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    MEF2A基因與冠心病易感性的關(guān)系

    2015-05-09 10:11:54黃新次
    中國實(shí)用醫(yī)藥 2015年2期
    關(guān)鍵詞:外顯子人群冠心病

    黃新次

    MEF2A基因與冠心病易感性的關(guān)系

    黃新次

    目的 探討肌細(xì)胞增強(qiáng)因子(MEF)2A基因與冠心病發(fā)病之間的關(guān)系。方法 230例冠心病患者作為觀察組, 同時選取200例健康人群作為對照組, 對兩組受檢人群的MEF2A基因11號外顯子與7號外顯因子進(jìn)行聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(PCR)擴(kuò)增以及DNA測序, 并結(jié)合臨床資料研究MEF2A基因與冠心病發(fā)病的關(guān)系。結(jié)果 未發(fā)現(xiàn)MEF2A基因存在堿基缺失, 該基因CAG重復(fù)序列具有多態(tài)性, 等位基因在兩組受檢人群中的分布, 差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P>0.05)。結(jié)論 MEF2A基因11號外顯子與7號外顯因子的CAG序列多態(tài)性與冠心病無明顯相關(guān)性。

    肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2A基因;冠心病;易感性;關(guān)系

    冠心病的發(fā)病率近年來逐年上升, 其在人類疾病譜中的變化已經(jīng)引起了全世界的關(guān)注, 全球因冠心病死亡的的人數(shù)目前是位居惡性腫瘤之后的第二位[1-3]。因此, 近些年, 國內(nèi)外有許多學(xué)者將研究的方向放在冠心病的發(fā)病因素上, 企圖通過對冠心病的發(fā)病因素的干擾來降低冠心病的發(fā)病率,提高人類的身體素質(zhì)以及生活質(zhì)量[4]。從國內(nèi)外專家近幾年的研究結(jié)果看, 冠心病的發(fā)病有許多相關(guān)的因素, 例如高血壓、糖尿病、吸煙等都是冠心病發(fā)病的高危因素[5]。此外, 冠心病的發(fā)病還具有明顯的家族性, 于是人們將目光聚集在冠心病患者的基因上, 從2003年, Wang等通過從北美一個冠心病的家族的研究發(fā)現(xiàn)了該家族中MEF2A基因11號外顯子的21堿基對缺失。于是, Wang等認(rèn)為, 冠心病的發(fā)病與MEF2A基因11號外顯子的21堿基對缺失具有相關(guān)性。2004年, Bhagavatula等研究又發(fā)現(xiàn)MEF2A基因7號外顯因子與冠心病的發(fā)病具有相關(guān)性。隨后, 國內(nèi)外多個個人或團(tuán)體對這一課題進(jìn)行研究, 但是研究的結(jié)果頗具爭議。本實(shí)驗(yàn)為了研究MEF2A基因與冠心病是否具有相關(guān)性, 對冠心病人群與正常人群分別作了與MEF2A基因有關(guān)的基因檢測,現(xiàn)將結(jié)果報告如下。

    1 資料與方法

    1.1 一般資料 本研究所選擇的受試人群為2012年4月~2014年7月來本院就診的患者或是家屬, 對照組200例, 年齡為41~78歲的健康人群, 男160例, 女40例;觀察組230例,為經(jīng)過冠狀動脈血管造影確診的冠心病患者, 年齡41~78歲,男180例, 女50例。

    1.2 入選標(biāo)準(zhǔn) 觀察組的患者均為經(jīng)過冠狀動脈造影檢查確診至少有一根冠狀動脈主要分支管腔狹窄在50%以上, 或是既往有心肌梗死病史, 已經(jīng)過內(nèi)科介入支架治療或是經(jīng)過冠狀動脈旁路移植手術(shù)進(jìn)行治療的患者。對照組人群為經(jīng)過冠狀動脈造影檢查, 結(jié)果顯示, 無冠狀動脈官腔狹窄的健康人群。兩組受試人群均無肝、腎等功能障礙, 無精神障礙疾病,同時排除合并感染的患者、排除合并有內(nèi)分泌疾病與惡性腫瘤的患者。

    1.3 方法 兩組受試者均在了解實(shí)驗(yàn)的方式與目的后自愿參與實(shí)驗(yàn), 并在知情同意書簽字。囑受試者禁食水12 h, 然后采集外周靜脈血4~6 ml, 應(yīng)用酚/氯仿的方法提取DNA,將DNA調(diào)成20 ng/ml并置于4℃中保存, 然后對患者進(jìn)行血壓、血脂、血糖以及體質(zhì)量指數(shù)的檢測, 并詢問受試者的病史與家族史做好詳細(xì)的記錄。設(shè)計提取的DNA引物序列為:上游5'-TGCAGAGGTA- CTTGCAAGCCAT-3', 下游 3'-AGATATGTAGGGCAG- GTCACTG-5'。本研究使用上海市中山大學(xué)達(dá)安基因股份有限公司生產(chǎn)的型號為DA7600擴(kuò)增儀進(jìn)行PCR擴(kuò)增, 擴(kuò)增反應(yīng)體系應(yīng)用15 μl, 其中包括10XPCR緩沖液1.5 μl、0.2 μl 10 mmol/L dNTPs、1.5 μl 25 mmol/L MgCl、20 μmol/L的引物各0.12 μl, 去離子水 (ddH2O) 9.44 μl、5 U/μl rTaqDNA聚合酶0.12 μl、DNA模板2 μl。PCR擴(kuò)增的程序參數(shù)為:使用94℃溫度預(yù)變性5 min, 然后此溫度下變性30 s,再用58℃溫度退火, 時間仍為30 s, 最后使用72℃溫度延伸30 s, 如此30個循環(huán)后最后延伸5 min, 4℃冷藏保存。

    PCR擴(kuò)增后使用110 g/L 中性聚丙烯酰胺凝膠垂直電泳,然后按照SSCP中條帶的多少以及電泳后泳動的距離將標(biāo)本進(jìn)行分類, 按照類別選取典型的標(biāo)本測序, 測序的結(jié)果采用NCBI Genebank BLAST 軟件進(jìn)行分析并比對。

    1.4 統(tǒng)計學(xué)方法 采用統(tǒng)計學(xué)數(shù)據(jù)分析軟件SPSS18.0進(jìn)行數(shù)據(jù)分析, 計量資料以均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示, 采用t檢驗(yàn);計數(shù)資料采用χ2檢驗(yàn), P<0.05表示差異具有統(tǒng)計學(xué)意義。

    2 結(jié)果

    2.1 受試人群基本資料的比較 觀察組人群高血壓、糖尿病的患病率明顯高于對照組, 且觀察組人群的吸煙率以及飲酒率均高于對照組, 差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P<0.05), 具體數(shù)值見表1。

    2.2 受試人群基因測試結(jié)果比較 經(jīng)過DNA對比的分析,并未在觀察組人群中發(fā)現(xiàn)有11號外顯因子中的堿基缺失,也并未發(fā)現(xiàn)兩組患者中7號外顯因子的異同之處, 僅在11號外顯子處發(fā)現(xiàn)CAG重復(fù)序列, 重復(fù)的次數(shù)為4~15次不等。具體數(shù)值見表2。

    表1 兩組患者基本資料的比較

    表1 兩組患者基本資料的比較

    指標(biāo)對照組(n=200)觀察組(n=230)P平均年齡(歲)54.35±11.6956.74±9.890.126男160 180 0.196女40 50 0.196體質(zhì)量指數(shù)(kg/m2)24.17±3.4627.33±3.710.032收縮壓(mmHg)124.02±15.59127.02±15.650.092舒張壓(mmHg) 78.32±11.79 79.37±12.780.073膽固醇(mmol/L) 4.19±0.76 4.17±0.890.057高密度脂蛋白膽固醇(mmol/L) 1.09±0.63 1.03±0.560.061低密度脂蛋白膽固醇(mmol/L) 2.59±0.76 2.58±0.690.106三酰甘油(mmol/L) 1.73±1.38 1.96±1.310.047有高血壓病史511870.021無高血壓病史149430.024有糖尿病史1311740.047無糖尿病史69560.049有吸煙史791290.036無吸煙史1211110.031有飲酒史991440.049無飲酒史101960.047

    表2 兩組受試者的基因測試結(jié)果[基因條數(shù)(%)]

    3 討論

    MEF2A基因全名叫肌細(xì)胞增強(qiáng)因子2A, 其通過鈣通道傳導(dǎo)通路, 氣道骨骼肌的轉(zhuǎn)錄作用, 與骨骼肌的分化、增殖與死亡有著密不可分的關(guān)系, 對心肌也產(chǎn)生同樣的作用[6,7]。自從2003年Wang等在一個冠心病家族的基因中發(fā)現(xiàn)11號外顯子缺失之后, 國內(nèi)外多項研究結(jié)果顯示, 冠心病的發(fā)病與此基因的變異或是遺傳有關(guān)系。從理論上講, MEF2A基因與心肌細(xì)胞的分化、增殖具有密切的關(guān)系, MEF2A基因突變可以導(dǎo)致冠狀動脈的粥樣硬化。但是, 這種說法僅有理論支持而沒有事實(shí)依據(jù), 國內(nèi)外近兩年的研究結(jié)果的統(tǒng)計學(xué)意義也并不大。本研究通過對健康人群與冠心病人群的基因檢測所得到的有關(guān)MEF2A基因的數(shù)據(jù)也無統(tǒng)計學(xué)意義, 無法確定MEF2A基因與冠心病發(fā)病的關(guān)系。但是從流行病學(xué)的角度看, 冠心病的發(fā)病確實(shí)具有遺傳性, 其可能是由多組基因?qū)е露⒎鞘苣骋唤M基因的影響。鑒于本實(shí)驗(yàn)研究的樣本量較小, 對冠心病的發(fā)病的與MEF2A基因的相關(guān)性不能提出合理的證據(jù), 現(xiàn)在國內(nèi)外多個學(xué)者與團(tuán)體漸漸的將MEF2A基因與冠心病發(fā)病關(guān)系的研究方向放于種族與民族的差異上, 希望能尋找到新的突破口, 為冠心病的防治提出新的依據(jù), 以提高全人類的身體素質(zhì)以及生活質(zhì)量。

    [1] 肖駿, 馬渝, 鄧松柏, 等.MEF2A基因多態(tài)性與重慶地區(qū)漢族人群冠心病的相關(guān)性.廣東醫(yī)學(xué), 2012, 33(15):2229-2232.

    [2] 章蓓蓓, 徐新, 馬紹椿, 等.粵北地區(qū)早發(fā)冠心病與MEF2A基因11外顯子的關(guān)系.中國心血管研究, 2012, 10(11):715-718.

    [3] 趙旺, 趙水平, 吳鵬翠, 等.MEF2A基因突變對血管平滑肌細(xì)胞增殖遷移及其表型的影響.現(xiàn)代生物醫(yī)學(xué)進(jìn)展, 2010, 10(6): 1034-1038.

    [4] 李婧, 楊鈞國, 李偉, 等.中國人群MEF2A基因突變與冠心病易感性的關(guān)系.華中科技大學(xué)學(xué)報(醫(yī)學(xué)版), 2010, 9(4):470-473.

    [5] 李琳.早發(fā)冠心病血瘀證與ACE、MEF2A基因單核苷酸多態(tài)性的相關(guān)性研究.湖南中醫(yī)藥大學(xué), 2014.

    [6] 張曄, 王洪巨.肌細(xì)胞增強(qiáng)因子-2A基因與冠心病研究進(jìn)展.中華全科醫(yī)學(xué), 2011, 9(11):1778-1779.

    [7] 趙春梅.冠狀動脈粥樣硬化性心臟病新危險因素的研究.醫(yī)學(xué)綜述, 2008, 14(1):23-29.

    10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.02.031

    2014-09-15]

    430033 武漢市普愛醫(yī)院檢驗(yàn)科

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