紫外線分光光度法測(cè)定新疆紅花中總黃酮含量

邢曉軻，黃 斐

(許昌職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南 許昌 461000)

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紫外線分光光度法測(cè)定新疆紅花中總黃酮含量

邢曉軻，黃 斐

(許昌職業(yè)技術(shù)學(xué)院，河南 許昌 461000)

利用紫外線分光光度法測(cè)定新疆紅花的總黃酮含量，通過(guò)實(shí)驗(yàn)得到：新疆B地紅花當(dāng)中總黃酮含量為1.76%，新疆C地紅花當(dāng)中總黃酮含量為1.22%。新疆A地紅花總黃酮含量為1.08%。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明新疆B地的黃酮含量最高。

新疆紅花；總黃酮含量；紫外線分光光度法

紅花(Carthamus tinctorius)為菊科植物，一年生草本植物干燥的管狀花，是祖國(guó)傳統(tǒng)醫(yī)學(xué)的活血化瘀的良藥，也是世界衛(wèi)生組織鼓勵(lì)使用的藥食兼用的天然色素之一，現(xiàn)已用于醫(yī)藥、食品、保健品，人工染料等行業(yè)。當(dāng)前，在紅花栽培面積上，印度居于首位，美國(guó)、墨西哥以及中國(guó)次之[1]。目前，紅花的主要栽培品種為油用品種，在國(guó)內(nèi)外得到了廣泛的栽培[2]。油用紅花是優(yōu)質(zhì)油脂的來(lái)源之一，主要用于食品加工以及烹調(diào)等。除此以外，紅花的花絨能夠提取出天然色素,紅花天然色素能夠作為食品添加劑、人工染料以及保健品和美容產(chǎn)品等[3]。當(dāng)前我國(guó)栽培紅花已經(jīng)有2000年，我國(guó)紅花栽培上除了用于提煉油脂以及人工色素以外，更重要的是作為中藥材入藥。在2005版的藥典中對(duì)紅花的功能進(jìn)行了這樣的描述：活血、散瘀。用于痛經(jīng)、經(jīng)閉、瘡瘍腫痛、跌撲損傷?，F(xiàn)代臨床和藥理作用表明紅花具有對(duì)心血管方面的藥理作用，并廣泛應(yīng)用于臨床[4]。

黃酮是紅花中中藥的藥用成分之一[5]。對(duì)紅花總黃酮含量進(jìn)行測(cè)定在很大程度上能夠?qū)t花質(zhì)量狀況進(jìn)行判定。當(dāng)前測(cè)定紅花黃酮類含量的方法主要有這樣幾種：分光光度法、庫(kù)侖滴定法、HPCE法以及HPLC法。紫外線分光光度計(jì)法測(cè)定紅花中總黃酮的含量操作簡(jiǎn)單，穩(wěn)定性與重復(fù)性較高，是一個(gè)很好的方法[6]。

1 材料與方法

1.1 材料

1.1.1 實(shí)驗(yàn)材料

新疆紅花(1號(hào))采自新疆A地；新疆紅花(2號(hào))采自新疆B地；新疆紅花(3號(hào))采自新疆C地。

1.1.2 儀器

Shimadzu UV-2401紫外-可見(jiàn)分光光度計(jì)；X-5顯微熔點(diǎn)測(cè)定儀北京泰克儀器有限公司生產(chǎn)；2F-C型三用紫外分析儀上海康樂(lè)光電儀器有限公司生產(chǎn)；電熱恒溫水浴鍋北京市永光明醫(yī)療儀器廠生產(chǎn)；EYBLA旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀上海愛(ài)朗儀器有限公司生產(chǎn)；SHZ-D9(Ⅲ)循環(huán)水式真空泵鞏義市予華儀器有限責(zé)任公司生產(chǎn)；電子分析天平AR1140；托盤(pán)天平。

蘆丁對(duì)照品(中國(guó)生物制品鑒定所)；

石油醚、無(wú)水乙醇、亞硝酸鈉、NaOH以及硝酸鋁均為分析純。水為蒸餾水。

1.2 方法

1.2.1 對(duì)照品和供試品溶液制備

1)對(duì)照品溶液制備

精密稱取蘆丁對(duì)照品5.00 mg，置50ml容量瓶中，用60%乙醇溶液溶解定容，配成濃度為 0.1mg/ml的對(duì)照品溶液。

2)供試品溶液制備

從 3個(gè)紅花樣品中各取 1 g，粉碎(40目)，得紅花粗粉。在250 ml圓底燒瓶中加入經(jīng)稱量的 1.00g的紅花粉末 ，并標(biāo)號(hào) 1，2，3。向裝有紅花樣品的圓底燒瓶中加入60%乙醇溶液，加至瓶頸處。對(duì)溶液進(jìn)行充分搖動(dòng)，隨后進(jìn)行超聲分離，時(shí)間為30min。超聲分離處理后放在室溫下進(jìn)行冷卻處理。待溶液冷卻后用60%乙醇溶液定容到 100 ml的容量瓶當(dāng)中，靜置備用。

1.2.2 線性關(guān)系考察

精密移取蘆丁對(duì)照品溶液1.0，2.0，3.0，4.0，5.0ml分別置于10ml比色管中，加60%乙醇稀釋至5.0ml。將5ml60%的乙醇溶液作為空白，并向其中加入0.3 ml5%NaNO3。對(duì)混合液進(jìn)行充分搖勻，隨后進(jìn)行靜置處理6分鐘。靜置處理結(jié)束后向其中加入0.3 ml的10%硝酸鋁溶液。對(duì)混合液進(jìn)行充分搖勻，最后進(jìn)行靜置處理6分鐘。靜置結(jié)束后向混合液中加入4ml的4%NaOH溶液。將混合液充分搖勻，隨后靜置處理12分鐘。靜置結(jié)束后，將波長(zhǎng)設(shè)定為510 nm，對(duì)蘆丁對(duì)照組進(jìn)行吸光度的測(cè)定。利用Excel表對(duì)試驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行處理得到蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線，蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)如表1所示。

如圖1所示，橫坐標(biāo)為蘆丁濃度，縱坐標(biāo)為吸光度值A(chǔ)?；貧w方程y = 12.16x - 0.0138, R2= 0.9977。

試驗(yàn)結(jié)果表明，在0.01-0.05mg/ml范圍內(nèi)，蘆丁線性關(guān)系良好。

表1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線數(shù)據(jù)

圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線圖

1.2.3 精密度試驗(yàn)

以蘆丁作為對(duì)照組。加入60%的乙醇，并進(jìn)行稀釋。稀釋到5.0ml。向稀釋后的蘆丁乙醇混合液當(dāng)中加5%的NaNO2溶液0.3 ml。將混合液充分搖勻。隨后進(jìn)行靜置處理6 分鐘。靜置結(jié)束后加入10%的AlNO3溶液0.3 ml。將混合液進(jìn)行充分的搖勻，隨后靜置處理6 分鐘。靜置結(jié)束后加入4%的NaOH溶液4.0 ml以及60%的乙醇溶液0.4 ml。將混合液進(jìn)行充分搖勻，隨后靜置處理12分鐘。將波長(zhǎng)設(shè)定為510 nm，對(duì)對(duì)照組溶液的吸光度進(jìn)行測(cè)定。

對(duì)對(duì)照組溶液進(jìn)行6次重復(fù)測(cè)定。對(duì)6次的測(cè)定結(jié)果進(jìn)行相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)偏差的計(jì)算。

計(jì)算結(jié)果為：RSD=0.2%。從表2實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)中可以看到，本實(shí)驗(yàn)具有良好的精密度。

表2 精密度試驗(yàn)結(jié)果

1.2.4 穩(wěn)定性試驗(yàn)

通過(guò)對(duì)來(lái)源于海暉藥店的紅花材料進(jìn)行處理，得到其紅花提取液。對(duì)紅花提取液進(jìn)行重復(fù)性測(cè)試。根據(jù)上文的方法進(jìn)行測(cè)定。即在紫外線吸收波長(zhǎng)最大處對(duì)其吸光度進(jìn)行測(cè)定。選取海暉紅花樣品2ml,每隔10min測(cè)一次。從表3中可以看到，在波長(zhǎng)為510nm時(shí)，對(duì)紅花提取液當(dāng)中總黃酮含量進(jìn)行測(cè)定,試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明吸光度具有一定的穩(wěn)定性。試驗(yàn)結(jié)果表明該試驗(yàn)具有良好的重復(fù)性。

表3 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.2.5 重復(fù)性試驗(yàn)

通過(guò)對(duì)來(lái)源于人民同泰藥店的紅花材料進(jìn)行處理，得到其紅花提取液。對(duì)紅花提取液進(jìn)行重復(fù)性測(cè)試。根據(jù)上文的方法進(jìn)行測(cè)定。即在紫外線吸收波長(zhǎng)最大處對(duì)其吸光度進(jìn)行測(cè)定。從表4中可以看到，在波長(zhǎng)為510nm時(shí)，對(duì)紅花提取液當(dāng)中總黃酮含量進(jìn)行測(cè)定,試驗(yàn)數(shù)據(jù)表明吸光度具有一定的穩(wěn)定性。試驗(yàn)結(jié)果表明該試驗(yàn)具有良好的重復(fù)性。

表4 穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)結(jié)果

1.2.6 回收率試驗(yàn)

供樣液為總黃酮提取物溶液,分別取供樣液 110ml 、115ml 、2ml 、215ml 、3ml分置與比色管當(dāng)中。加入蘆丁對(duì)照液110ml。充分混合均勻。如表5進(jìn)行回收率實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)，按照1.2.4所述的方法進(jìn)行測(cè)定。

表5 回收率實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)表格

1.2.7 新疆產(chǎn)紅花含量測(cè)定

取已制備好的3份樣品溶液測(cè)定，以60%乙醇為空白溶液，在510nm處測(cè)定。每個(gè)樣品進(jìn)行3次重復(fù)試驗(yàn)。根據(jù)得到的標(biāo)準(zhǔn)曲線對(duì)新疆產(chǎn)紅花當(dāng)中所含的總黃酮進(jìn)行測(cè)定。

2 結(jié)果與討論

表6 紅花總黃酮含量測(cè)定

表6中，紅花總黃酮含量的結(jié)果表明：新疆A地紅花總黃酮含量為1.08%,新疆B地紅花總黃酮含量為1.76%,新疆C地紅花總黃酮含量為1.22%。新疆三地中B地的紅花總黃酮含量較高。

本研究中實(shí)驗(yàn)設(shè)計(jì)精密度良好，具有一定的穩(wěn)定性，實(shí)驗(yàn)結(jié)果具有較高的可信度，為當(dāng)前測(cè)定新疆紅花總黃酮含量提供了簡(jiǎn)便且可行的辦法。本文通過(guò)紫外分光光度法對(duì)新疆產(chǎn)紅花當(dāng)中的有效化學(xué)活性物質(zhì)總黃酮進(jìn)行了含量上的定量測(cè)定，對(duì)新疆紅花質(zhì)量做了評(píng)價(jià)，在紅花質(zhì)量評(píng)價(jià)上形成了一個(gè)簡(jiǎn)要的研究方向，同時(shí)也為紅花質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的評(píng)定給出了一定的依據(jù)。此外，本文對(duì)新疆產(chǎn)紅花品質(zhì)情況做了具體的闡述，為新疆紅花產(chǎn)業(yè)的進(jìn)一步壯大發(fā)展提供了方向。

3 結(jié)論

當(dāng)前我國(guó)栽培紅花已經(jīng)有2000年，我國(guó)紅花栽培上除了用于提煉油脂以及人工色素以外，更重要的是作為中藥材入藥[7]。紅花在市場(chǎng)上的價(jià)格較高，有不法分析為例獲得更高的利益不惜制假，以次充好，輕者利用低等級(jí)紅花冒充高等級(jí)紅花，重者造假制假。這些非法行為不僅為紅花市場(chǎng)帶來(lái)了一定的干擾，而且嚴(yán)重影響了新疆紅花的信譽(yù)度。通過(guò)切實(shí)有效簡(jiǎn)單的方法測(cè)定紅花中有效成分含量以此判斷市場(chǎng)上紅花質(zhì)量定將成為紅花市場(chǎng)進(jìn)行質(zhì)量鑒定的重要手段。

[1] Obara H., J.Onodera. The structure of carthamin ,a component of safflower [J].ChemistryLetters,1979,(12).

[2]OnoderaJ.,H.Obara&M.Osone,etal.Thestructureofsaffomin-A,acomponentofsaffloweryellow[J].ChemistryLetters,1981,(16).

[3]OnoderaJ.,H.Obara&R.Hirose,etal.ThestructureofsaffominC,aconstituentofsafflower[J].ChemistryLetters, 1989,(9).

[4]MeselhyR．,S．Kadota&Y.Momose,etal.TwoNewQuinochalconeYellowPigmentsfromCarthamustinctoriusandCa2+AntagonisticActivityefTinctormine[J].Chemical&PharmaceuticalBulletin, 1993, (10).

[5]KimM.N.,F.L.Scao-Bogaert&M.Paris.FlavonoidsfromCarthamustinctoriusFlowers[J].PlantaMedica,1992,(3).

[6] 董順福，韓麗琴，趙文秀，等.中藥紅花總黃酮及微量元素含量的分析研究[J].光譜學(xué)與光譜分析，2008,(1).

[7] 陳雪英，李頁(yè)瑞，陳勇，等.近紅外光譜快速測(cè)定紅花逆流提取過(guò)程中羥基紅花黃色素A的含量[J].分析化學(xué)，2009，(10).

[編校：張芙蓉]

Determination of Total flavone Content in Xinjiang Safflower by Ultraviolet Spectrophotometry Method

XING Xiaoke, HUANG Fei

XuchangVocationalTechnicalCollege,XuchangHenan461000)

The paper determines the total content of flavonoids in Xinjiang safflower by UV-Vis. The test results run as follows: the total content of flavonoids in Xinjiang B safflower is1.76%.; the total content of flavonoids in Xinjiang C safflower is1.22%; the total content of flavonoids in Xinjiang A safflower is1.08%. Thus the conclusion can be made: the content of flavonoids in Xinjiang B is the highest.

Xinjiang safflower; the total content of flavonoids; UV-Vis

2015-07-15

邢曉軻(1980- )，女，河南禹州人，講師，研究方向?yàn)榉治龌瘜W(xué)。

R284

A

1671-9654(2015)03-056-04