孔中加入DMSO 100 uL，充分混勻，于室溫避光靜置15 min后，測定570 nm波長的吸光值（OD570nm），并計算平均值，作為T淋巴細胞增殖的指標。

2　結果與分析

2.1對綠殼蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響

不同工藝仙人掌提取物對綠殼蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響見表2。

由表2可知，第1周各組間產(chǎn)蛋率差異不顯著（P>0.05）。由于試驗選擇的是40周齡的綠殼蛋雞，隨著周齡的增加，產(chǎn)蛋率呈逐漸下降的趨勢，在試驗第4周，處理Ⅰ組與處理Ⅱ組相比差異不顯著（P>0.05），但處理Ⅰ、Ⅱ組與對照組相比差異顯著（P<0.05）。第1周各組間平均蛋重差異不顯著（P>0.05），隨著試驗時間的增加，各處理組平均蛋重沒有明顯變化，而對照組隨著周齡的增加平均蛋重有所下降，在試驗第4周處理Ⅰ組與處理Ⅱ組組間差異不顯著（P>0.05），但處理Ⅰ、Ⅱ組與對照組相比差異顯著（P<0.05）。料蛋比在整個試驗期間無顯著變化（P>0.05），可能和試驗時間較短有關。

2.2對綠殼蛋雞所產(chǎn)破殼蛋的影響

不同工藝仙人掌提取物對綠殼蛋雞所產(chǎn)破殼蛋的影響見表3。

表2　不同工藝仙人掌提取物對綠殼蛋雞產(chǎn)蛋性能的影響

表3　不同工藝仙人掌提取物對綠殼蛋雞所產(chǎn)破殼蛋的影響

由表3可知，試驗第1周各組破蛋率為2.15%～ 2.75%，由于試驗選擇的是40周齡的綠殼蛋雞，隨著試驗周齡的增加，對照組破殼率沒有顯著變化（P>0.05），而各處理組破殼率呈逐漸下降的趨勢，試驗第4周各處理組間差異不顯著（P>0.05）。

2.3對綠殼蛋雞外周血T淋巴細胞轉化率的影響

不同工藝仙人掌提取物對綠殼蛋雞外周血T淋巴細胞轉化率見表4。

由表4可知，試驗第0天蛋雞外周血T淋巴細胞轉化率為0.127～0.131，各組間差異不顯著（P> 0.05），第7天處理Ⅰ、Ⅱ組分別比對照組提高了17.97%和27.34%，差異顯著（P<0.05），但處理Ⅰ組與處理Ⅱ組間差異不顯著（P>0.05）。隨著試驗時間增加，處理Ⅰ、Ⅱ組的蛋雞外周血T淋巴細胞轉化率上升，而對照組沒有明顯變化。試驗28 d后處理Ⅰ、Ⅱ組與對照組相比有顯著提高（P<0.05），分別提高了51.94%和54.26%，但處理Ⅰ組與處理Ⅱ組間差異不顯著（P>0.05）。

表4　不同工藝仙人掌提取物對綠殼蛋雞外周血T淋巴細胞轉化率

3　討　論

3.1對綠殼蛋雞生產(chǎn)性能的影響

仙人掌除含有各種氨基酸、可溶性糖、有機酸、維生素和各種無機元素外，還含有豐富的生理活性物質如異鼠李素和槲皮素的葡萄糖苷、異槲皮苷和三萜化合物，這些物質能夠補充動物的生理需求，提高動物的生產(chǎn)性能[5-6]。本試驗表明，不同工藝仙人掌提取物有提高產(chǎn)蛋率和增加蛋重的作用，在試驗第4周，對照組產(chǎn)蛋率比乙醇提取配合乙醚萃取的仙人掌提取物組下降3.93%，兩組間差異顯著（P<0.05）；比超臨界萃取仙人掌提取物組下降5.56%，兩組間差異顯著（P<0.05），但兩處理組間差異不顯著（P>0.05）；試驗第4周平均蛋重為53.46～50.00，處理Ⅰ、Ⅱ組與對照相比組間差異顯著（P<0.05），對照組比不同工藝仙人掌提取物組下降6.36%～6.92%，但兩處理組間差異不顯著（P> 0.05）。

3.2對綠殼蛋雞所產(chǎn)破殼蛋的影響

添飼仙人掌提取物組破殼蛋率有所下降，而對照組破殼蛋率呈明顯上升趨勢。

3.3對綠殼蛋雞外周血T淋巴細胞轉化率的影響

仙人掌提取物中含有多種植物多糖及其他有益因子，誘導體內(nèi)淋巴細胞的增殖和活化，可以增強機體免疫系統(tǒng)發(fā)揮免疫應答[7]。臨床主要以外周血T淋巴細胞轉化率為衡量標準，T淋巴細胞在受到有絲分裂原或抗原刺激時可發(fā)生增殖和分化，但對ConA比較敏感，利用這一特性將T細胞在體外經(jīng)ConA刺激，發(fā)生一系列增殖變化，轉化為淋巴母細胞[8]。轉化率高低可反映機體的免疫功能狀態(tài)。本試驗結果表明，仙人掌提取物作為飼料添加劑添飼0、7、14、28 d后，添飼組蛋雞T細胞對ConA的增殖效應顯著提高（P<0.05），表明機體的免疫水平在添飼期內(nèi)得到有效提升，并維持在高水平，超臨界萃取和乙醇提取配合乙醚萃取的仙人掌提取物有同等的效果。

4　結論

試驗結果表明，在基礎日糧中添加不同工藝仙人掌提取物400 mg·kg-1，可提高綠殼蛋雞產(chǎn)蛋率，對綠殼蛋雞外周血T淋巴細胞轉化率的提高也有顯著的作用，并可在一定程度上改善蛋雞健康狀況。超臨界萃取和乙醇提取配合乙醚萃取的仙人掌提取物有同等的效果。

[參考文獻]

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Effect of Different Techniques of the Cactus PE on the Production Performance and Immune Parameters of Blue-shell Chicken

GU Wensong1, HSU Liwen2
（1. Zhenjiang Tianhe Bio-technology Co., Ltd., Yangzhong 212214, Jiangsu China; 2. Satwa Boga Sampurna research Institute, Jakarta 40115, Indonesia）

Abstract:In order to study effect of different techniques of the cactus PE on the production performance of chick?en, seven thousand two hundred and sixty chickens (aged 40 weeks) were randomly divided into 3 groups (treatment groupⅠ,Ⅱand the control group). The control group was fed the basal diet；groupⅠwas fed 400 mg·kg(-1)the cactus PE by alcohol extraction and ether extraction which was added into basal diet；groupⅡwas fed 400 mg·kg(-1)the cac?tus PE by supercritical fluid extraction which was added into basal diet. The results showed that laying rate, average egg weight, shell-breaking rate and chicken peripheral blood T-lymphocytes in different techniques of treated group have significantly higher than the control group(P<0.05), feed egg ratio in groupⅠandⅡwere not significant com?pared with the control group(P>0.05); laying rate, average egg weight, shell-breaking rate and chicken peripheral blood T-lymphocytes conversion rate were not significantly different in groupⅠcompared with groupⅡ(P>0.05). The test also found that egg quality can be improvedindifferent techniques of the cactus PE.

Key words:cactus PE; Blue-shell chicken; laying rate; egg weight; T- lymphocyte

作者簡介：顧文松（1980-），男，江蘇揚中人，碩士，主要從事草藥對畜禽疾病的防控和飼料添加劑的研制。

基金項目：鎮(zhèn)江市科技支撐項目（NY2012007）

收稿日期：2015-01-22

中圖分類號：S816.7；S831

文獻標志碼：A

文章編號：1001-0084（2015）05-0006-04