羊水細(xì)胞培養(yǎng)及熒光原位雜交技術(shù)在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用

曾晉國

羊水細(xì)胞培養(yǎng)及熒光原位雜交技術(shù)在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用

曾晉國

目的 探討羊水細(xì)胞培養(yǎng)及熒光原位雜交技術(shù)在產(chǎn)前診斷中的臨床價(jià)值。方法 120例孕婦為研究對象, 分別進(jìn)行熒光原位雜交(FISH)檢測和細(xì)胞培養(yǎng)染色體。對比兩種方法的產(chǎn)前診斷結(jié)果。結(jié)果 FISH檢測為100.00%, 細(xì)胞培養(yǎng)染色體分析為83.33%。結(jié)論 FISH檢測結(jié)果更加正確可靠, 值得在臨床推廣使用。

羊水細(xì)胞培養(yǎng)；熒光原位雜交；產(chǎn)前診斷

染色體異常會引起新生兒先天殘疾或造成孕婦流產(chǎn), 大大降低胎兒的出生質(zhì)量。臨床上常運(yùn)用FISH技術(shù)和細(xì)胞培養(yǎng)染色體分析來對孕婦做產(chǎn)前診斷, 且FISH技術(shù)檢測效果更好, 詳細(xì)報(bào)告如下。

1 資料與方法

1.1 一般資料 選取2012年8月～2014年8月在梅州市人民醫(yī)院婦產(chǎn)科就診的120例孕婦為研究對象, 孕婦基本資料：年齡21～45歲, 平均年齡(26.9±12.5)歲, 孕周18～26周, 平均孕周(19.9±12.6)周, 產(chǎn)前診斷主要指征有：經(jīng)孕中期血清學(xué)篩查發(fā)現(xiàn)高風(fēng)險(xiǎn), 共65例；高齡產(chǎn)婦(35歲以上)20例；40例均有過染色體異?；純荷罚唤?jīng)超聲檢查的軟指標(biāo)有異常的15例, 其中主要包括頸項(xiàng)透明層增厚、脈絡(luò)叢囊腫、單臍動脈、心室強(qiáng)回聲等；夫妻一方為染色體異常患者或是染色體異位攜帶者, 共8例；本次實(shí)驗(yàn)需獲得孕婦及家屬的知情同意書, 并在孕婦知情的條件下將60例行FISH檢測。

1.2 方法 本次試驗(yàn)用到的儀器有：微量加樣器、FISH分析系統(tǒng)、染色體核型分析系統(tǒng)、熒光顯微鏡、雜交儀、普通低速離心機(jī)、電熱恒溫水浴箱、二氧化碳恒溫培養(yǎng)箱等。先進(jìn)行羊水細(xì)胞采集, 在B超的引導(dǎo)下, 常規(guī)消毒后, 經(jīng)腹抽取孕婦羊水2～5 ml , 2000 rpm , 離心10 min, 去上清, 留沉淀0.2 ml, 分別給予常規(guī)羊水細(xì)胞培養(yǎng)染色體核型分析、FISH檢測。羊水細(xì)胞制片與培養(yǎng)：根據(jù)我國衛(wèi)生部(現(xiàn)衛(wèi)計(jì)委)產(chǎn)前診斷行業(yè)標(biāo)準(zhǔn)《胎兒常見染色體異常與開放性神經(jīng)管缺陷的產(chǎn)前篩查與產(chǎn)前診斷技術(shù)標(biāo)準(zhǔn)》按照相關(guān)要求, 采用兩種不同的培養(yǎng)體系進(jìn)行制片和培養(yǎng)。收集細(xì)胞時(shí)需在無菌條件下操作, 確保細(xì)胞不受到污染, 將細(xì)胞分2瓶, 接種在Am-mioMAX-Ⅱ?qū)⒀蛩?xì)胞進(jìn)行培養(yǎng), 混勻后加入5%的二氧化碳；再滲入37℃水中, 離心10 min, 1000 rpm, 放入培養(yǎng)箱中進(jìn)行培養(yǎng), 1周后觀察細(xì)胞的生長情況, 常規(guī)制片G顯帶。雜交。

1.3 分析 對每例標(biāo)本進(jìn)行篩選, 選取顯帶清楚、形態(tài)適中且310條帶以上的至少有4個(gè), 計(jì)數(shù)不得少于25個(gè)分裂相,在特殊情況下應(yīng)增加分析計(jì)數(shù)的分裂相數(shù)。本組本實(shí)驗(yàn)開始便對120例孕婦進(jìn)行羊水接種和培養(yǎng)到核型分析, 結(jié)果顯示120例羊水染色體結(jié)果相一致。

1.4 羊水間期細(xì)胞FISH檢測 兩組均采用GLP13/GLP21D探針以及CSP18/CSP/CSPYDNA探針, 且均由金菩嘉公司提供。去掉蓋玻片, 0.4×SSC/0.3%NP-40, 在71℃中洗2.5 min。2×SSC/0.1%NP-40 , 在室溫下洗1 min?？諝庵懈稍?。加6 μl DAP Ⅱ復(fù)染。根據(jù)熒光顯微鏡的類型選擇合適的濾光片觀察熒光信號, 并攝圖、計(jì)數(shù)、對其做出分析結(jié)果進(jìn)行保存。結(jié)果判斷：每組探針計(jì)數(shù)細(xì)胞不得少于40個(gè), 且由2個(gè)同時(shí)計(jì)數(shù), 若90%細(xì)胞核顯示為整倍體, 則為正常整體倍信號；若整體倍信號在60%以上則表示為非整倍體。以獨(dú)立熒光信號為兩信號點(diǎn)之間的距離要大于1個(gè)信號的點(diǎn)的直徑, 此過程中發(fā)生重疊的信號不作統(tǒng)計(jì), 嚴(yán)格按照《人類染色體細(xì)胞遺傳學(xué)國際命名體制》對染色體核型和FISH檢測結(jié)果進(jìn)行描述。

1.5 統(tǒng)計(jì)學(xué)方法 采用SPSS18.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。計(jì)量資料采用均數(shù)±標(biāo)準(zhǔn)差表示, 行t檢驗(yàn)；計(jì)數(shù)資料以率(%)表示, 采用χ2檢驗(yàn)。P＜0.05表示差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。

2 結(jié)果

2.1 羊水細(xì)胞染色體核型的分析 本次研究共對120例羊水標(biāo)本進(jìn)行了培養(yǎng), 培養(yǎng)成功100例, 培養(yǎng)成功率為83.33%,其中為正常核型占85例, 異常核型占15例。見表1。

表1 染色體異常分類(n, %)

2.2 染色體核型異常與不同產(chǎn)前診斷指征的相關(guān)性 在15例染色體異常核型中, 一對夫妻至少有一方攜帶著異常染色體或染色體異常檢出率過高, 與高領(lǐng)、高風(fēng)險(xiǎn)、生育染色體異?；純骸⒊曁崾拒浿笜?biāo)異常對比差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05)。

3 討論

3.1 產(chǎn)前診斷與產(chǎn)前篩選能有效降低胎兒染色體病染色體病屬于遺傳疾?。?,2］, 其易發(fā)于新生兒, 發(fā)病率1.3‰～1.8‰, 在新生兒中發(fā)病率高, 其次為染色體異常, 發(fā)病率1.1‰～1.21‰。本次研究共分析了120例羊水細(xì)胞, 其顏色異常的為15例, 陽性檢查率14.29%, 其中18-三體陽性率為0.29%, 而21-三體陽性率為0.19%, 性染色體遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出的常規(guī)發(fā)生率, 達(dá)到了0.09%；FISH檢測率為100%。產(chǎn)前篩選能有效降低唐氏綜合征的發(fā)生率, 因?yàn)樗軐ζ滹L(fēng)險(xiǎn)進(jìn)行評估, 并采取預(yù)防措施。這項(xiàng)操作簡單、便捷且迅速、安全, 在臨床上更易被大多數(shù)人所接受。但篩選受到條件限制,會出現(xiàn)一定的假陽性和假陰性, 風(fēng)險(xiǎn)確定不太明確, 必須要通過羊水細(xì)胞培養(yǎng)染色體核型分析來確診, 才能起到一定的臨床作用［3］。根據(jù)以往統(tǒng)計(jì)的結(jié)果分析來看, 占有比列最大的為因血清學(xué)篩查高風(fēng)險(xiǎn)來做羊水穿刺的孕婦, 其占到了56.76%, 其檢查出率也在2.00%以上。本次研究中共檢查出了15例異常核型, 其中18-三體和21-三體分別占3例、2例, 初此之外還見檢查出了1例三倍體和3例嵌合體以及性染色體X、XXX、XXY分別為1例、2例、1例。由此可見,血清學(xué)篩查不僅可以檢測出21-三體和18-三體, 還能檢測出其他機(jī)構(gòu)異常的染色體, 此項(xiàng)結(jié)果與文獻(xiàn)報(bào)道一致。因此,也可以看出, 血清學(xué)篩查能有效提高人口出生素質(zhì), 對指標(biāo)異常的孕婦進(jìn)行檢測, 能有效避免臨床上檢測的盲目性, 在一定程度上減輕了孕婦家庭的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)。

3.2 染色體異常與產(chǎn)前診斷指征的相關(guān)性 本次共對120例孕婦進(jìn)行了產(chǎn)前診斷, 經(jīng)檢查不同產(chǎn)前診斷指征中夫妻雙方至少有一方攜帶異常染色體［4］, 或染色體檢出率超標(biāo)。因此應(yīng)根據(jù)孕婦的自身情況, 并結(jié)合臨床醫(yī)學(xué)對孕婦終止妊娠。如果不終止妊娠胎兒會出現(xiàn)畸形或殘疾, 因?yàn)橥慈旧w間會相互配對, 兩者產(chǎn)生影響, 其中一種異常的染色體與正常染色體配合, 由于具有遺傳因素, 因此胎兒會攜帶異常染色體出生, 影響出生質(zhì)量。

3.3 熒光原位雜交技術(shù)在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用 通過觀察熒光信號在染色體上反應(yīng)出的染色體數(shù)目可以看出, FISH檢測只需要做細(xì)胞技術(shù)即可, 不需要進(jìn)行顯帶分析及細(xì)胞培養(yǎng)。

綜上所述, FISH檢測易操作, 其特異性高, 結(jié)果直觀,檢測速度快, 能正確的分析出染色體的結(jié)構(gòu)和數(shù)目, 而且檢測的結(jié)果正確性高 , 值得在臨床推廣。

［1］ 于麗, 付杰, 馬京梅, 等.1809份羊水細(xì)胞熒光原位雜交技術(shù)與核型檢測結(jié)果分析.中華檢驗(yàn)醫(yī)學(xué)雜志, 2014, 8(5):342-346.［2］ 賀方華.熒光原位雜交在產(chǎn)前診斷中的作用探討.中國計(jì)劃生育學(xué)雜志, 2013, 21(2):113-116.

［3］ 宋婕萍, 王波, 徐淑琴, 等.熒光原位雜交技術(shù)在胎兒染色體非整倍體產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用.實(shí)用醫(yī)學(xué)雜志, 2012, 28(1):111-113.

［4］ 徐雪琴, 謝丙樂, 胡速, 等.熒光原位雜交技術(shù)快速診斷胎兒常見染色體數(shù)目異常.檢驗(yàn)醫(yī)學(xué), 2010, 25(12):921-924.

10.14163/j.cnki.11-5547/r.2015.12.079

2014-12-24］

514089 廣東梅州市人民醫(yī)院檢驗(yàn)科