RP—HPLC法測(cè)定埃索美拉唑鎂腸溶微丸膠囊的溶出度

陳云　陳錦玲

摘 要：目的 建立埃索美拉唑鎂腸溶微丸膠囊溶出度的測(cè)定方法。方法 采用轉(zhuǎn)籃法、轉(zhuǎn)速為50 r/min，介質(zhì)體積是900 mL的pH6.8磷酸鹽溶液，以C18為色譜柱，流動(dòng)相為乙腈-磷酸二氫鈉水溶液（45∶55），檢測(cè)波長(zhǎng)為280 nm，流速為1 mL/min，柱溫為30℃，進(jìn)樣量是100 μL。結(jié)果 埃索美拉唑鎂在1.760～52.81 μg/mL（r=0.9997）濃度范圍內(nèi)與峰面積有良好的線性關(guān)系，采用pH6.8磷酸鹽溶液為埃索美拉唑鎂腸溶微丸膠囊溶出度測(cè)定介質(zhì)。結(jié)論 該方法簡(jiǎn)便、準(zhǔn)確、專屬性強(qiáng)、回收率高，可用于該制劑的質(zhì)量控制。

關(guān)鍵詞：埃索美拉唑鎂腸溶微丸膠囊 高效液相色譜法 溶出度測(cè)定

中圖分類號(hào)：R927.2 文獻(xiàn)標(biāo)識(shí)碼：A 文章編號(hào)：1672-3791（2015）11（c）-0252-04

埃索美拉唑鎂是阿斯利康制藥有限公司的專利產(chǎn)品，是奧美拉唑的S-異構(gòu)體、壁細(xì)胞中質(zhì)子泵的的特異性抑制劑，也是質(zhì)子泵抑制劑家族中第1個(gè)單一光學(xué)異構(gòu)體，是目前治療消化性潰瘍病抑制胃酸分泌最為有效的藥物。其在抗消化性潰瘍藥物質(zhì)子泵抑制劑中市場(chǎng)占有率較高，排名第2位，僅次于奧美拉唑。埃索美拉唑鎂在胃酸中不穩(wěn)定，所以，專利產(chǎn)品中是以腸溶片制劑上市。該項(xiàng)目組采用離心制粒包衣法制備埃索美拉唑鎂腸溶微丸，并采用RP-HPLC法測(cè)定其溶出曲線，內(nèi)容如下所示。

1 主要儀器與部分試劑

Waters2695-2996型高效液相色譜儀。

埃索美拉唑鎂腸溶微丸（自制，規(guī)格：40 mg。批號(hào)：20120901、20120902、20120903）；埃索美拉唑鎂對(duì)照品；乙腈、甲醇為色譜純，其他試劑為分析純。

2 方法與結(jié)果

2.1 色譜條件及系統(tǒng)適應(yīng)性試驗(yàn)

色譜柱：KromasilC18（250 mm×4.6 mm，5 μm）；流動(dòng)相：乙腈-磷酸二氫鈉水溶液（取磷酸二氫鈉15.6g，加蒸餾水水溶解并定容至2 000 mL容量瓶中并用磷酸調(diào)節(jié)pH至7.6）=45∶55；流速：1 mL/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：280 nm；柱溫：30 ℃；進(jìn)樣量：100 μL。在此實(shí)驗(yàn)下，理論板數(shù)按埃索美拉唑鎂峰計(jì)應(yīng)不低于2 000，供試品中埃索美拉唑鎂峰能達(dá)到基線分離。

色譜圖見(jiàn)圖1、圖2、圖3所示。

2.2 線性關(guān)系考察

精密稱取埃索美拉唑鎂對(duì)照品88.02 mg置200 mL容量瓶里，加入pH6.8磷酸鹽溶液溶解并定容至刻度，得濃度為0.440 1 mg/mL的對(duì)照品貯備液。精密移取0.2 mL、0.5 mL、1 mL、2 mL、5 mL、6 mL置50 m容量瓶中，加入pH6.8磷酸鹽溶液稀釋并定容至刻度，精密移取100 μL注射進(jìn)入液相色譜儀，測(cè)定埃索美拉唑鎂的峰面積，以峰面積為縱坐標(biāo)，濃度為橫坐標(biāo)進(jìn)行線性回歸，得回歸方程為y=20 121x+0.5 （r=0.999 7）。表明峰面積與埃索美拉唑鎂在1.760～52.81μg/mL濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系較好。

2.3 制備供試品溶液

精密移取0.2 mL埃索美拉唑鎂對(duì)照品貯備液置50 mL容量瓶中，加入pH6.8磷酸鹽稀釋并定容至刻度，作為樣品在pH1.2鹽酸溶液介質(zhì)的對(duì)照品溶液。精密移取10 mL埃索美拉唑鎂對(duì)照品貯備液于100 mL量瓶中，加入pH6.8磷酸鹽溶液稀釋并定容至刻度，作為樣品在水、pH6.0磷酸鹽溶液、pH6.8磷酸鹽溶液介質(zhì)的對(duì)照品溶液中。精密移取供試品溶液、對(duì)照品溶液各100μL注射進(jìn)入液相色儀，測(cè)定埃索美拉唑鎂的峰面積，以外標(biāo)法計(jì)算每個(gè)時(shí)間點(diǎn)埃索美拉唑鎂的溶出量。

2.4 濾膜吸附試驗(yàn)

分別取埃索美拉唑鎂在上述水、pH6.0磷酸鹽溶液、pH6.8磷酸鹽溶液介質(zhì)中溶解的對(duì)照品溶液、埃索美拉唑鎂腸溶微丸膠囊的溶出液，取尼龍66（孔徑0.45μm）作為過(guò)濾頭，分別對(duì)對(duì)照品溶液、埃索美拉唑鎂腸溶微丸膠囊的溶出液作高速離心（4 000 rpm，10 min），過(guò)濾，棄去初濾液，精密移取續(xù)濾出液100 μL注入液相色譜儀，測(cè)定埃索美拉唑鎂的峰面積，觀察同一濃度值峰面積的變化情況。結(jié)果表明與高速離心相比，此過(guò)濾頭對(duì)埃索美拉唑鎂對(duì)照品溶液、溶出液過(guò)濾棄去5 mL后，即對(duì)主藥沒(méi)形成吸附的影響。

2.5 穩(wěn)定性試驗(yàn)

分別取埃索美拉唑鎂對(duì)照品溶液、埃索美拉唑鎂腸溶微丸膠囊在水、pH6.0磷酸鹽溶液、pH6.8磷酸鹽溶液介質(zhì)中相當(dāng)于完全溶出時(shí)5%、100%溶出量的溶出液，分別在0、1、2、4、8、12、24 h測(cè)定埃索美拉唑鎂的峰面積，觀察峰面積的變化情況。結(jié)果顯示，在24 h內(nèi)埃索美拉唑鎂的峰面積與0 h比較，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差是1.1%，表明在24 h內(nèi)測(cè)定樣品溶液是穩(wěn)定的。

2.6 重復(fù)性試驗(yàn)

分別制備埃索美拉唑鎂腸溶微丸膠囊在水、pH6.0磷酸鹽溶液、pH6.8磷酸鹽溶液介質(zhì)的溶出度測(cè)定的溶出杯中，連續(xù)取樣6份，測(cè)定其埃索美拉唑鎂的溶出量。埃索美拉唑鎂的溶出量相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差是1.2%，表明此法測(cè)定埃索美拉唑鎂溶出度重復(fù)性高。

2.7 回收率試驗(yàn)

制備埃索美拉唑鎂腸溶微丸膠囊在水、pH6.0磷酸鹽溶液、pH6.8磷酸鹽溶液介質(zhì)中相當(dāng)于累計(jì)溶出10%、50%、120%的溶出液，每個(gè)濃度制備3份，測(cè)定埃索美拉唑鎂的溶出量，計(jì)算其回收率，從結(jié)果可以看出，埃索美拉唑鎂在3個(gè)介質(zhì)中3個(gè)濃度的回收率均在95%～105%間，相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差均小于2.5%，表明此法測(cè)定埃索美拉唑鎂溶出度的回收率高。

2.8 溶出曲線測(cè)定

分別取埃索美拉唑鎂腸溶微丸膠囊6粒（批號(hào)20120901），按“2.3”項(xiàng)下溶出條件，測(cè)定其溶出曲線，結(jié)果如圖4所示，埃索美拉唑鎂腸溶微丸膠囊在pH1.2鹽酸溶液中2 h溶出不超10%，而在pH6.8磷酸鹽溶液迅速溶出，在水、pH6.8磷酸鹽溶液均顯迅速釋放。

2.9 溶出度指標(biāo)制定

上述實(shí)驗(yàn)顯示，埃索美拉唑鎂腸溶微丸膠囊在pH1.2鹽酸溶液中2 h溶出不超10%，而在pH6.8磷酸鹽溶液中的溶出15 min已達(dá)溶出平臺(tái)，基本已全部溶出。為了更好地控制本品的質(zhì)量，采取適當(dāng)延遲溶出度取樣時(shí)間、限度，初步定為30 min時(shí)溶出不低于80%。

3 討論

溶出試驗(yàn)應(yīng)盡可能在生理?xiàng)l件下進(jìn)行，這樣得到的溶出數(shù)據(jù)就可以用于解釋并分析制劑在體內(nèi)的行為。采用此標(biāo)準(zhǔn)及評(píng)價(jià)手段來(lái)評(píng)價(jià)口服固體制劑，可顯示出不同制劑品質(zhì)間的差距，為臨床的療效差距提供依據(jù)。

4 結(jié)語(yǔ)

該次研究建立的測(cè)定方法測(cè)定埃索美拉唑鎂，對(duì)出峰和峰形時(shí)間有了進(jìn)一步的改善，而且操作簡(jiǎn)便、專屬性強(qiáng)、精密度高、結(jié)果準(zhǔn)確可靠，可以用于埃索美拉唑鎂的穩(wěn)定性考察及其含量測(cè)定，如果有時(shí)間將本實(shí)驗(yàn)進(jìn)行進(jìn)一步的優(yōu)化，可以為中國(guó)藥典制定標(biāo)準(zhǔn)提供參考。

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