辛伐他汀對膿毒癥并發(fā)ARDS患者CDCD調節(jié)性T細胞的影響

戴新貴 付春來 蔡業(yè)平 張圣岸 黎艷暉

戴新貴 付春來 蔡業(yè)平 張圣岸 黎艷暉

目的研究辛伐他汀對膿毒癥并發(fā)急性呼吸窘迫綜合征（ARDS）患者外周血CDCD調節(jié)性T細胞（Treg）的影響。方法65例膿毒癥患者隨機分為辛伐他汀治療組（n=32）和對照組（n=33）。采集患者入選研究后的外周血行白細胞計數(shù)（WBC）， C反應蛋白（CRP）， 降鈣素原（PCT）檢測來反映患者的感染程度， 同時記錄急性生理和慢性健康（APACHE Ⅱ）評分， 流式細胞術（FCM）檢測各組入選時、1、3、5、7、14 d的外周血CDCDTreg的水平。結果兩組間的一般資料比較差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。辛伐他汀治療組的CDCDTreg在T淋巴細胞中的百分比逐漸下降， 第14天兩組間比較差異具有統(tǒng)計學意義［（7.32±1.86）% VS （10.01±5.63）%， t=2.568， P=0.013）］。結論辛伐他汀能改善膿毒癥并發(fā)ARDS患者Treg過多的現(xiàn)象， 起到調節(jié)免疫紊亂的功能。

辛伐他??；膿毒癥；急性呼吸窘迫綜合征；調節(jié)性T細胞；流式細胞術

膿毒癥（sepsis）是感染引起的全身炎癥反應綜合征（SIRS），膿毒癥的進一步發(fā)展可導致膿毒性休克和多器官功能障礙綜合征（MODS）［1］， 有研究證明免疫紊亂狀態(tài)時是膿毒癥發(fā)展為MODS主要的機制之一［2］。CDCD調節(jié)性T細胞（regulatory T cell， Treg）是目前研究最為深入的天然Treg， 膿毒癥體內過多的Treg， 介導了膿毒癥的免疫抑制功能［3］， 被認為和膿毒癥誘導MODS有關［4］。膿毒癥誘導的急性呼吸窘迫綜合征（acute respiratory distress syndrome， ARDS）是膿毒癥在肺部的臨床表現(xiàn)［5］。研究證明他汀類藥物可有效控制膿毒癥體內炎癥水平， 降低病死率［6，7］， 但具體機制尚未闡明， 因此本研究探討辛伐他汀對膿毒癥并發(fā)ARDS患者CDCD調節(jié)性T細胞的影響， 為膿毒癥的免疫調節(jié)治療提供新的理論依據(jù)?，F(xiàn)報告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 2013年8月～2014年8月本院重癥醫(yī)學科收治的65例膿毒癥并發(fā)ARDS患者， 男41例（63.08%）， 女24例（36.92%）， 年齡19～87歲， 平均年齡（59.52±19.31）歲；原發(fā)病構成：下呼吸道感染19例（29.23%）， 腹腔感染16例（24.62%）， 外傷15例（23.08%）， 泌尿系統(tǒng)感染8例（12.31%），其他7例（10.77%）。膿毒癥診斷參考膿毒癥運動2012標準［8］，ARDS診斷標準參考柏林會議2012標準［9］。排除標準：①惡性腫瘤。②基礎疾病有嚴重臟器功能不全。③3個月內服用過免疫抑制劑藥物和（或）激素。數(shù)字隨機法將65例患者分為辛伐他汀治療組（n=32）和對照組（n=33）。

1.2 研究方法 收集患者入院研究時的一般資料（包括年齡、性別、病因構成、病原菌構成、是否機械通氣等）， 采集外周血行WBC， CRP， PCT監(jiān)測來反映患者的感染程度， 同時記錄APACHE Ⅱ評分反映患者的疾病嚴重程度。對照組按照膿毒癥運動2012年指南給予治療， 包括液體復蘇， 抗生素治療， 器官支持等；治療組在對照組的基礎上胃腸道給予辛伐他汀10 mg， 1次/d。收集各組患者入選時、1、3、5、7、14 d的外周血送檢。

1.3 Treg分離及檢測 外周血標本1500 r/min離心4 min，棄血清加入PBS混勻至3 ml， 加入6 ml 淋巴細胞分離液上層3000 r離心15 min后取中層白色細胞。再次離心后計數(shù)，加入PE標記抗大鼠CD25單克隆抗體（5 μl/106）孵育15 min，1800 r/min離心10 min后加入抗PE磁珠（20 μl/107）， 進行磁珠分選， 陽性選擇獲得CDT細胞。解離試劑（20 μl/ml）解離10 min后再次磁珠分選， 陰選細胞后加入終止試劑（30 pl/ml），同時加入FITC標記抗大鼠CD4（10 μl/ml）孵育15 min。再加入CD磁珠孵育15 min， 離心后磁珠分選， 陽選即得CDCD4Treg。FCM檢測雙陽性細胞的含量。PE-CD25抗體、FITCCD4抗體-CD4磁珠、大鼠抗PE試劑盒購自美國BD公司，F(xiàn)ACS流式細胞儀：美國Becton-Dickinsion公司。

1.4 統(tǒng)計學方法 采用SPSS19.0統(tǒng)計學軟件對數(shù)據(jù)進行統(tǒng)計學分析。計量資料以均數(shù)±標準差（ -x±s）表示， 采用t檢驗；計數(shù)資料采用χ2檢驗。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計學意義。

2 結果

2.1 兩組患者的一般資料比較 兩組患者在入選本研究時的性別、年齡、病因構成比、病原菌構成、機械通氣、WBC等比較， 差異無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。見表1。

圖1 兩組外周血的CDCDTreg比較

表1 兩組患者的一般資料比較［n， x-±s， n（%）］

3 討論

膿毒癥的發(fā)生發(fā)展涉及到復雜的機體全身炎癥網(wǎng)絡效應、免疫功能障礙以及宿主對不同感染病原微生物及其毒素的異常反應等多個方面。膿毒癥時機體過度的炎癥反應， 形成 “瀑布效應”， 進一步發(fā)展可誘發(fā)嚴重膿毒癥、膿毒性休克和MODS， 最終導致患者死亡［1］。免疫功能紊亂在膿毒癥發(fā)生、發(fā)展過程中具有重要作用， 膿毒癥機體失控性全身炎癥和免疫機能紊亂密切相關， 目前認為炎癥與免疫反應障礙在膿毒癥中并不僅僅表現(xiàn)為“過度炎癥反應”， 還同時呈現(xiàn)“免疫功能抑制”， 表現(xiàn)為“克隆無反應狀態(tài)”， 最終可能發(fā)展為“免疫麻痹”［3］。ARDS是以肺毛細血管通透性升高、嚴重低氧血癥和雙肺彌漫性改變?yōu)樘卣鞯呐R床急重癥， 病情兇險， 病死率高［10］。ARDS的本質是炎癥， 是全身炎癥反應綜合征（SIRS）在肺部的表現(xiàn)， 其致病因子激活了炎癥體液因子， 從而導致了體內過度的炎癥反應， 進一步發(fā)展為MODS。膿毒癥體內存在過多的CDCDTreg， 通過細胞直接接觸機制、誘導凋亡和釋放細胞因子作用于效應T細胞三種途徑發(fā)生免疫抑制作用。CDCDTreg高表達叉頭框蛋白3（FOXP3）、細胞毒性T淋巴細胞相關抗原-4（CTLA-4）和糖皮質激素誘導的腫瘤壞死因子受體（GIFR）， 各自或共同通過不同途徑發(fā)揮抑制效應T細胞功能［11］。

近年研究發(fā)現(xiàn)， 他汀類藥物除了傳統(tǒng)的調脂功能外， 還具有抗炎、調節(jié)免疫功能、抗氧化、穩(wěn)定血管內皮細胞等作用［6，7，12］。本研究通過隨機對照的方法， 觀察辛伐他汀治療膿毒癥并發(fā)ARDS患者， 對外周血CDCDTreg在T淋巴細胞中的百分比， 結果表明辛伐他汀能改善膿毒癥并發(fā)ARDS患者2周后的體內Treg過多的現(xiàn)象， 起到調節(jié)免疫紊亂的功能， 但本研究局限于Treg數(shù)量的研究， 對于Treg表明標志物（如FOXP3、CTLA-4、GIFR）和分泌功能［白介素-10（IL-10）、轉化生長因子-β（TGF-β）］及對效應T細胞免疫功能（細胞增殖、Th細胞極化、分泌功能）的影響還需進一步研究。

［1］ Skrupky LP， Kerby PW， Hotchkiss RS.Advances in the management of sepsis and the understanding of key immunologic defects.Anesthesiology， 2011， 115（6）:1349-1362.

［2］ Hasan Z， Palani K， Zhang S， et al.Rho kinase regulates induction of T-cell immune dysfunction in abdominal sepsis.Infect Immun，2013， 81（7）:2499-2506.

［3］ 戴新貴， 姚詠明， 艾宇航.膿毒癥大鼠調節(jié)性T細胞凋亡對輔助性T細胞漂移的影響及血必凈注射液的干預作用.中國危重病急救醫(yī)學， 2009， 21（3）:135-138.

［4］ Cho E， Lee JH， Lim HJ， et al.Soluble CD25 is increased in patients with sepsis-induced acute kidney injury.Nephrology （Carlton），2014， 19（6）:318-324.

［5］ 李影， 梁志欣， 李春筍， 等.膿毒癥與非膿毒癥所致ARDS患者的臨床特征比較分析.國際呼吸雜志， 2013， 33（10）:742-747.

［6］ Leaf DE， Waikar SS.Rosuvastatin for sepsis-associated ARDS.N Engl J Med， 2014， 371（10）:968.

［7］ Truwit JD， Bernard GR， Steingrub J， et al.Rosuvastatin for sepsisassociated acute respiratory distress syndrome.N Engl J Med， 2014，371（23）:2191-2200.

［8］ Hicks P， Cooper DJ， Webb S， et al.The Surviving Sepsis Campaign: International guidelines for management of severe sepsis and septic shock: 2008.An assessment by the Australian and New Zealand intensive care society.Anaesth Intensive Care， 2008， 36（2）:149-151.

［9］ Ranieri VM， Rubenfeld GD， Thompson BT， et al.Acute respiratory distress syndrome: the Berlin Definition.JAMA， 2012， 307（23）: 2526-2533.

［10］ Williams JP， McBride WH.After the bomb drops: a new look at radiation-induced multiple organ dysfunction syndrome （MODS）.Int J Radiat Biol， 2011， 87（8）:851-868.

［11］ Zheng W， Wang QH， Feng H， et al.CD4+CDFOXP3+ regulatory T cells prevent the development of Th1 immune response by inhibition of dendritic cell function during the early stage of Plasmodium yoelii infection in susceptible BALB/c mice.Folia Parasitol （Praha）， 2009，56（4）:242-250.

［12］ Fogerty MD， Efron D， Morandi A， et al.Effect of preinjury statin use on mortality and septic shock in elderly burn patients.J Trauma，2010， 69（1）:99-103.

Influence of simvastatin on CD4+CD25+regulatory T cell in patients of sepsis complicated with ARDS

DAI Xin-gui, FU Chun-lai, CAI Ye-ping, et al.
Department of Intensive Care Unit, Hunan Chenzhou City the First People’s Hospital, Chenzhou 423000, China

Objective To explore the influence of simvastatin on CD4+CDregulatory T cell （Treg） in patients of sepsis complicated with acute respiratory distress syndrome （ARDS）.MethodsA total of 65 sepsis patients were randomly divided into simvastatin treatment group （n=32） and control group （n=33）.Their peripheral blood white blood count （WBC）， C-reactive protein （CRP） and procalcitonin （PCT） were collected and detected to show their infection degree.Their acute physiology score （APACHE Ⅱ） were recorded， and their peripheral blood CDCD25+Treg levels were detected by flowcytometry （FCM） in admission time， and 1， 3， 5， 7， 14 d.ResultsThere was no statistically significant difference of general information between the two groups （P＞0.05）.The CDCDTreg levels had decreasing percentage in T lymphocyte in the simvastatin treatment group.On 14 d，the difference between the two groups had statistical significance ［（7.32±1.86）% VS （10.01±5.63）%， t=2.568，P=0.013）］.ConclusionSimvastatin can improve the Treg redundance in patients of sepsis complicated with ARDS， and it has regulation function for immunologic derangement.

Simvastatin; Sepsis; Acute respiratory distress syndrome; Regulatory T cell; Flowcytometry

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.07.003

2014-10-08］

423000 湖南郴州市第一人民醫(yī)院重癥醫(yī)學科-1